人博卡病毒全基因组序列测定与种系分析

目的了解福州地区人博卡病毒(HBoV)在儿童呼吸道感染中的检出情况,并对其进行全基因组序列测定和种系分析。方法收集2007年11月至2008年10月在福建省妇幼保健院因下呼吸道感染住院的重症监护病房的57例小儿鼻咽抽取物标本,用一对特异引物通过PCR扩增法对HBoV基因片段进行检测,对检测出的2例HBoV(FZ1和FZ40)用7对全序列引物进行扩增和拼接,获得这两株病毒全基因组序列,上传GenBank并与基因库中国内外其它10株HBoV的全基因组序列和各氨基酸序列进行比对,并做种系分析。结果FZ1株基因组序列全长为5299bp,与HBoV参考株st2株序列长度相同;而FZ40株的基因组序列全长少2bp。病毒全基因组编码4种蛋白,分别是非结构蛋白NS1、核蛋白NP-1和衣壳蛋白VP1、VP2。结论种系分析显示福州的FZ40株与浙江温岭的WLL-1株关系较近,而FZ1株与北京的两株及泰国的CU6株关系较近。

新型H7N9禽流感病毒研究进展

新型H7N9禽流感病毒对中国的突袭引起了全球的高度关注。本文从H7N9禽流感病毒可能的起源和基因重组事件、病毒基因的多样性、重要突变位点与病毒致病性、采样与实验室检测、流行病学调查、临床症状、治疗、疫苗研究和预防等多个方面对国际、国内有关H7N9禽流感病毒的研究进展进行综述,以期为H7N9禽流感病毒的防控提供参考。

人冠状病毒HKU1 N和S蛋白基因序列及进化分析

目的了解人冠状病毒HCoV-HKU1在我国福州急性重症下呼吸道感染患儿中的感染情况以及病毒N基因和S基因的系统进化特征。方法通过RT-PCR法对2007年11月至2015年1月因呼吸道感染住进医院儿科重症监护病房的266例小儿鼻咽抽取物标本进行4种人冠状病毒的检测和人冠状病毒HCoV-HKU1的确认检测,测序并BLAST比对分析8份人冠状病毒阳性产物。结果在266例标本中检出2例HCoV-HKU1感染阳性病例,检出率为0.75%(2/266)。这两例患儿一例诊断为支气管炎、一例诊断为急性重症肺炎。通过检测都发现混合感染了人副流感病毒3型(HPIV-3)。对这两株病毒FZ90和FZ96的N和S蛋白基因进行序列测定、拼接和系统进化分析;结果表明这2株HCoV-HKU1都属于HKU1基因型A。结论人冠状病毒HCoV-HKU1可能是儿童下呼吸道感染中较为重要的一种病原,混合感染导致儿童病情加重。

两种对虾杆状病毒的超微结构比较及其超微细胞病理的观察

应用透射电镜和超薄切片技术，对长毛对虾和斑节对虾的杆状病毒病进行研究。在对虾幼体发育的糠虾期之前的各期虾苗未查到病毒，而在糠虾期之后各期的肝胰腺和中肠上皮细胞核中均查到大量典型的病毒及其包涵体。两种对虾感染的病毒大小、形态相似，认为是同一种病毒，该病毒属杆状病毒科 Ａ 亚组。病毒颗粒呈杆状，多见单囊膜，少数似见有两层囊膜，病毒颗粒单个散在核质和包涵体基质中，由核心、衣壳和囊膜三部分组成，核衣壳大小约（３９±５）ｍ ｍ ×（２０８±３４）ｎｍ ，病毒颗粒大小约（５５±７）ｎｍ ×（２７３±３１）ｎｍ ，多数囊膜一端稍尖，另一端膨大，核衣壳略偏心。包涵体位于核中，其基质多为晶格状，其中包含不少已完成装配的病毒颗粒。根据细胞超微结构的改变程度及核中病毒发生基质和包涵体出现的情况，病毒的致病过程大致可分成三个阶段。虽然作者观察到的病毒颗粒略小于文献报道，但基本认为两种对虾感染的病毒是 Ｍ Ｂ Ｖ，其传播途径可能主要通过对虾摄食。

实时荧光PCR方法快速检测KI多瘤病毒

目的采用实时荧光PCR方法快速检测KI多瘤病毒(KIPy V),并与巢式PCR扩增法进行比较。方法收集2007年11月至2015年1月在福州市一家妇幼保健院因呼吸道感染住在儿科重症监护病房(PICU)的259例小儿鼻咽抽取物标本和另两家综合医院146例因严重急性呼吸道感染(SARI)住院的成年患者咽拭子标本,通过实时荧光PCR方法对KIPy V的调节区的基因片段进行检测。结果在小儿鼻咽抽取物标本中检测出3例KIPy V感染阳性病例,检测阳性率约为1.2%,而用巢式PCR扩增法只检测出1例,这例的Ct值较低,约为23,并且扩增曲线呈S型。其它两例的Ct值较高,分别约为33和35。在成年患者咽拭子标本中,用两种方法都未检测出KIPy V感染。在两例Ct值较高的小儿病例中,检测出混合有呼吸道合胞病毒(RSV)感染。结论确立的实时荧光PCR方法可以快速检测KIPy V,且特异性较高。

2001年福建省部分监测点监测结果分析

[目的 ]总结 2 0 0 1年福建省流感监测情况 ,为流感防治提供依据。 [方法 ]用鸡胚法和MDCK细胞法分离流感病毒 ,用红细胞凝集及凝集抑制试验对流感病毒进行型和亚型的鉴定。 [结果 ]全年分离流感病毒 42株 ,其中甲 1型(H1N1) 3 2株 ,乙型 (B) 10株 ,未分离出甲 3型 (H3N2 )流感病毒。 [结论 ] 2 0 0 1年福建省部分地区全年流感散发流行以甲 1型为主 ,春季 ( 3、4月份 )为一个流行高峰 ,以乙型为主 ,夏季 ( 8月份前后 )为另一个流行高峰 ,以甲

福建各地抗生素厂生产菌株污染噬菌体的电镜监测

[目的 ]监测抗生素厂在生产庆大霉素、金霉素与四环素过程中遭到噬菌体污染的情况。 [方法 ]用电镜负染法 ,在污染季节 ,及时对各种噬菌体的形态进行观察 ,并对生产过程进行电镜监测 ,指导生产。 [结果 ]3年来 ,共检测送检标本 71份 ,其中阳性率达 47%。同时 ,对 10种噬菌体形态及分类进行了描述 ,有的尚属初次报道。

中国福州呼吸道感染患儿中检测到WU多瘤病毒

呼吸道感染是造成全球5岁以下儿童死亡的主要疾病,也是儿童住院治疗的首要疾病。迄今,仍约有30%的小儿呼吸道感染原因不明[1]。人类呼吸道病毒种类繁多。

2株分离的嗜人T细胞白血病病毒I型的PCR检测

[目的 ]用 PCR法检测嗜人 T细胞白血病病毒 I型 (HTL V- I)的分离情况。 [方法 ]采集 2例日本鹿儿岛县成人 T淋巴细胞白血病 (AL T)病人的肝素抗凝血 ,分离外周血单核细胞 (PBMCs) ,加入植物血凝素和白介素 - 2 ,与健康人 PBMCs共培养进行 HTL V- I的分离 ,然后抽提 DNA,用 HTL V- I的 gag1和 tax1两引物进行 PCR扩增 ,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳确定病原分离结果。 [结果 ]2株都扩增出了 HTL V- I前病毒 DNA的 gag1和 tax1片断 ,证明了嗜人 T细胞白血病病毒 I型的分离成功。 [结论 ]PCR法是快速、准确检测嗜人 T细胞白血病病毒感染的有效方法之一。

禽流感病毒血凝素HA的可变性解析

以重组的蒙古鸭H5N2禽流感病毒A/Duck/Mongolia/54/01的血凝素HA蛋白的cDNA为模板,进行PCR随机突变,表达只有单个氨基酸突变的H5HA基因共计38个。根据红细胞吸附反应,分析这些突变HA的功能,仍然具有红细胞吸附活性的单个氨基酸突变的HA约占89%,说明H5HA单个氨基酸突变的容许率是相当高的。HA1区突变数目大约是HA2区的两倍。对失去红细胞吸附功能和某些仍然拥有红细胞吸附功能的HA及单个氨基酸突变的位置与结构的关系进行探讨。有两个位点氨基酸突变了两次,但都不影响红细胞吸附功能,对红细胞吸附功能的影响,似乎主要由位置决定,而不是取决于取代的氨基酸的种类。位点179位和122位的突变是不允许的;位点179位于H5N1的受体结合区域RBD内,122位位于A抗原决定簇区附近,推测在H5HA三维结构上,这两个位点位于HA分子的内部,维持着H5HA的结构。HA1Cys位点4和HA2Cys位点148的突变是不允许的。这两个Cys正好形成HA1和HA2连接的桥梁,对维持H5HA结构也是相当重要的。本实验中HA先后失去了三个糖基化位点,但并不影响吸附红细胞的功能。总之,通过实验分析以研究某些氨基酸改变的效果,寻找关键位点是否突变,可以作为评估H5N1野毒株大流行潜力的分子标志。

抗艾滋病细胞株的交叉耐性及抑制细胞凋亡

目的 体外研究奈非那韦耐性细胞株对其它抗艾滋病药及抗癌药的反应及与细胞凋亡的关系。方法 通过将成人T细胞白血病细胞株Jurkat培养于含有奈非那韦浓度不断增加直至 14 μm的培养液中培养 50d以获得耐奈非那韦的亚系细胞株JurkatrN。药敏试验用四唑嗡染色法 (类似XTT法 )并用流式细胞仪检测抗凋亡蛋白Bcl -2在母本和耐性Jurkat细胞中的表达。结果 发现JurkatrN细胞对d4T及新近报道的抗艾滋病药K -3 7的交叉耐性与母本细胞相比提高到 5倍左右。对抗肿瘤药CDDP ,VCR ,DOX和VP -16的交叉耐性也提高到 2 5倍以上。并且耐性细胞中心Bcl -2蛋白的荧光密度增加。结论 在用HIV -1蛋白酶抑制物奈非那韦作用后 。

奈非那韦耐性细胞株对其它抗艾滋病药、抗肿瘤药的交叉耐性及多药耐药表型分析

目的 在体外进行细胞对抗艾滋病药产生耐性的相关因子研究。方法 通过将成人T细胞白血病细胞系MT-4培养于含有奈非那韦浓度不断增加直至14μmol/L的培养液中培养30天以获得耐奈非那韦的亚系细胞株MT-4rN。用细胞增殖分析系统四唑嗡染色法测定存活细胞数并用流式细胞仪及荧光化合物罗丹明-123和P-糖蛋白阻遏物维拉帕米分析多药耐药蛋白P-gp的存在。结果 发现MT-4rN细胞对新近报道的抗艾滋病药K-37产生出比母本细胞多20倍的耐性。对其它抗肿瘤药的交叉耐性也有不同程度的提高。并且,耐性细胞的荧光密度在维拉帕米存在下有些不同,意味着P-gp在MT-4rN中的表达略有增多。结论 在用HIV-1蛋白酶抑制物奈非那韦作用后,MT-4细胞对其它抗艾滋病药及抗肿瘤药产生了交叉耐性并且多药耐药蛋白P-gp的表达有所增加。

胰阔盘吸虫雌性某些生殖器官的组织结构观察

胰阔盘吸虫雌性某些生殖器官的组织结构观察修文琼胰阔盘吸虫（Ｅｕｒｙｔｒｅｍａｐａｎｃｒｅａｔｉｃｕｍ（Ｊａｎｓｏｎ，１８８９）Ｌｏｏｓｓ，１９０７）寄生于牛、羊等动物的胰脏，分布于全国各地，尤其在我国东北，内蒙古等广大牧区中广为流行，危害严重，极大影...

福建省甲型H1N1流感病毒分离及首例分离株全基因组序列分析

目的分离甲型H1N1流感病毒,分析福建省首例病毒分离株全基因组序列和遗传特征,为研究病毒进化、致病性、流行规律提供科学依据。方法采用MDCK细胞和Real-time PCR法进行病毒分离、鉴定;提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增其8个基因片段,测定核苷酸序列,利用生物信息软件拼接全基因组序列;分析重要基因位点,利用GENBANK中相关序列对首例病毒分离株A/Fujian/01/2009(H1N1)进行基因进化树分析。结果从82例甲型H1N1流感确诊病例标本中分离出50株甲型H1N1流感病毒,第一代分离阳性率60.98%。在福建省首次获得甲型H1N1流感病毒株及全基因组序列。基因组序列分析证明:该毒株与2009年大流行株高度同源,其基因组存在四源重组现象;氨基酸位点分析其对达菲药物敏感,对金刚烷胺类药物耐药;相对于猪流感代表株A/Swine/Iowa/15/1930(H1N1)存在6个HA抗原决定簇位点变异。结论MD-CK细胞对甲型H1N1流感病毒具有较高敏感性;福建省首例甲型H1N1流感病例分离病毒株与北美流行株高度同源;相对于以往古典型猪流感代表株出现了HA蛋白抗原性漂移;为今后进一步开展甲型H1N1流感病毒分子生物学研究奠定基础。

2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的通过对2010—2012年福建省分离的H3N2亚型流感毒株血凝素HA1基因进行分析，了解2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒的基因特征和变异规律。方法随机选择28株毒株，提取病毒RNA，采用RT-PCR扩增目的片段，纯化PCR产物后进行测序；利用DNAstar和Mega4．0等生物信患学软件进行核苷酸整理、拼接、校对、差异性比较以及基因进化树构建等分析研究。结果28株H3N2亚型流感病毒HAl区核苷酸同源性在96．4％～100％之间。基因系统进化分析显示，其进化规律都是沿着树枝主干随着时闻推移向，上延伸，序列的差异和年代成正比。2010—2012年间HAl区共出现43个氨基酸位点的变化，其中有10个氨基酸位点变异累计涉及4个抗原决定簇，2个变异位点发生在受体结合位点（RBS）及其附近，应予高度重视。结论相对于A／Perth／16／2009疫苗代表株，2012年的部分H3N2亚型流感出现了抗原漂移；部分毒株已出现氨基酸位点的改变，并涉及抗原决定簇及受体结合位点，提示2010—2012年福建省人群中流行的H3N2亚型流感正逐渐发生变异，应加强流感病原学监测，以及时发现新的流感变异株，为福建省流感防控提供科学依据。

福建省新型冠状病毒的分离和全基因组特征分析

目的从福建省早期新型冠状病毒肺炎(COVID-19)病例中分离新型冠状病毒(2019-nCoV)并了解病毒基因组特征。方法将福建省早期COVID-19患者的咽拭子样本接种至Vero-E6细胞,培养上清提取核酸,经real-time RT-PCR法验证后,利用Ion Torrent S5深度测序仪做全基因组测序,分析病毒株全基因组序列与参考序列的一致性和进化情况。结果12份咽拭子样本经培养后有2份样本病毒滴度明显上升,表明分离到2株2019-nCoV,其全基因组结构蛋白与Wuhan-Hu-1株的一致性超过99.9%。结论成功自福建省早期COVID-19病例中分离到2019-nCoV,病毒分离株的基因序列与湖北武汉流行的2019-nCoV高度同源,提示病毒尚未发生明显变异。

福建省1例不明原因肺炎病例中甲型H1N1流感病毒的全基因组特征分析

目的了解1例不明原因肺炎病例中甲型H1N1流感病毒的生物学特性和变异情况,为临床治疗与疫情防控提供依据。方法利用MDCK细胞分离不明原因肺炎病例中的甲型H1N1流感病毒,分离的毒株经全基因组测序后分析其抗原性、致病性和耐药性等特征。结果从该病例的咽拭子标本中分离得到1株甲型H1N1流感病毒并命名为A/FujianGulou/SWL64/2016(H1N1),其8个节段的核苷酸和氨基酸序列与A/California/07/2009(H1N1)疫苗株的相似性分别为96.9%~98.9%和96.7%~99.5%。氨基酸序列分析显示HA蛋白共有18个位点发生突变,其中K163Q、S185T、S203T和D222N变异涉及到3个不同的抗原位点,提示病毒发生抗原漂移;与受体结合位点相关的D222N突变还提示病毒感染下呼吸道的能力增强。耐药性分析显示该病毒对金刚烷胺耐药,对达菲仍然敏感。结论本次研究的甲型H1N1流感病毒具有抗原漂移现象,且具备引发重症肺炎的分子特征,应进一步加强监测,为疫情防控奠定基础。

2016年福建省B型流感病毒基因特征分析

目的分析2016年福建省B型流感病毒(Influenza Virus)血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuramidinase,NA)的基因变异。方法从中国疾病预防控制信息系统采集日期2016.1.1至2016.12.31的福建省流感监测数据。毒株来源2016年福建省流感网络监测流感样病例,提取病毒(犬肾传代细胞或鸡胚培养分离)核酸进行RT-PCR扩增HA和NA基因片段并测序,MEGA5.0分析基因特征。结果测序51株B型流感病毒HA、NA片段,与疫苗株核苷酸同源性在97.8%~100%。研究发现2株重配株(BY-NA/BV-NA)、耐药株1株、Victoria系HA片段新增一个糖基化位点(197),酶活性中心和周围的相关位点氨基酸仍保持高度保守。结论2016年福建省B型流感毒株少数发生变异与疫苗株不匹配。

2003—2004年福建省流感暴发监测分析

[目的]了解福建省流感流行动态,探索流行规律,为流感防治提供科学依据。[方法]进行流行病学调查,用MDCK细胞和鸡胚进行病毒分离,用血凝抑制实验对病毒株进行分型鉴定及血清流感抗体测定。[结果]2003—2004年我省共报告局部暴发流感疫情49起,发病3 088例,共采集咽拭子或漱口液标本360份,分离流感病毒阳性率25.8%(93/360)。其中甲3型88株(94.6%),乙型5株(5.3%)。2年共采集流感样患者急性期、恢复期血清各221份,其中甲3型抗体4倍增长阳性率58.4%(129/221),乙型抗体4倍增长阳性0.5%(11/221)。[结论]引起福建省2003—2004年流感暴发的毒株以甲3型为主,暴发的时间主要集中在每年的4月和9月。

新型冠状病毒在Vero-E6细胞中的增殖特征分析

目的了解新型冠状病毒(2019-nCoV)在Vero-E6细胞中的增殖特征,为病毒的分离培养、抗病毒药物研究以及疫苗研制等工作提供基础。方法将2019-nCoV做半对数系列稀释,测定病毒的半数组织培养感染剂量(TCID 50);以1.74×10^-4 TCID 50/cell的病毒量感染Vero-E6细胞,在病毒吸附后第0~6 d分别收集病毒培养上清,测定上清中病毒感染滴度和病毒核酸拷贝数;测定病毒储存液冻融/非冻融、不同细胞悬液浓度、病毒吸附后洗涤/不洗涤等不同实验条件下的TCID 50。结果2019-nCoV感染Vero-E6细胞后,48 h内培养上清中的病毒TCID 50和病毒核酸拷贝数到达或接近峰值,平均复制周期约为3.29 h;48 h后上清中病毒核酸拷贝数维持在较高水平但病毒感染滴度逐渐下降。病毒储存液的冻融、细胞浓度以及病毒吸附后洗涤等培养条件可轻微影响病毒TCID 50。结论2019-nCoV感染Vero-E6细胞在早期增殖迅速,感染后期病毒感染滴度逐渐下降,但病毒核酸拷贝数在上清中维持在较高水平。