环氧化酶2抑制剂parecoxib对C2C12骨骼肌细胞分化的影响及机制研究

目的:探讨环氧化酶2抑制剂帕瑞昔布(parecoxib)对C2C12小鼠骨骼肌细胞分化的影响及其分子机制。方法:CCK-8法检测不同浓度的parecoxib处理后C2C12细胞的活力;分化培养基诱导C2C12小鼠骨骼肌细胞48 h后,将细胞分为对照组(control组)和parecoxib组继续分化48 h。免疫荧光检测肌管细胞分化成熟的标志蛋白肌球蛋白重链(MyHC),qPCR和Western印迹分别检测My HC、肌原纤维Ⅰ型(Myh7)、Ⅱa型(Myh2)、Ⅱb型(Myh4)、Ⅱx型(Myh1)、肌生成决定因子(MyoD)、肌生成因子5(Myf5)、肌生成素(myogenin)的基因和蛋白表达。结果:0、100、150、200、250、300μmol/L的parecoxib均不影响细胞活力。与对照组相比,parecoxib组MyHC阳性肌纤维数量减少,肌管融合受损,分化程度降低,MyHC、MyHCⅡa、MyHCⅡb、MyHCⅡx、MyoG、MyoD和Myf5的mRNA水平降低(t=19.04、53.93、72.38、33.72、15.32、3.061、18,均P<0.05),MyHCⅠ的mRNA水平升高(t=17.12,P<0.01)。Western印迹结果显示,与对照组相比,parecoxib组MyHC、MyHCⅡa、MyHCⅡb、MyHCⅡx、MyoG和MyoD蛋白水平降低(t=7.297、7.852、11.43、227、80.14、11.76,均P<0.01),MyHCⅠ蛋白水平升高(t=5.891,P<0.01)。结论:Parecoxib可能通过下调MyoG、MyoD和Myf5的表达,抑制C2C12骨骼肌细胞的分化。

瑞帕利辛改善棕榈酸诱导的骨骼肌细胞胰岛素抵抗

目的:探讨瑞帕利辛(Reparixin)对棕榈酸(PA)诱导的C2C12成肌细胞胰岛素抵抗的影响。方法:CCK-8(cell counting Kit-8)法检测不同浓度的PA或Reparixin处理后C2C12成肌细胞活力;将C2C12成肌细胞分为牛血清白蛋白组(BSA组)、PA组、PA+Reparixin组,免疫印迹检测SOCS3蛋白水平及胰岛素信号分子蛋白激酶B(Akt)和160 kD的蛋白激酶B底物(AS160)磷酸化水平,qPCR检测SOCS3 mRNA水平。将C2C12-GLUT4myc小鼠成肌细胞同上分组,ELISA检测细胞GLUT4myc转位。结果:0、100、200、300μmol/L的PA和0、20、30、40μmol/L的Reparixin均不影响C2C12细胞活力。PA降低胰岛素磷酸化Akt和AS160的作用(均P<0.0001),Reparixin逆转PA的影响(F=86.78、264.6,P<0.001,P<0.0001)。PA降低胰岛素促进GLUT4myc转位的作用(P<0.001),Reparixin逆转PA的影响(F=41.4,P<0.01)。PA上调SOCS3 mRNA(P<0.001)和蛋白水平(P<0.05),Reparixin逆转PA对SOCS3的影响(F=51.64、7.97,P<0.001,P<0.05)。结论:Reparixin可能通过下调SOCS3基因和蛋白表达,缓解棕榈酸诱导的小鼠C2C12成肌细胞胰岛素抵抗。