检验医学学科临床带教师资规范化培训需求及重要性研究

目的 了解检验医学学科临床带教师资规范化培训的需求及其重要性。方法 自拟开放式问卷调查表,选取中华医学会江苏省检验医学分会有过带教经历的实验室专业人员作为调查对象,了解其对临床带教师资规范化培训的需求及其重要性的认知。结果 有效调查201人,仅29.35%的临床检验带教教师在带教前接受过培训,其中99.50%的调查对象认为临床带教师资的培训很重要。培训重要性的主要表现在4个方面:培育临床带教者的胜任力、加强知识体系、规范化培训一致性和结构化有助于临床实践、有助于提高学生的培训质量。结论 检验医学学科临床带教师资的培训需求高且重要。临床带教师资的能力建设和提高应该是一个持续的过程,它包括态度、知识和技能等多方面的培训。建议应由国家专业学会和/或组织尽快制定规范化的临床带教师资培训方法,以供借鉴。

胃癌患者外周血CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞检测及临床意义

目的观察CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞与胃癌患者的关系,探讨其临床意义。方法用流式细胞术分析胃癌患者外周血淋巴细胞中Treg细胞的表达。结果胃癌患者手术前、后外周血淋巴细胞中Treg细胞比例分别为(6.35±1.85)和(4.54±1.42)%(P<0.05),术后复发时比例为(7.17±1.55)%;化疗前、后分别为(6.47±1.97)%和(8.81±2.01)%(P<0.05)。早期胃癌Treg细胞为(5.88±1.54)%,明显低于进展期胃癌(7.04±1.66)%(P<0.05)。结论胃癌患者外周血Treg细胞在术后1周比例减少,复发时比例上调,提示其参与了胃癌发生、发展的全过程。化疗后Treg细胞增加,可能与药物诱导的增值分化有关。不同进展期病人外周血中Treg细胞的水平有助于了解病情,判断预后。

医学检验专业医师型人才培养探索与实践

高等院校专业的教学课程体系和教学模式直接关系到学生的知识结构,关系到这个专业的人才培养质量。目前我国的五年制医学检验专业的教学大纲、教学内容和专业课程设置,比较接近美国实验室技师的培养内涵。为了适应21世纪医学发展的新形势,各级医院迫切需要有检验和临床有机结合的人才,即检验医师,它作为检验与临床之间架起的桥梁,不仅要掌握检验技术,又需熟悉临床知识。因此,医学检验专业医师系列培养的教学改革势在必行,它对培养具有创新精神和实践能力的高素质检验医学人才具有十分重要的意义。

急性胰腺炎急性期血清TNF-α、IL-6和IL-10变化的实验研究

目的 研究急性胰腺炎急性期血清TNF -α、IL - 6和IL - 10的变化。方法 分别以 1%和 5 %牛磺胆酸钠 (0 .1ml/ 10 0 g)胰胆管注射建立急性水肿性胰腺炎 (AEP)和急性坏死性胰腺炎 (ANP)模型。雄性SD大鼠 48只随机平均分为Sham(假手术 )组、AEP组、ANP组 3组。分别于造模后 3h、6h处死 8只动物 ,分别观察血清TNF-α、IL - 6和IL - 10的变化。结果 ANP组和AEP组血清TNF -α、IL - 6和IL - 10显著升高 (均P <0 .0 0 1)。造模后 6h的血清TNF -α、3h和 6h的血清IL - 6、IL - 10在ANP组均较AEP组为高 (分别P <0 .0 5、P <0 .0 0 1、P <0 .0 5 )。ANP组血清TNF -α、IL - 6水平在造模后 6h比 3h为高 (均P <0 .0 5 )。结论 在急性胰腺炎病程中细胞因子 (TNF -α、IL - 6、IL - 10 )起了重要的作用。IL - 6有助于早期判断胰腺坏死。

急性胰腺炎急性期胰腺病理与血清细胞因子的关系

目的 探讨急性胰腺炎急性期胰腺病理与细胞因子的关系。方法 逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠或生理盐水建立模型 ,检测 3h和 6 h血清 TNF- α、IL- 6、IL- 1 0和 IL- 1 β。观察胰腺大体和镜下病理的改变。结果 血清 TNF- α、IL- 6、IL- 1 0在 3h和 6 h时段的各组间差异均非常显著 ,P<0 .0 1。血清 L- 1 β未能测出。血清细胞因子与大体病理评分和镜下理评分呈正相关。结论 血清 TNF- α水平与 IL- 6和 IL- 1 0水平呈正相关 ,说明后两者与前者的关系密切。IL- 1 0的升高可能系炎症早期的一种代偿性反应。

5-氟脲嘧啶对急性胰腺炎病程中细胞因子的影响

目的 观察 5 Fu对急性胰腺炎 (AP)病程中TNF α、IL 6和IL 10的影响 ,探讨其治疗价值。方法 以 5 %牛磺胆酸钠溶液 (0 1ml/ 10 0 g)逆行胰胆管注射建立急性坏死性胰腺炎 (ANP)模型。雄性SD大鼠 48只 ,随机平均分为三组 :假手术组 (Sham组 ) ;ANP组 ;5 Fu组。ANP模型建立后经股静脉注射 5 Fu 4 5mg/ 10 0g。观察术后 3小时、6小时 (每时间段 8只大鼠 )血清TNF α、IL 6、IL 10、血清淀粉酶和胰腺组织学病理改变。结果 (1)ANP组 3h、6h血清淀粉酶明显升高 (P <0 0 1) ,同时血清TNF α、IL 6和IL 10水平均明显高于Sham组 (P <0 0 0 1)。 (2 ) 5 Fu处理后 3h血清淀粉酶及胰腺组织学评分均降低 (P <0 0 5 )。在 3h、6h血清TNF α水平均降低 (P <0 0 5 ) ;血清IL 10水平亦下降 (P <0 0 1、P <0 0 5 ) ;而血清IL 6水平仅在 3h时降低 (P <0 0 1)。结论 TNF α、IL 6和IL 10在AP病程中起了重要的作用。 5 Fu抑制了AP病程中细胞因子的产生 ,对其治疗有益 。

大鼠全脑照射后脑内炎性细胞因子含量的变化

目的:观察大鼠全脑照射后早期主要炎性细胞因子含量的变化。方法:对SD大鼠用4MeV电子线单次全脑15 Gy和30 Gy照射后,用酶联免疫吸附试验法检测照射后6 h、1 d、1 w和1个月大鼠大脑皮层中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量。结果:与正常对照组和麻醉后对照组相比,15 Gy单次全脑照射后1月内各组以及30 Gy后1 d、1 w组,大鼠大脑皮层上清波中三种细胞因子的含量无异常变化;在30 Gy照射后6 h组皮层中IL-1β和TNF-α有明显升高,含量达536 pg/g与339 pg/g,IL-6在大脑皮层中的含量没有差别。结论:大鼠全脑照射后6 h脑组织中就有一些炎性细胞因子的升高,它们在放射性脑损伤的发病机制中可能有重要的作用。

奥曲肽对急性胰腺炎治疗价值的实验研究

目的观察奥曲肽对实验性急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-10的影响,探讨其治疗价值。方法雄性SD大鼠48只,随机平均分为3组:假手术组、ANP组和奥曲肽组。ANP模型以胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠液(0.1 mg/100 g体重)复制。奥曲肽组为ANP模型建立后30 min经股静脉注射奥曲肽0.9μg/100 g体重。假手术组为胆胰管逆行注射等量生理盐水。观察ANP 诱导术后3 h、6 h血清TNF-α、IL-6、IL-10、血清淀粉酶、腹水量、胰腺大体和组织学的病理改变。结果(1)ANP组3 h、6 h血清淀粉酶明显升高(P<0.01),血清TNF-α、IL-6和IL-10水平也均明显高于假手术组(P<0.001)。(2)奥曲肽组血清淀粉酶、IL-6、IL-10和胰腺组织学评分与ANP组比较无差异,但ANP后3 h、6 h血清TNF-α水平降低(P<0.01),6 h时的腹水量较ANP组减少(P<0.05)。结论奥曲肽降低了ANP时血清TNF-α水平,对急性胰腺炎的治疗可能有益。

浆膜腔积液脱落细胞DNA倍体分析在肿瘤良恶性判断中的应用

运用流式细胞仪 (FCM)对 78例肿瘤患者浆膜腔积液中的脱落细胞进行DNA倍体分析 ,判断肿瘤的良恶性 ,其结果与临床诊断符合率为 88.5 % ,同时对其中 6 0例患者的肿瘤组织块进行DNA倍体分析 ,两者结果符合率为95 .0 %。认为 ,对浆膜腔积液脱落细胞进行DNA倍体分析是判断肿瘤良恶性的一种方便有效的辅助手段。

急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡分析方法的比较

目的探讨牛磺胆酸钠所诱导的急性胰腺炎急性期胰腺细胞凋亡现象的特点和作用。方法大鼠造模、分组、取材后采用电镜定性检测,DNA末端原位染色法检测(TUNEL)和流式细胞仪定量检测(FCM)。结果①电镜检测:对照组胰腺腺泡细胞超微结构正常;水肿组自噬空泡形成,凋亡细胞和凋亡小体出现。坏死组早期凋亡和坏死可以并存,且凋亡现象较水肿组明显;②TUNEL检测:除了在3h时段坏死与对照组间差异非常显著(P<0.01)、水肿与对照组间差异显著(P<0.05)外,其余组间差异均无显著性,但以坏死组凋亡现象最为明显;③FCM检测:TUNEL与FCM检测结果呈正相关。结论凋亡只是一种代偿,可能减轻病情的严重程度,但他只是在一定限度内发挥着积极作用。

肺癌中腺癌与鳞癌肿瘤细胞P-糖蛋白的表达差异

目的研究肺癌患者中腺癌与鳞癌肿瘤细胞多药耐药性(multidrugresistant,MDR)的表达。方法应用流式细胞仪检测35例患者肿瘤细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果35例患者中20例腺癌患者的P-gp阳性率明显高于15例鳞癌患者,差异有显著性(P<0.05)。结论P-gap高表达可能是非小细胞肺癌产生内在耐药性的机制之一。

干扰素-λ1/白介素-29抑制脓毒症患者血清C5a诱导的中性粒细胞胞外诱捕网相关的凝血酶生成

目的探讨脓毒症血栓形成的炎症环境中血清来源C5a补体能否激活多型核中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMNs)释放中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs),以及干扰素-λ1/白介素29(interferon-λ1/interleukin 29,IFN-λ1/IL-29)是否具有抑制NETs相关凝血酶生成的作用。方法健康志愿者和脓毒症患者的外周血样分别来自2018—2019年苏州大学附属第二医院门诊和住院部,体外研究脓毒症患者血清C5a刺激的健康志愿者外周血分离的PMNs细胞,IL-29和抗CD88单抗作为NETs释放调节因子,免疫荧光分析(immunofluorescence,IF)PMNs上NETs的释放水平,免疫印迹技术(immuno blot,IB)评估PMNs上组织因子(tissue factor,TF)的表达,荧光光谱法(fluorescence spectroscopy,FS)测定上清液中循环DNA水平,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定凝血酶-抗凝血酶(thrombin-antithrombin,TAT)复合物水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果以脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs表达水平(20.5±3.7)%为对照组,IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF表达的NETs释放,采用IF技术测定的表达水平分别为(5.0±1.5)%、(7.3±3.1)%,差异均有统计学意义(q=9.23和8.73,均P<0.01)。IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF水平,IB测定的TF表达水平分别为(0.52±0.03)%、(0.57±0.02)%,与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs的TF表达水平(0.81±0.03)%进行比较,差异均有统计学意义(q=3.44和3.21,均P<0.05)。IL-29和抗CD88单抗降低了NETs相关的TAT复合物的水平,分别为(3.3±0.4)ng/mL、(4.6±0.7)ng/mL,与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs相关的TAT复合物水平(7.8±0.7)ng/mL比较,差异均有统计学意义(q=6.77和5.27,均P<0.01)。结论脓毒症患者血清来源的C5a诱导健康志愿者PMNs内TF的累积和表达TF的NETs释放,血清C5a促进了NETs依赖性凝血酶的生成。IL-29具有抑制C5a诱导的NETs释放及其相关的凝血酶生成。

脓毒症患者中性粒细胞胞外诱捕网的定量研究

目的建立流式细胞术(FCM)检测中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的表达方法,探讨NETs在脓毒症相关凝血功能障碍(SAC)患者中的临床诊断价值。方法收集2018年5月至2019年6月苏州大学附属第二医院50例非脓毒症者和21例脓毒症患者抗凝血。脓毒症患者符合3.0定义的诊断标准,血培养鉴定出革兰氏阴性菌,D二聚体含量>0.5 mg/L,彩色多普勒超声检查显示血栓形成,即时收集外周血样。采用别藻蓝蛋白(APC)标记的白细胞分化抗原66b(CD66b)识别多型分叶核细胞(PMNs),异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗髓过氧化物酶(MPO)抗体耦联PMNs膜表面MPO,Sytox orange(SO)核酸染料标记脱氧核糖核酸(DNA),建立FCM检测全血NETosis相关标志物方法。7-氨基放线菌素D(7-AAD)染料观察溶血对细胞膜完整性的影响,进行NETosis相关标志物(SO/MPO)的特异性检测。受试者工作特征(ROC)曲线分析NETosis相关标志物和白细胞总数(WBC)在SAC患者中的灵敏度和特异性,用Mann-Witney统计量的非参数法估计ROC曲线下面积(AUC),AUC的比较采用配对设计的两相关诊断试验差异假设检验。结果全血分离的PMNs与FACS试剂溶血后的PMNs对7-AAD的阴性表达率比较,两者差异无统计学意义[(95.1±6.6)%比(93.5±5.7)%,t=1.984,P>0.05]。NETosis相关标记物SO/MPO不能识别Etoposide药物诱导的PMNs凋亡(Apoptosis)。ROC曲线分析SAC患者的AUC,NETosis相关标记物取2.5%时的AUC高于WBC取8.0×109/L时的AUC(0.97比0.72,Z=2.011,P<0.05),差异有统计学意义。结论 FCM检测外周全血PMNs上NETosis相关标志物具有良好的敏感性、特异性,在SAC诊断中有重要临床价值。

类风湿关节炎患者Th1、Th17细胞的表达

目的分析类风湿关节炎(RA)患者外周血和关节滑液中Th极化细胞(Th1、Th17细胞)的表达。方法流式细胞技术测定RA患者外周血、关节滑液中CD4T细胞上IFN-γ+IL-17-(Th1)、IL-17+IFN-γ-(Th17)的表达,并与健康人比较,分析疾病活动指数(DAS28)和Th极化细胞表达量、Th1/Th17比值之间的关系。结果RA患者关节滑液Th1、Th17细胞的平均百分比与RA外周血、健康人外周血比较,差异有统计学意义(P<0.01)。RA患者关节滑液中Th1细胞、Th1/Th17细胞比值与DAS28指数呈正相关(P<0.01)。结论在RA疾病部位关节液中是Th1细胞占优势,且Th1细胞的表达与疾病活动性密切相关。

特异性细胞因子对T辅助17细胞和T调节性细胞表达的调节作用

目的探讨多种细胞因子包括转化生长因子B（TGF—β）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素2（IL-2）对CD2T淋巴细胞的分化调节作用。方法将人外周血T淋巴细胞、鼠脾脏T淋巴细胞在不同的刺激条件下进行体外培养，采用流式细胞仪分析活化T淋巴细胞中CD4^＋ IL-17^＋T辅助17细胞（Th17细胞）、CD8^＋ IL-17^＋T淋巴细胞、CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T调节性细胞（Treg细胞）的表达情况。结果鼠脾脏T淋巴细胞培养液中有TGF—β存在时可促进Treg细胞、Th17细胞和CD8^＋ IL-17^＋T淋巴细胞分化，表达水平分别为（7．8±2．2）％、（12．6±3．1）％、（10．1±2．6）％。无细胞因子培养的同类细胞为实验对照组，表达水平分别为（4．8±0．6）％、（1．7±0．5）％、（1．0±0．4）％，差异均有统计学意义（q=4．09、8．80、9．61，P〈0．05或P〈0．01）。TGF—β与IL-6细胞因子共同存在时可促进Th17和CD8^＋ IL-17^＋T淋巴细胞分化，表达水平分别为（17．8±5．3）％、（15．0±4．2）％，而分化受抑制的Treg细胞的表达水平为（4．1±1．2）％，与TGF—β组同类细胞表达水平比较差异均有统计学意义（9：5．03、5．17、5．04，P均〈0．01）。在TGF—β刺激的T淋巴细胞中加入IL-2细胞因子可使Th17细胞、CD8^＋ IL-17^＋T淋巴细胞表达减少，同时伴有Treg细胞表达量的增加；在加入抗IL-2后结果相反，即Th17细胞、CD8^＋ IL-17^＋T淋巴细胞表达水平增加，Treg细胞表达水平减少。人外周血T淋巴细胞上Th17、CD8^＋ IL-17^＋、Treg细胞表达水平变化趋势与鼠脾脏淋巴细胞相似。结论不同细胞因子对于调控Th17细胞和Treg细胞之间的平衡起着十分重要的作用。

IFN-λ1(IL-29)通过自噬抑制抗磷脂综合征血清刺激的中性粒细胞胞外诱捕网相关凝血酶的生成

目的探讨抗磷脂综合征(APS)血栓形成的炎症环境中自噬是否参与多型核中性粒细胞(PMNs)释放中性粒细胞胞外诱捕网(NETs),以及IFN-λ1(IL-29)是否具有抑制NETs相关凝血酶生成的作用。方法体外研究活动期APS患者血清刺激健康志愿者外周血分离的PMNs,IL-29和3-甲基腺嘌呤(3-MA)作为NETs释放和自噬的调节因子,通过免疫荧光技术(IFT)和流式细胞术(FCM)评估NETs的表达,Western blot检测自噬相关蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定凝血酶-抗凝血酶(TAT)复合物水平。结果将APS患者血清刺激健康人PMNs释放的NETs作为对照组,其免疫荧光技术检测表达水平为(22.8±3.1)%,流式细胞术分析表达水平为(10.1±2.7)%。IL-29和3-MA抑制了APS患者血清刺激的健康人PMNs上NETs的释放,免疫荧光技术检测表达水平分别为(5.3±2.2)%和(4.9±2.4)%,流式细胞术分析的表达水平分别为(2.1±1.3)%和(2.7±1.4)%,与对照组相比差异均有统计学意义(q=9.89、10.67、11.74、9.61,P均<0.01)。IL-29抑制了APS患者血清刺激的健康人PMNs上LC3B的表达,促进了p62的表达,与APS患者血清刺激的健康人PMNs中自噬相关蛋白的表达水平相比,差异均有统计学意义[LC3B/GAPDH:(0.28±0.03)%vs(0.77±0.06)%,q=8.65;p62/GAPDH:(0.63±0.05)%vs(0.33±0.03)%,q=4.78;P均<0.01]。IL-29和3-MA降低了NETs相关TAT复合物的水平,与APS患者血清刺激健康人PMNs释放的NETs相关TAT复合物水平比较,差异均有统计学意义[(3.1±0.5)ng/ml和(4.7±0.4)ng/ml vs(7.6±0.6)ng/ml,q=6.34和5.15,P均<0.01]。结论自噬机制参与了APS血栓形成患者血清刺激的健康人PMNs中NETs的释放以及随后的凝血级联激活,IL-29通过抑制自噬减少NETs的生成以及其相关凝血酶的产生。

细胞因子诱导的人脐血CD4 T细胞Th17极化态的建立

目的建立一个合理的CD4T细胞极化的体外细胞培养方法,研究细胞因子刺激的人脐血CD4T细胞极化时产生IL-17的效应/记忆T细胞(Th17细胞)的表达。方法用TGF-β、抗IL-4、抗IFN-γ、IL-6、IL-1β活化幼稚脐血CD4T细胞,促成Th17细胞表型,IL-23具有维护功能。用流式细胞术分析在Th17极化态和Th0非极化态时CD4T细胞上IL-17和IFN-γ的表达,同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养上清液中IL-17和IFN-γ的水平。结果IL-17+IFN-γ-(Th17)细胞比例在Th17极化态时为(28±2.3)%,非极化态时为(3.2±0.4)%;培养上清液中分泌的IL-17浓度在Th17极化态时为(7350±1530)pg/ml,非极化态时为(218±32)pg/ml,两项指标在Th17极化态时都显著高于非极化态时,差异均有高度统计学意义(P<0.001)。结论多种细胞因子刺激的CD4T细胞极化时促进了IL-17产物的表达,体外Th17极化态的建立为研究IL-17相关的免疫性疾病提供了一个平台。