青霉素结合蛋白PBP 2b基因的克隆与表达

在已知基因序列但缺乏DNA模版的情况下,人工设计合成多条引物,采用重叠PCR技术体外人工合成编码青霉素结合蛋白的基因PBP 2b。将合成的PBP 2b基因连接到载体pet-30a上,并将重组表达载体(pet-30a)/PBP2b-tiger转入T7 expression E.coli表达菌株中。重组工程菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE鉴定,发现青霉素结合蛋白(PBPs)成功表达。本研究构建了高表达青霉素结合蛋白(PBPs)的原核表达系统,制备出青霉素结合蛋白,从而为进一步从基因水平认识青霉素结合蛋白(PBPs)奠定基础,为了解细菌耐药的机制提供依据。