黑曲霉嗜热β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的克隆表达及其魔芋降解产物分析

根据毕赤酵母密码子偏好性优化设计合成一段来自黑曲霉BK01的嗜热β-甘露聚糖酶基因,通过构建表达载体pPICZαA-man线性化后电转化入不同的毕赤酵母宿主,获得最佳重组菌KM71-MAN,其发酵罐发酵酶活最高达2 318.85 IU/mL。表达产物纯化后的分子量约为40 kD,最适反应温度为80℃,最适pH为5.0。该酶在70℃(pH5.0)保温44 h仍能保留43%的酶活力且在pH3.0-7.0范围内保温70 h(50℃)酶活力仍能保留85%以上。利用发酵罐所产重组酶酶解魔芋胶制备甘露低聚糖,产物以甘露二糖和甘露六糖为主,甘露低聚糖得率为55.6%。该重组β-甘露聚糖酶具有良好的热稳定性和pH稳定性,在魔芋制备甘露低聚糖中具有较好的应用潜能。

通络降脂胶囊质量标准的研究

目的制定通络降脂胶囊的质量控制标准。方法采用TLC法对通络降脂胶囊中的银杏叶提取物和绞股蓝总皂苷进行定性鉴别;采用HPLC法测定通络降脂胶囊中总黄酮醇苷的含量。结果薄层色谱斑点显色清晰,分离良好。槲皮素、山柰素、异鼠李素进样量分别在77.88~1558、59.40~188、16.34~326.7 ng范围内呈良好的线性关系（n=6）,平均加样回收率分别为98.3%、98.0%、96.0%,RSD分别为1.4%、1.6%、1.8%。结论所建立的方法简便、准确、专属性强,可用于通络降脂胶囊的质量控制。

HPLC法测定通络降脂胶囊中总黄酮醇苷的含量

目的 建立以高效液相色谱法测定通络降脂胶囊中总黄酮醇苷含量的方法. 方法 色谱柱为Lichrospher C18（150 mm ×4. 6 mm,5 μm）,流动相为甲醇-0. 4%磷酸-乙腈（39：56：5）,流速为1. 0 mL/min,检测波长为360 nm,进样量20 μL,柱温为30 ℃. 结果 槲皮素、山柰素、异鼠李素分别在4. 548 × 102 -4. 548 × 103 ng、3. 46 × 102 -3. 46 × 103 ng、65. 6-656 ng 进样量范围内呈良好的线性关系（ r =0. 999 9、r =0. 999 8、r =0. 999 2,n=5）,平均加样回收率分别为 101. 0% （RSD =1. 90%）、97. 2% （RSD =1. 66%）、97. 8% （RSD =1. 86%）. 结论 所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于通络降脂胶囊中总黄酮醇苷的含量测定.

六种中药胶囊剂微生物限度检查方法验证

目的建立6种中药胶囊剂微生物限度检查方法。方法按照《中国药典》(2015年版)的规定,采用平皿法、薄膜过滤法对各胶囊剂试验菌株进行回收率试验,并对控制菌检查方法进行验证。结果复方乌参胶囊、夜宁胶囊、复方银杏叶胶囊、复方珍珠粉胶囊、黄元胶囊可采用平皿法进行需氧菌总数的测定;郁福来胶囊对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有较强的抑制作用,需采用薄膜过滤法去除其抑菌作用后方可进行需氧菌总数测定。复方乌参胶囊、复方珍珠粉胶囊及黄元胶囊采用培养基稀释法进行乙型副伤寒沙门菌控制菌检查,其他所有胶囊霉菌酵母菌总数和控制菌检查可采用常规法测定。结论所建验证方法可用作不同类型的中药胶囊剂的微生物限度检查,方法准确可靠,重复性好。

郁福来胶囊质量标准研究

目的制订郁福来胶囊的质量控制标准。方法采用薄层色谱法对郁福来胶囊中贯叶金丝桃药材、金丝桃苷进行定性鉴别,并采用高效液相色谱法测定郁福来胶囊中金丝桃苷的含量。结果供试品色谱中,在与对照品贯叶金丝桃药材、金丝桃苷相应位置上有相同的斑点,且分离效果好;金丝桃苷进样量在0.173~1.73μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 9(n=6),平均加样回收率为99.65%,RSD=1.00%(n=6)。结论该研究中建立的定性和定量分析方法操作简便,结果准确可靠,可用于控制郁福来胶囊的质量。

复方硝酸咪康唑软膏微生物限度检查的方法学验证

目的:建立复方硝酸咪康唑软膏的微生物限度检查方法。方法:按照《中华人民共和国药典》的规定,根据软膏的理化特点,供试品经十四烷酸异丙酯与含10%聚山梨酯80的pH 7.0无菌氯化钠溶液-蛋白胨缓冲液处理后,采用薄膜过滤法进行微生物计数检查,采用常规法进行铜绿假单胞菌控制菌检查,采用培养基稀释法结合薄膜过滤法进行金黄色葡萄球菌控制菌检查。结果:微生物计数部分,各试验菌回收率均为0.5~2;铜绿假单胞菌控制菌采用常规法和金黄色葡萄球菌控制菌采用培养基稀释法结合薄膜过滤法均可被检出。结论:采用合适的供试品前处理方法,能很好地去除复方硝酸咪康唑软膏的抑菌性,并解决样品难以过滤的问题,从而建立可靠的微生物限度检查方法。

四种含抑菌成分外用制剂微生物限度检查方法验证

目的建立四种含抑菌成分外用制剂微生物限度的检查方法。方法按《中国药典》2015年版四部的要求,四种含抑菌成分外用制剂(醋酸氯己定洗剂、复方樟脑搽剂、含酚炉甘石涂剂及复方硝酸咪康唑软膏)皆采用薄膜过滤法进行方法适用性试验。结果醋酸氯己定洗剂、复方樟脑搽剂、含酚炉甘石涂剂及复方硝酸咪康唑软膏的需氧菌总数、霉菌酵母菌总数均可利用薄膜过滤法,且各菌的回收率均在0.5~2.0之间。复方硝酸咪康唑软膏采用常规法进行铜绿假单胞菌检查,其他三种制剂则需利用薄膜过滤法进行铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的试验。结论所建的微生物限度检查的方法可用作该四种含抑菌成分外用制剂的质量监控。

菌克软膏体外抗菌活性观察

目的观察菌克软膏的体外抗菌活性。方法采用琼脂扩散法进行药敏试验,测定菌克软膏对4种6株标准致病细菌、9种23株标准致病真菌的抑菌圈直径,并与林可霉素软膏和硝酸咪康唑软膏进行对比。结果菌克软膏对4种常见细菌都形成抑菌圈,且对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌的抑菌圈直径均大于林可霉素软膏(P<0.01),对铜绿假单胞菌的抑菌圈直径与林可霉素软膏组比较差异无统计学意义(P>0.05)。菌克软膏对9种常见真菌都形成抑菌圈,且对各种皮肤癣菌、念珠菌、裴氏着色真菌和糠秕马拉色菌的抑菌圈直径与硝酸咪康唑软膏组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论菌克软膏体外抗细菌活性强于林可霉素软膏,抗真菌活性强度与硝酸咪康唑软膏相同。

复方芍甘颗粒质量标准研究

目的建立复方芍甘颗粒的质量标准。方法复方芍甘颗粒中芍药苷和甘草酸铵定性鉴别采用薄层色谱(TLC)法,含量测定采用高效液相色谱(HPLC)法。结果芍药苷和甘草酸铵主斑点清晰,且样品中其他成分对鉴别无干扰;芍药苷和甘草酸铵进样量分别在0.263 2~2.632 0μg和0.421 28~4.212 80μg范围内与峰面积积分值线性关系良好,平均回收率分别为98.19%和100.65%,RSD分别为1.47%和1.80%(n=9)。结论该质量标准的建立方法可行,结果可靠,重复性好,可用于复方芍甘颗粒的质量控制。

口疮穴位贴主要成分的鉴别与含量测定

目的:建立口疮穴位贴主要成分的鉴别与含量测定方法。方法:以薄层色谱法(TLC)对穴位贴中吴茱萸和大黄进行鉴别;以高效液相色谱法(HPLC)对穴位贴中吴茱萸碱、吴茱萸次碱以及大黄素进行定量分析。结果:在TLC中,特征斑点清晰无干扰;在HPLC测定中,吴茱萸碱在3.3~167.3μg·mL^(-1)(r=0.9998)、吴茱萸次碱在1.9~92.5μg·mL^(-1)(r=0.9998)、大黄素在1.2~118.6μg·mL^(-1)(r=0.9999)范围内与色谱峰面积呈较好的线性关系,平均回收率分别为98.13%(RSD=1.98%)、99.58%(RSD=1.37%)、97.77%(RSD=1.63%)。结论:该方法可靠、准确、专属性强,可作为口疮穴位贴质量控制的参考依据。

夜宁胶囊的鉴别与含量测定

为提高夜宁胶囊的质控标准,采用薄层色谱法,对夜宁胶囊中灵芝和首乌藤进行定性鉴别,其主斑点显色明显,且样品中辅料无干扰;以高效液相色谱法对特女贞苷的含量进行测定,结果显示,在78.6~3930.9μg(r=0.9999)范围内呈较好的线性关系,平均加样回收率为100.6%,RSD为1.71%。所建立的质量控制方法结果可信,具有良好的重现性。

持续质量改进在降低中药制剂质量不合格率中的应用

目的通过持续质量改进,提升医疗机构中药制剂的质量。方法运用PDCA的方法思路,分析医疗机构中药制剂质量不合格的原因,提出改进对策并实施。比较实施质量改进前(2018年1月-12月)与改进后(2019年1月-12月)的中药制剂质量不合格比例,评价改进措施的效果。结果改进后2019年中药制剂质量不合格率低于2018年,差异有高度统计学意义(P<0.01);其微生物限度检查不合格率下降了78.69%,含量不合格率下降了84.89%。结论通过持续质量改进,有效地降低了中药制剂质量不合格率,提高了工作效率,提升了质量意识,确保了患者用药的安全性和有效性。

高效液相色谱法测定不同产地假蒟中的α-细辛脑含量

目的 采用高效液相色谱(HPLC)法测定不同产地假蒟中α-细辛脑的含量。方法色谱柱为Lichrospher C 18 柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(47:53),流速为1.0 ml/min,检测波长313 nm,柱温30 ℃。结果α-细辛脑在0.0970~1.934 μg范围内与峰面积有良好线性关系( r =0.999 8),平均回收率为99.94%(RSD=1.13%),样品在24 h内稳定,且该方法重复性较好。结论 本方法简便准确,可用于假蒟药材中α-细辛脑的含量测定,以控制其质量;我国不同产地的假蒟中α-细辛脑含量有明显差异,其中以广西产假蒟含量最高。