猪源大肠杆菌的耐药性与锌抗性相关性的研究

为了解猪源大肠杆菌的耐药性与大肠杆菌对重金属锌抗性的现状,探究耐药基因与锌抗性基因的流行特征及二者之间的相关性,本研究采集普通猪场(A猪场)、从未使用过抗生素生长促进剂(AGP)的猪场(B猪场)以及未使用氧化锌和AGP的猪场(C猪场)共335份粪便样品,分离大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定大肠杆菌分离株对10种抗菌药物和硫酸锌的敏感性,并采用PCR检测分离菌的耐药基因和锌抗性基因。结果显示,在335份采集样品中共分离出288株大肠杆菌。药敏试验结果显示,猪源大肠杆菌对四环素耐药的菌株数占比最高达95.83%(276/288),对呋喃妥因和多粘菌素B的耐药菌株占比最低,分别占7.99%(23/288)和12.15%(35/288),其中A猪场大肠杆菌分离株对10种抗生素的耐药占比均高于B猪场。抗性基因检测结果显示,锌抗性基因zitB检出率最高达99.65%,还检出了较高水平的锌抗性基因czcB、czcA及zntA;β-内酰胺类耐药基因ampC检出率为98.26%,氯霉素类耐药基因cat1检出率仅为4.86%。其中A猪场与B猪场的4种锌抗性基因检出率均高于C猪场。相关性分析结果显示,锌抗性基因zntA、czcA、czcB对四环素类耐药基因tetA呈显著正相关(P<0.05),与多粘菌素类耐药基因mcr-1呈极显著负相关(P<0.01)。其中锌抗性基因zntA、czcA与耐药基因cmlA、qnrs、nfsA和nfsB均为极显著的正相关(P<0.01)。上述结果首次表明重金属锌可能诱导了动物肠道大肠杆菌的耐药性以及多重耐药表型,并且抗生素可能会影响猪大肠杆菌的锌抗性。本研究为后期养殖场抗生素及氧化锌的合理使用提供重要参考。

三沙湾大肠杆菌和肠球菌抗生素耐药性分析

为探究三沙湾水域细菌耐药性的情况,本文分离了该海域11株大肠杆菌和12株肠球菌,并测定其对常见抗生素的耐药性以及相关耐药基因。结果显示:大肠杆菌对抗生素的耐药率从高到低为四环素=氨苄西林>氯霉素=头孢唑啉>头孢噻肟=呋喃妥因>庆大霉素>环丙沙星,其中大肠杆菌对氨苄西林存在明显的高水平耐药(MIC≥256μg/mL占36.36%),TEM基因可能是导致耐药的主要基因。肠球菌对抗生素的耐药率从高到低为利福平>呋喃妥因>红霉素>氨苄西林=氯霉素=万古霉素,其对呋喃妥因存在明显的高水平耐药(MIC≥128μg/mL占74.93%)。肠球菌中仅检出喹诺酮类耐药基因gyra和四环素类耐药基因tetM、tetG。该海区存在着明显的多重耐药现象,大肠杆菌和肠球菌的多重耐药率分别达到54.55%和100%,表明三沙湾海域可能存在较为严重的抗生素耐药菌与耐药基因污染。

土霉素残留对模型池塘生态系统代谢的影响

按生态学方法建立和培育模型池塘生态系统,选择符合要求的生态池,设立一个空白对照池和4个不同浓度用药池,用药后定期观测生态池溶解氧(DO)、pH值、初级生产力(P/R)等参数的变化.结果表明,100mg/L用药造成系统不可逆性的破坏;20mg/L和4mg/L浓度的用药对系统参数造成的影响比较短暂,系统参数分别在2wk后和1wk后恢复正常;0.8mg/L用药对系统参数几乎不造成可测定的影响.

猪源万古霉素耐药肠球菌分离及表型和基因型检测

本研究旨在调查3个猪场不同猪群粪便中万古霉素耐药肠球菌(VRE)的分离率并进行耐药表型、基因型的测定,为万古霉素耐药肠球菌的流行病学提供基础数据。根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的方法进行耐药表型的测定,采用PCR法鉴定肠球菌并进行耐药基因的扩增,比较表型与基因型的一致性。结果从3个猪场250个粪便样本共分离出30株VRE。不同猪场不同猪群的分离率以哺乳仔猪最高,其次为保育仔猪、怀孕母猪和哺乳母猪,以大猪和公猪的分离率最低。耐万古霉素肠球菌均以土霉素的耐药率最高,为93.3%;以氨苄西林的敏感率最高,为80%。耐药基因检测2株为VanA阳性,12株为VanB阳性,7株为VanC1阳性,5株为VanC2/3阳性,4株未扩增出Van基因。本研究显示3个猪场均能分离到耐万古霉素肠球菌,各猪群耐药菌分离率与猪群接触抗菌药物的程度有一定的相关性,分离的VRE对6种抗生素具有不同程度的耐药,耐药表型与基因型基本一致。

猪场大肠杆菌耐药性的流行病学调查

按照美国临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的K irby-Bauer药敏纸片法,对从2个猪扬分离到的大肠杆菌进行了17种抗菌药物的敏感性测试.结果显示,从用药习惯和用药频率存在较大差异的新旧2个猪场分离到的大肠杆菌对这些抗生素的耐药情况比较接近,对大部分抗生素仅为程度上的差别.表明细菌耐药性形成有其特定规律,对某些抗生素的耐药性一旦形成,很难恢复到敏感状态.药物使用频率与多重耐药细菌的出现有直接的关系.

宠物犬粪肠球菌耐药性流行病学调查

为了解福州市宠物犬粪肠球菌耐药性的现状,采用美国临床实验室标准委员会(CLSI)推荐的肉汤微量稀释法及判定标准,调查了96株分离自宠物犬的粪肠球菌对6种抗菌药物的耐药性.结果显示:分离菌对土霉素和红霉素有高的耐药率,分别达到86.5%和72.9%,对环丙沙星和氯霉素的耐药率分别为22.9%和27.1%;分离菌对万古霉素和氨苄西林较为敏感,但分离菌对尚未用于动物疾病治疗的万古霉素存在2.1%的耐药率.试验结果初步揭示了福州市宠物犬粪肠球菌的耐药情况,提示临床不合理用药与耐药率之间存在一定的联系.

猪增生性肠炎研究进展

猪增生性肠炎是由细胞内劳森菌引起的猪的接触性传染病。它主要发生在 6～2 0周龄的生长肥育猪 ,临床主要表现为间歇性下痢、食欲下降和生长缓慢等。显微变化以回肠和结肠隐窝内未成熟的肠细胞发生腺瘤样增生为特征。该病目前已经在全世界流行 ,造成巨大的危害。由于病原学认识上的混乱以及诊断上的困难等原因 ,该病并未引起国内兽医界的充分重视。本文综述猪增生性肠炎研究的现状 ,对其病原学、流行病学、临床收稿日期 :2 0 0 0 -1 2 -2 2作者简介 :俞道进 (1 974 -) ,男 ,福建省福清市人 ,福建农林大学动物科学学院教师 ,现为华南农业大学动物医学系基础兽医学专业在职博士 ,主要从事兽医药理学的研究。症状、病理变化、诊断。

土霉素残留在模型池塘生态系统中的消除与迁移规律

按生态学方法建立和培育模型池塘生态系统，选择符合要求的生态池分别添加0.8mg·L^-1、4．0mg·L^-1、20．0mg·L^-1和100mg·L^-1盐酸土霉素，定期采集水样和底泥样品，用高效液相色谱方法进行药物浓度测定．结果表明，水中药物在用药后消除迅速，其消除半衰期分别为27．32h、34．10h、45．25h、56．07h．底泥中土霉素消除较缓慢，底泥0。2cm表层中的土霉素消除半衰期分别为38．18d、36．75d、46．75d、33．38d．底泥2～4cm中的土霉素消除半衰期分别为53．45d、59．58d、47．17d、50．83d．结果提示，底泥中的土霉素大部分以原形药物形式存在，并有明显的从表层向下层迁移的过程；土霉素的浓度对底泥中土霉素的半衰期和平均滞留时问无明显影响．

高效液相色谱法测定底泥中土霉素含量

为有效测定底泥中土霉素残留量,建立了底泥中土霉素残留的提取方法和高效液相色谱检测方法。底泥样品中的土霉素可以用EDTA缓冲溶液进行有效提取,经过HLB萃取小柱纯化和浓缩等步骤,底泥样品中土霉素的回收率为65.3%～70.1%。控制流动相为乙腈-0.01mol/L草酸溶液(12∶88,V/V);柱温为25℃;流速为1.0ml/min;350nm,紫外检测;以Hy-persilC18,BDS色谱柱对药物进行分离,在此色谱条件下土霉素的出峰时间为16.28min,该方法的最低检测限为0.01mg/kg。

浅谈非洲猪瘟的几点认知

一、非洲猪瘟（ASF）会最有可能进入猪场的方式从发病地区引种、买猪车或运送淘汰母猪的车的传播是最有可能的方式;其他方式可以是受污染的水源、受污染的饲料、人员污染、购入污染猪肉制品;对于某些猪场,感染野猪的直接传播也是重要的方式。地处山区有见过野猪出没的猪场在设立围栏,阻止野猪进入猪舍是非常有必要的。

黄连解毒散超微粉有效成分小檗碱在家兔体内的药代动力学研究

【目的】研究超微粉碎技术对黄连解毒散有效成分小檗碱的药代动力学影响。【方法】黄连解毒散分别制成超微粉和普通细粉,给家兔灌服,用HPLC法测定家兔体内小檗碱的血药浓度,血药浓度-时间数据经PKS(Pharmaceutical Kinetics Software)药代动力学分析软件处理,比较黄连解毒散超微粉和细粉中的小檗碱在家兔体内的药代动力学参数。【结果】黄连解毒散超微粉和细粉中小檗碱的药代动力学最佳模型均为一级吸收二室模型。其主要药动学参数分别是:吸收相半衰期(t1/2α)为1.08和1.33h,消除相半衰期(t1/2β)为28.72和23.56h,达峰时间(Tpeak)为1.480和1.934h,达峰浓度(Cmax)为0.0913和0.0565μg·ml-1,药时曲线下面积(AUC)为0.895和0.613(μg·ml-1)·h。与细粉比较,黄连解毒散超微粉达峰时间缩短;达峰浓度提高;药时曲线下面积增加。【结论】超微粉碎技术可以提高黄连解毒散有效成分小檗碱的生物利用度。

中药饲料添加剂对断奶仔猪免疫功能的影响

选取胎次相近、日龄相同的杜-长-大哺乳仔猪16窝,随机分为4组,前3个处理组在相同的基础日粮中分别添加中药饲料添加剂Ⅰ(4 kg/t)、中药饲料添加剂Ⅱ(4 kg/t)、金霉素(70 g/t)和杆菌肽锌(30 g/t)。于仔猪断奶前3 d、断奶后1,4,7,14,28 d采血,对免疫指标进行分析,研究中药饲料添加剂对断奶仔猪免疫功能的影响。结果表明:中药饲料添加剂能提高断奶仔猪血液红细胞数、白细胞数、淋巴细胞百分率,能促进断奶仔猪血清免疫球蛋白、补体的生成,显示中药饲料添加剂对断奶仔猪的免疫增强作用。

不同规模猪场种猪猪瘟抗体检测与猪瘟净化

采用HerdChek猪瘟抗体检测试剂盒检测福建省10个不同规模养猪场的种猪血清抗体,评价种猪群猪瘟免疫状况。结果表明:10个猪场种猪群猪瘟抗体平均合格率(抗体阻断率≥50%)为88.11%,猪瘟抗体平均不合格率(抗体阻断率<50%)为11.89%。随后对猪瘟抗体不合格的种猪注射猪瘟活疫苗加强免疫,28d后再次检测猪瘟抗体,10个猪场种猪群猪瘟抗体平均合格率达到91.44%,比首次检测提高了3.33个百分点,结合2次猪瘟抗体检测结果,淘汰加强免疫后猪瘟抗体不合格的种猪;并初步探讨了以抗体检测为基础的猪瘟净化措施。

中药饲料添加剂替代抗菌药物及促生长剂对生长肥育猪生产性能的影响

选用45头体重为10 kg左右的杜长大三元杂交断奶仔猪,将它们分为3组,比较3组生长肥育猪的生产性能.中药Ⅰ、Ⅱ组在基础日粮中分别添加中药饲料添加剂Ⅰ、Ⅱ号,对照组则添加抗菌药物和促生长剂.结果表明:与对照组比较,中药Ⅰ组日增重分别提高了6.54%、5.01%、4.49%和4.74%,料重比分别降低了1.55%、8.25%、5.65%和-0.03%;中药Ⅱ组日增重分别提高了1.44%、2.24%、4.12%和4.55%,料重比分别降低了-2.50%、6.01%、6.21%和1.08%,且2个中药添加组还能有效防止10-40 kg生长肥育猪的腹泻.表明饲料中添加中药饲料添加剂Ⅰ、Ⅱ号可以显著提高生长肥育猪的生产性能,在促进生长、提高抗病力方面的作用优于部分抗菌药物及促生长剂.

穿心莲超微粉有效成分在家兔体内的药动学研究

将穿心莲细粉和超微粉根据体质量以2 g.kg-1的剂量分别灌服家兔,HPLC法测定家兔体内穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的血药浓度,数据经PKS(Pharmaceutical Kinetics Software)药代动力学分析软件处理,比较穿心莲细粉和超微粉中2种成分的药代动力学参数。结果如下:穿心莲细粉和超微粉中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在体内的代谢过程均符合一级吸收二室模型。与细粉相比,家兔灌服超微粉后,穿心莲内酯的药时曲线下面积(AUC)提高59.86%,达峰时间(Tpeak)提前7.14 min,达峰浓度(Cmax)增大0.60%;脱水穿心莲内酯的AUC提高124.64%,Tpeak提前1.433 min,Cmax增大88.34%。上述结果表明,穿心莲经超微粉碎后,可显著提高其有效成分穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的生物利用度。

鱼腥草超微粉黄酮类成分HPLC指纹图谱的研究

利用高效液相色谱法建立了鱼腥草超微粉黄酮类成分的色谱指纹图谱。色谱条件:色谱柱为SHIM-PACKVP-C18柱(250mm×4.6mm,10!m),乙腈-1%甲酸梯度洗脱,流速为1.0ml/min,检测波长254nm。建立了鱼腥草超微粉HPLC指纹图谱,标定了7个共有峰。结论为利用HPLC指纹图谱可以较全面地控制鱼腥草超微粉的内在质量。

超微粉碎对黄连解毒散中栀子苷和小檗碱溶出的影响

应用高效液相色谱法(HPLC)比较了普通粉碎和超微粉碎对黄连解毒散中主要有效成分栀子苷和小檗碱溶出量的影响.结果表明,超微粉碎未改变黄连解毒散固有的药效学成分,可增加栀子苷和小檗碱的溶出量,在超声提取下超微细粉中栀子苷和小檗碱含量分别比细粉提高26.26%和37.07%.

肠道菌群多样性变性梯度凝胶电泳分析法的建立

采用珠磨法、冻融研磨法和酶法对粪便细菌进行裂解,提取粪便细菌DNA,并采用16SrRNAV3区引物(P3GCf、P2r)和V6V8区引物(U968GCf、L1401r)扩增细菌16SrRNA基因可变区,对变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法用于肠道菌群多样性分析的各种条件进行了优化,建立了分析人和动物粪便菌群多样性的DGGE方法。2对引物的粪便DGGE结果都表明,珠磨法和冻融研磨法对细菌的裂解效果优于酶法;P3GCf、P2r引物的条带数明显多于U968GCf、L1401r引物;珠磨法PCRDGGE对普通拟杆菌、青春双歧杆菌和粪肠球菌的检测限分别为(6.4±0.1)×102、(6.1±0.7)×103和(7.2±0.2)×105个细菌,珠磨法对这3种细菌的检测限均低于酶法。结果表明,珠磨法和P3GCf、P2r引物更适宜用于粪便菌群多样性DGGE分析。