HPLC法测定化香虫茶中没食子酸和鞣花酸的含量

目的建立双波长RP-HPLC法测定化香虫茶中没食子酸、鞣花酸质量分数。方法采用COSMOSIL C18-AR-Ⅱ色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%(体积分数) H3PO4,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为269 nm(没食子酸)、254 nm(鞣花酸),柱温为25℃。结果没食子酸和鞣花酸分别在0.052~0.26、0.21~1.24μg范围内呈良好的线性关系,醇提物的没食子酸和鞣花酸平均回收率分别为98.03%、102.99%,RSD分别为1.10%、1.09%。水提物的没食子酸和鞣花酸平均回收率分别为98.85%、99.08%,RSD分别为2.74%、2.78%。结论本方法操作简便、准确、重复性良好,可用于化香虫茶中没食子酸、鞣花酸质量分数的测定。

复方薏荷茶对肥胖小鼠改善胰岛素抵抗的调节机制研究

研究复方薏荷茶对C57BL/6J肥胖小鼠改善胰岛素抵抗的调节作用。将32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:空白组、模型组、复方薏荷茶低浓度组和高浓度组。空白组给予标准饲料,其余组给予高脂饲料造模饲养6周。6周后给药组每日分别灌胃复方薏荷茶40,20 mg/kg。第11周尾静脉取血测定血糖浓度,第12周测定血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量。取肝脏组织分别用HE和油红O染色,免疫组化法测定肝脏组织中GLUT4蛋白的表达量,Western blot法测定脂肪组织中PI3K,Akt和GLUT4蛋白的表达量。结果显示,复方薏荷茶组与模型组相比可显著降低肥胖小鼠的体质量,提高对葡萄糖的耐受量,降低血清中的TC、TG、LDL-C水平,改善肝脏组织病变,提高脂肪组织中PI3K,Akt,GLUT4和肝脏组织中GLUT4蛋白的表达量。实验结果表明,复方薏荷茶具有改善血糖和血脂的作用,可减轻肝脏组织中的脂肪堆积,从PI3K-Akt-GLUT4通路上调节组织对葡萄糖的利用,对肥胖小鼠胰岛素抵抗有较好的调节作用。

蓝莓内生真菌分离纯化及其生物抗性初步研究

从贵州麻江蓝莓种植基地的"粉蓝"蓝莓的健康组织(茎、叶、果实)中分离出41株内生真菌,经分类鉴定为8个菌属,优势属为钉孢属(Passalora sp.);与5株病害菌进行对峙试验发现,内生真菌BB01、BL22、BF27、BF40及BF41可抑制全部5种病害菌生长;使用上述内生真菌次级代谢产物粗提取物进行菌丝生长试验,BB01、BL22、BF27、BF40及BF41次级代谢产物粗提取物含药平板浓度为500μg/mL时对病害真菌生长抑制率均超过90%,表现出显著的抗病害真菌活性;采用PCR扩增内生真菌rDNA-ITS序列构建系统发育树,BF41鉴定为刺盘孢属Colletotrichum sp.,BF40鉴定为苍白尾孢属Pallidocercospora sp.,BL22、BF27、BB01鉴定为枝孢菌属Cladosporium sp.。

基于网络药理学和分子对接法研究六堡茶干预COVID-19的活性成分

采用网络药理学和分子对接法探究六堡茶干预COVID-19的物质基础和作用机制。通过文献与中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)等数据库,检索得到六堡茶的化学成分并对其进行筛选得到六堡茶活性成分及对应靶标,并将对应靶标导入Uniprot数据库中进行基因名的校正,运用Cytoscape 3.7.1软件构建"六堡茶-成分-靶标"网络。通过GeneCards数据库对COVID-19疾病靶点进行预测。将六堡茶与疾病的靶标进行映射,采用STRING数据库分析靶标蛋白的互作关系,从中筛选出核心靶标并运用DAVID等数据库对核心靶标进行GO(gene ontology)富集分析和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析。最后将筛选出来的活性成分与受体蛋白SARS-CoV-2 3CL水解酶(Mpro)进行分子对接。筛选得到6种六堡茶活性成分,分别是(+)-儿茶素、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、α-菠甾醇、(-)-儿茶素没食子酸酯、角鲨烯和氯化天竺葵素,对应作用靶标156个。其中与COVID-19的共同靶标112个,核心靶标38个。GO富集分析(P <0.01)主要涉及脂多糖、细胞对缺氧的反应等。KEGG通路富集分析得到六堡茶干预COVID-19相关的HIF-1、IL-17、T细胞受体等信号通路。分子对接结果显示六堡茶中的6种主要化学成分可分别与受体蛋白Mpro结合较好,且结合能与现有报道推荐的临床使用化学药相近。六堡茶中的核心化学成分(+)-儿茶素、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯、α-菠甾醇、(-)-儿茶素没食子酸酯、角鲨烯、氯化天竺葵素与Mpro结合并通过MAPK1、TNF等炎症和免疫相关的靶标介导HIF-1、IL-17、T细胞受体等信号通路发挥干预COVID-19的功效。实验进一步对结合能较低的EGCG进行了Mpro的活力测定,发现IC50为3.4μmol/L,证实EGCG对Mpro有一定的抑制效果。

蓝莓内生真菌BB01抗菌活性的研究

以贵州省麻江县蓝莓种植基地的"粉蓝"蓝莓为试材,通过分离纯化、生物学鉴定、对峙试验、菌丝生长试验及刃天青微量平板稀释试验等方法,研究了蓝莓内生真菌BB01的抗菌活性,以期为开发绿色生物保鲜剂提供参考依据。结果表明:蓝莓健康组织(茎、叶、果实)中分离纯化出41株内生真菌,其中BB01、BL22、BF27、BB01及BF41可抑制全部4种病害菌生长;发酵培养BB01获得肉汤乙酸乙酯粗提取物(broth ethyl acetate extract,BE)、菌丝体正己烷萃取物(cell hexane,CH)和菌丝体乙酸乙酯萃取物(cell ethyl acetate,CE)。提取物CH对青霉孢子抑制效果最好,最小抑菌浓度为64μg·mL^(-1);提取物BE对枝孢菌、尖小丛壳菌及葡萄孢菌孢子抑制效果最好,最小抑菌浓度分别为16、256、128μg·mL^(-1),同时,提取物BE终浓度500μg·mL^(-1)时,可有效抑制4种病害菌菌丝生长(抑菌率分别为98.067302%±3.813437%、92.187892%±0.828473%、94.251883%±0.368539%、96.909029%±5.769104%)。采用PCR扩增内生真菌基因组rDNA-ITS序列构建系统发育树鉴定BB01为枝孢菌属。