EGFR信号通路调控结肠癌Caco-2细胞侵袭转移的分子机制

目的探讨EGFR信号通路与人结肠癌Caco-2细胞增殖和侵袭转移的关系及其调控分子机制。方法采用MTT法和Boyden小室体外侵袭实验检测Caco-2细胞增殖和体外侵袭能力;采用RT-PCR方法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2基因转录水平;采用W estern b lot法检测P-EGFR和P-ERK蛋白表达。结果外源性EGF(10μg/L)增加P-EGFR和P-ERK蛋白表达同时使24 h细胞生长率提高了23.35%(P<0.01),使过膜细胞数由(208±3)上升到(241±5)(P<0.01)。当用AG1478(20μmol/L)和PD98059(40μmol/L)分别阻断EGFR和ERK/MAPK后,EGF作用消失,Caco-2细胞生长明显抑制(P<0.01),但无时间效应关系;Caco-2细胞体外侵袭力明显减弱(P<0.01)。RT-PCR测定显示,EGF能增加Caco-2细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达和减少TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达;而AG1478能逆转EGF的作用,使MMP-2、MMP-9 mRNA的表达下降,TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达上升,结果MMP-2/TIMP-2比值和MMP-9/TIMP-1比值均下降(P<0.01)。结论EGFR-ERK/MAPK信号通路通过改变基质金属蛋白酶和其抑制剂mRNA比值调控人结肠癌细胞侵袭转移能力。

蟾蜍灵在诱导K562细胞凋亡过程中下调TOPO-Ⅱα蛋白表达

目的探讨蟾蜍灵(bufalin)诱导K562细胞凋亡的分子机制。方法用流式细胞仪和形态学检测细胞凋亡;用免疫组化SP法检测TOPO-Ⅱα蛋白表达。结果蟾蜍灵在诱导K562细胞凋亡过程中,下调TOPO-Ⅱα蛋白表达;细胞外信号转导激酶抑制剂(extra-cellularsignal-regulatedkinase,ERK)PD98059能协同蟾蜍灵下调TOPO-Ⅱα蛋白表达;而四癸酰佛波酯(TPA)却拮抗蟾蜍灵的作用。结论蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡可能与抑制ERK信号途径以及下调TOPO-Ⅱα蛋白表达有关。

EGFR信号通路影响Caco-2细胞黏附和侵袭的分子机制

目的:探讨EGFR信号通路对人结肠癌Caco-2细胞增生、黏附和侵袭的影响及其分子机制. 方法:应用细胞培养技术培养Caco-2细胞;以MTT法检测EGF,AG1478和PD98059对Caco-2细胞增生和生长的影响:Matrigel黏附实验、侵袭实验和RT-PCR技术检测EGF,AG1478和PD98059对Caco-2细胞黏附力、侵袭力和MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2基因转录的影响;Western blot蛋白免疫印迹法检测EGF和AG1478对Caco-2细胞P-EGFR蛋白表达的影响. 结果:外源性EGF(10μg/L)可明显地促进Caco-2细胞的增生和生长,24 h细胞生长率提高了23.4%(P<0.01); 而AG1478(20μmol/L)和PD98059(40 μmol/L)则明显地抑制细胞的增生和生长,其抑制作用没有时间效应关系,AG1478最强抑制时间为第48 h,细胞生长率下降了45.7%(P<0.01),PD98059最强抑制时间为第72 h, 细胞生长率下降了54.6%(P<0.01).Matrigel黏附实验、侵袭实验揭示了,EGF(10 μg/L)提高EGFR活性后能明显地增加Caco-2细胞的体外黏附力(P<0.05)和侵袭力(P-0.001);而且AG1478和PD98059分别阻断EGFR和ERK1/2后能使EGF的促细胞黏附力和侵袭力的作用消失(P<0.01).RT—PCR测定显示,EGF能增加Caco-2细胞MMP-2,MMP-9 mRNA的表达, 同时也能减少TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达;而AG1478和PD98059均能逆转EGF对Caco-2细胞基因的影响,使MMP-2和MMP-9mRNA的表达下降,TIMP-1 和TIMP-2 mRNA的表达上升,结果MMP-2/TIMP-2 比值和MMP-9/TIMP-1比值均下降(P<0.00 1). 结论:EGFR信号可能通过下游MAPK通路传递信息, 改变MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2基因功能,从而有助于结肠癌Caco-2细胞的侵袭与转移.

阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制探讨

目的：探讨阿糖胞苷（Ara-C）诱导HL-60细胞凋亡的分子机制。方法：采用苔盼蓝拒染法检测细胞活力，MTF法测定细胞生长抑制率；形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot方法检测Bcl-2和caspase-3及其裂解片段的蛋白表达。结果：1～100斗M Ara-C以时间和剂量依赖方式抑制HL-60细胞增殖，诱导细胞凋亡，并下调Bcl-2蛋白表达，激活caspase-3。同时加入MEK抑制剂PD98059明显增加Ara-C的细胞毒作用和对caspase-3的激活作用，且这种作用可被P38MAPK抑制剂SB203580拮抗；PD98059和SB203580二者均未影响Ara-C对Bcl-2蛋白的下调作用。JNK抑制剂SP600125对Ara-C的上述作用无明显影响。结论：Ara-C以时间和剂量依赖方式抑制HL—60细胞增殖，并诱导细胞凋亡，同时下调Bcl-2蛋白表达，激活caspase-3；MEK抑制剂正性调节Ara-C的细胞毒作用，P38MAPK抑制剂负性调节Ara-c的细胞毒作用，二者可能是在caspase-3水平而未改变Bcl-2水平来发挥作用的。