鸭CYP7α1基因原核表达载体的构建及蛋白诱导表达

本研究旨在构建鸭重组表达载体pET32a-CYP7α1,获取其融合蛋白,为开展鸭CYP7α1蛋白在脂类代谢中作用的深入研究提供基础。试验以樱桃谷鸭为材料,通过克隆获得CYP7α1基因的ORF序列,并连接至原核表达载体pET32a中,构建了重组表达载体pET32a-CYP7α1,转入表达宿主Rossetta-gam(iDE3)进行诱导表达。结果表明CYP7α1基因ORF区共编码512个氨基酸,SDS-PAGE电泳分析表明,重组蛋白大小约为59 ku,其主要以包涵体的形式存在,其最佳诱导条件为温度37℃,时间4 h,IPTG浓度0.6 mmol/L。

日粮中添加微生态制剂对樱桃谷鸭生产性能的影响

试验旨在研究日粮添加不同水平微生态制剂对樱桃谷鸭生产性能的影响,确定最佳添加水平。选用1日龄樱桃谷鸭750只,随机分成5个组(试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组,Ⅴ组为对照组),每组设3个重复,每个重复50只。分别在基础日粮中添加500、1000、1500、2000和0mg/kg微生态制剂,饲养至42日龄。结果表明,添加1000和1500mg/kg的微生态制剂促生长效果显著高于对照组(P<0.05);添加1000mg/kg微生态制剂的肉鸭全程料重比最佳;添加500mg/kg的微生态制剂组对肉鸭增重不明显;添加2000mg/kg的微生态制剂组优于对照组和500mg/kg添加组,但差异不显著(P>0.05)。因此,日粮微生态制剂能促进樱桃谷肉鸭的增重、降低料重比,从而提高其生长性能、产肉性能及养殖效益,1000mg/kg微生态制剂能取得最佳料重比和经济效益,1500mg/kg微生态制剂能取得最佳产肉性能,由此可知,添加1000mg/kg微生态制剂为最佳添加水平。

广丰白翎鹅体重与体尺性状指标主成分分析

本研究测定了5.5月龄广丰白翎鹅体重与体尺性状指标,并进行了体重与体尺性状的主成分分析。结果表明,母鹅的体重与体斜长、龙骨长、胫围、跖长存在极显著相关(P<0.01),与其他各体尺指标均无显著相关性;公鹅的体重与体斜长、龙骨长、胫围、半潜水长、跖长、骨盆宽、胸宽存在极显著相关(P<0.01),与颈长显著相关(P<0.05)。从主成分的特征根和贡献率来看,第Ⅰ主成分主要反映体型外貌特征,第Ⅱ主成分主要反映体躯特征,第Ⅲ主成分主要反映颈部特征,第Ⅳ、第Ⅴ主成分主要反映胸部特征。广丰白翎鹅的体重和大部分体尺性状有显著相关关系,因此主成分分析指标对广丰白翎鹅的选种选育具有重要的意义。

鸭CYP7_α1基因克隆、序列分析及组织表达研究

旨在克隆鸭胆固醇7α羟化酶1(CYP7α1)基因,并进一步探讨该基因的结构与功能,揭示其组织特异性表达规律。本研究以樱桃谷鸭为材料,运用同源序列克隆结合RACE技术,对鸭CYP7α1基因的cDNA全长进行克隆,并对其进行生物信息学分析及组织表达的研究。结果表明:鸭CYP7α1基因cDNA全长2 351bp,最大开放阅读框(ORF)1 539bp(114～1 652bp),共编码512个氨基酸;鸭CYP7α1氨基酸与鹅的同源性最高(97.5%),其次是鸡(92.8%)、人(67.3%)、猪(66.5%)、兔(65.7%)、大鼠(65.5%)、小鼠(65.5%)和牛(65.1%);经预测鸭CYP7α1蛋白可能含有1个P450超家族结构域;鸭CYP7α1基因在肝脏中呈高丰度表达,在其他9个组织中均未检测到或检测到少量表达,表明该基因的表达具有组织特异性。

四个家鸭群体IFIT-5基因外显子2的遗传多态性分析

研究旨在分析家鸭IFIT-5基因外显子2的多态性,以期为进一步研究家鸭IFIT-5基因与疾病抗性的相关性提供理论依据。根据GenBank上收录的IFIT-5基因序列设计特异性引物,采用PCR-SSCP方法对苏牧麻鸭、金定鸭、樱桃谷鸭与白羽番鸭这4个家鸭群体IFIT-5基因外显子2进行多态性分析。结果表明:在IFIT-5基因外显子2上检测到2种等位基因、2种基因型,存在1个SNP位点;在4个群体中均未检测到BB基因型个体,4个群体均不处于哈代-温伯格平衡,苏牧麻鸭跟金定鸭不同基因型分布差异不显著(P>0.05),而其余群体彼此不同基因型分布存在极显著性差异(P<0.01)。提示4个家鸭群体IFIT-5基因外显子2存在遗传多态性,不同家鸭群体在遗传基础上存在着一定的差异。

鹅FSHβ基因克隆及序列分析

促卵泡激素β亚基(FSHβ)基因是动物繁殖性状的一个重要候选基因,对鹅产蛋量具有重要的调节作用。本研究以鹅垂体组织总RNA反转录的cDNA为模板,分别采用RT-PCR和RACE技术扩增鹅FSHβcDNA序列,包含:16 bp 5′UTR,396 bp开放阅读框(ORF)和3′端非翻译区2个不同的剪接体,其大小分别为518 bp和780 bp。经生物信息学软件分析,发现鹅FSHβ基因编码的蛋白为亲水蛋白,且存在信号肽序列切割位点,则推测其为分泌蛋白。本研究首次成功获得了鹅FSHβ基因的cDNA全长序列并进行了分析,可为全面解析鹅FSHβ基因的分子结构及功能提供一定的参考。

异位表达的鸭白蛋白下调鸡DF-1细胞IFN-β和Mx1 mRNA的表达

目的研究白蛋白(ALB)基因对β-干扰素(IFN-β)和黏病毒抗性蛋白1(Mx1)mRNA表达的影响。方法本实验将鸭ALB基因亚克隆入pEGFP-C1真核表达载体,并通过脂质体法转染DF-1鸡成纤维细胞。24 h后,用聚肌胞苷酸(PolyI∶C)刺激,荧光定量PCR检测IFN-β和Mx1的mRNA的表达的动态变化情况。结果成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-ALB,并有效的转染入DF-1细胞。PolyI∶C刺激12 h后,ALB组中IFN-β和Mx1基因的表达量显著低于EGFP组(P<0.05,P<0.01)。结论过表达鸭ALB基因下调DF-1细胞IFN-β和Mx1 mRNA的表达。

大鳞副泥鳅β-actin基因近端启动子的克隆及启动活性分析

采用PCR技术从大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)基因组中克隆了β-actin基因近端启动子片段DPRK1,并将该基因启动子片段DPRK1定向亚克隆到不含启动子的绿色荧光表达载体pEGFP-N1中,构建了重组荧光表达载体pDPRK1-EGFP。将该载体分别转染真核细胞293T、CEL及DF1,检测绿色荧光表达情况。重组载体经NdeⅠ酶切线性化后,显微注射到斑马鱼(Danio rerio)的受精卵中。序列分析显示该片段的长度为1 282 bp,含167 bp的5'侧翼序列近端启动子区和共1 115 bp的第1个外显子以及第1个内含子区。5'侧翼序列近端启动子含有CAAT box,CArG motif和TATA box,分别位于转录起始位点(+1)上游的-94、-64和-31处。在将重组载体pDPRK1-EGFP转染293T、CEL及DF1的实验中观察到3种细胞都有很强的绿色荧光,在显微注射到斑马鱼受精卵的实验中也观察到绿色荧光,该结果表明大鳞副泥鳅β-actin基因近端启动子片段DPRK1具有效的启动功能,为下一步创制转基因泥鳅新品系提供了技术支撑。

防止三相四线电能表错接线的改进措施

电能计量在整个供电系统中处于一个非常重要的位置,电能表的错误接线往往会给经济带来巨大损失,三相四线电能表容易发生接线错误的状况,但其错误有一定的规律,只要掌握了这些规律,就能较容易地解决电能计量问题。

电力低碳发展的现状问题

随着现代社会的发展,我国的电力低碳取得了巨大的突破。电力低碳的发展主要是通过非化石能源的比重提高、发电效率提高等相关措施,来取代传统碳能源消耗较大的火力电机组等来实现的发展方向。而为了促进电力低碳发展的规范性,国家通过政策强制性的规定了其中能效的标准,但在现状的发展当中,其依旧存在一定的问题,因此本文为了完善电力低碳发展,对其中问题进行研究,并提出相关的改善建议。

大余麻鸭的体尺性状指标与体重的主成分分析

为了通过对大余麻鸭体尺和体重的测定和主成分分析,给大余麻鸭的选育和综合评价提供基础,试验选取500日龄120只(公、母各60只)大余麻鸭进行体重与体尺测量,采用SPSS软件进行统计分析。结果表明:公、母鸭间除胫围无显著差异外,其他指标公鸭均极显著(P≤0.01)或显著(0.01<P≤0.05)高于母鸭,公鸭体重与体斜长、龙骨长、胫围、半潜水长、胸深、趾长均极显著相关(P≤0.01),母鸭体重与其他体尺指标的相关情况与公鸭大致相同,但与胸深无显著相关。说明公鸭的体重和绝大部分体尺指标极显著大于母鸭(P≤0.01),体重与骨架结构的关系很大,均可由各体尺指标来估算。对公鸭的体型性状进行选育时至少应包括体重、体斜长、龙骨长、胸宽、胸深、骨盆宽6个指标;对母鸭至少应包括体重、骨盆宽、半潜水长、龙骨长、胫围、趾长6个指标。

浙东白鹅异地小群保种效果监测

为监测浙东白鹅异地小群保种效果,本研究利用10个微卫星座位对异地保种群体和原产地群体(共计486只)在分子水平上的遗传参数进行检测,同时测定其部分性状指标。利用SPSS13.0对群体遗传学参数和体重、体尺指标进行配对试验t检验。结果表明:在分子水平上,异地保种群体的优势等位基因频率、期望杂合度(He)以及多态信息含量(PIC)、群体内近交系数(Fis)较原产地群体均未发生显著变化(P>0.05);在性状水平上,公鹅的体重和胸深极显著变小(P<0.01),母鹅的体重、胸深、龙骨长、胫长等显著(P<0.05)或极显著变小(P<0.01);其他指标均无显著性变化。说明浙东白鹅异地小群保种群体在分子水平和性状水平上的大部分指标均无显著性变化,异地小群保种能够有效保存浙东白鹅的本品种特性,同时本实验也为进一步优化我国地方鹅品种的现有保种方式和探索新的异地保种策略提供参考依据。

急性噪声应激对肉鸭血液指标和肉品质的影响

本试验旨在研究不同强度的噪声应激对北京鸭血液指标和肉品质的影响。将42日龄北京鸭60只,随机分为3组,每组2个重复,每个重复10只鸭。组1:对照组;组2:80 db噪声应激20 min;组3:100 db噪声应激20 min。应激后进行血液指标和肉品质检测,结果表明:组2、组3的T3、T4水平都极显著低于对照组(P<0.01);组2的ALT、CK、AST、和GSH-Px水平有所上升,但与对照组差异不显著(P>0.05);组3的ALT和AST水平极显著高于组1、组2(P<0.01),CK水平极显著高于组1(P<0.01);GSH-Px水平显著高于组1、组2(P<0.05);组3的INS水平均极显著高于(P<0.01)组1;3组之间胸肌水分含量和脂肪含量差异不显著(P>0.05),组3胸肌蛋白含量与组1差异极显著(P<0.01),组2和组3pH都极显著低于对照组(P<0.05),组2、组3的胸肌MDA和蛋白质羰基含量升高且差异极显著(P<0.01)。因此,急性噪声应激会在一定程度上影响肉鸭血液指标和肌肉品质,增加应激水平。

鹅FSH-α和INH-α基因在不同生殖时期的表达差异分析

为检测不同生殖时期鹅FSH-α、INH-α的变化规律。采用RT-PCR和RT-qPCR技术检测FSH-α、INH-α在不同生殖时期的鹅不同组织中的表达量。结果表明:FSH-α、INH-α在心、肝、脾、下丘脑、肾、大肠、小肠、大脑、小脑、输卵管、腺胃、垂体、肺、卵巢和胸肌等组织中均有表达,在生殖相关组织中表达较高;在生殖周期中鹅FSH-α表达量为产蛋期>开产前期>抱窝期;在垂体中,开产前期和产蛋期的表达量均显著高于抱窝期(P<0.05),在输卵管中,产蛋期的表达量显著高于开产前期和抱窝期(P<0.05),在下丘脑和卵巢中,3个时期的FSH-α表达量没有显著差异(P>0.05);在生殖周期中鹅INH-α表达量为抱窝期>开产前期>产蛋期,在卵巢中,产蛋期表达量显著低于开产前期和抱窝期(P<0.05),在垂体、下丘脑和输卵管中,3个时期的INH-α表达量没有显著差异(P>0.05)。本研究结果揭示了鹅FSH-α和INH-α基因在鹅不同产蛋时期的变化规律,为提高鹅产蛋量提供实验依据。

鹅FSH基因原核表达

促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)作为调节家禽卵泡发育重要的候选基因,但FSH在生物体内的半衰期非常短,本试验将具有延长基因半衰期作用的CTP序列添加到鹅FSH基因各亚基的C末端进行基因融合,以期获得pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ-CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α重组蛋白。设计去除目的基因信号肽和含有酶切位点的特异性引物,经融合PCR扩增获得了目的基因FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α,通过构建原核表达载体pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ-CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,蛋白纯化。结果显示,3个融合蛋白FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α的IPTG最佳诱导时间分别为4、5和5h,最佳诱导浓度分别为0.2、0.8和1.5mmol/L,且都是以包涵体形式存在,相对分子质量分别为32 000、35 000和46 000,与预期大小一致。结果表明,本试验成功构建了鹅pET-32a-FSHα-CTP、pET-32a-FSHβ-CTP和pET-32a-FSHβ-CTP-α的原核表达载体,并对它们的重组蛋白进行了纯化,为开展鹅FSH的基因免疫研究和鹅rFSH生物制剂研发奠定基础。

斑嘴鸭线粒体全基因组序列测定及分析

根据斑嘴鸭(Anas poecilorhyncha)同属近缘物种绿头鸭(Anas platyrhynchos)线粒体基因组(mt DNA)序列设计引物,采用直接测序技术对斑嘴鸭mt DNA全序列进行综合分析。结果显示,斑嘴鸭mt DNA序列全长16 606 bp,包含22个tRNA、2个rRNA基因、13种蛋白质编码基因和1个D-loop区。碱基组成T为22.2%,C为32.8%,A为29.2%,G为15.8%,无明显的AT偏好性,22种tRNA都为典型的三叶草结构。参照棕头鸦(Larus brunnicephalus)、黑尾地鸦(Podoces hendersoni)的12S rRNA,对斑嘴鸭12S rRNA的二级结构进行预测,结果其含有4个结构域,37个茎环。对D-loop控制区序列分析发现含有goose hairpin,E-box,F-box,D-box,Bird similarity-box及CSB1-box。并以原鸡作为外群,采用N-J算法和ML算法,基于mt DNA全序列及D-loop区分别构建系统进化树,发现3个家鸭品种与绿头鸭亲源关系较近。