2018–2019年安徽地区H9N2亚型禽流感病毒进化分析

为调查H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽地区养殖场中的流行变异情况,本研究采用RT-PCR方法对2018-2019年采集自安徽养殖场的2763份样品进行AIV的检测,并采用鸡胚接种分离病毒的方法从核酸阳性样品中进行病毒分离。结果显示:从阳性样品分离获得5株H9N2毒株;5株H9N2分离株的HA裂解位点为PSRSSRGLF,符合低致病性禽流感病毒的序列特征,HA受体结合位点234位氨基酸为亮氨酸(Leu),具有与哺乳动物唾液酸受体结合的特征,HA蛋白在313位具有潜在的糖基化位点,M2蛋白发生S31N突变;5株H9N2分离株的HA、NA基因属于Y280-like分支,PB2、M基因属于G1-like分支,PB1、PA、NP、NS基因属于F/98-like分支。本研究结果为禽流感疫苗研发提供了流行病学参考。

2019—2021年浙江地区H9N2亚型禽流感病毒的进化分析

为调查H9N2亚型禽流感病毒在浙江地区的流行变异情况,采用RT-PCR方法对采集自浙江多个集散中心的共475份样品进行检测,并采用鸡胚接种分离病毒的方法从核酸阳性的样品中进行病毒分离。结果显示,从阳性样品中分离获得3株H9N2毒株,其HA裂解位点均为PSRSSRGLF,符合低致病性禽流感病毒的序列特征,HA受体结合位点第234位氨基酸为亮氨酸,具有与哺乳动物唾液酸受体结合的特征;3株分离株均增加了第313位糖基化位点。结果表明,3株H9N2分离株的HA、NA基因均属于Y280-like分支,PB2、M基因均属于G1-like分支,PB1、PA、NP、NS基因均属于F/98-like分支。本研究结果为禽流感疫苗研发提供了流行病学参考。

非洲猪瘟病毒内囊膜蛋白p17与宿主互作蛋白的初步鉴定

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的感染导致猪的死亡率高达100%,给养猪业造成毁灭性灾难。因此,开展针对ASFV感染复制的研究有着重大的意义。目前发现ASFV有超过150个开放阅读框,其中D117L基因编码的内囊膜蛋白p17参与病毒二十面体结构的形成,但是对p17调控宿主细胞功能的机制知之甚少。研究通过免疫沉淀技术联合蛋白质谱分析,初步筛选出与ASFV p17潜在的宿主互作蛋白。通过进一步免疫共沉淀技术和激光共聚焦实验确认了p17与线粒体外膜蛋白TOMM70(translocase of outer mitochondrial membrane 70)、热休克蛋白HSPA8(heat shock 70 kDa protein 8)的互作。该研究为进一步探索p17在ASFV感染过程中的功能提供了重要信息。

非洲猪瘟病毒A151R蛋白核定位信号的鉴定

为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白A151R发挥功能的亚细胞定位,通过荧光显微镜观察发现,A151R蛋白能够聚集在细胞核内。使用在线软件预测A151R中存在的核定位信号(NLS),并构建缺失NLS的A151R质粒。荧光共聚焦显微镜观察结果表明,缺失NLS的重组A151R蛋白A151RΔNLS无法进入细胞核。细胞核质分离结果显示,NLS序列能够协助EGFP进入细胞核,证明了NLS的核输入能力。以上证据均表明A151R依赖于NLS进入细胞核,为进一步研究其在ASFV复制中的功能提供了重要的信息。