大肠杆菌多酚氧化酶的分子克隆及异源高效表达

菜籽粕、棉籽粕等非粮饲料资源存在的酚类化合物芥子碱、棉酚等抗营养因子,严重影响了其饲喂价值。本课题组筛选出的一株大肠杆菌属芥子碱降解菌SDB2已被证实能通过分泌多酚氧化酶来降解芥子碱和棉酚,本试验旨在运用基因工程技术克隆SDB2多酚氧化酶基因,实现其高效表达,为SDB2多酚氧化酶在饲料工业上的规模化应用奠定基础。从大肠杆菌SDB2中克隆出多酚氧化酶基因,将其与质粒pET28a连接后转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中培养,通过PCR鉴定及质粒酶切验证方法构建重组菌株,同时对重组克隆基因进行生物信息学分析。采用“2×2”交叉试验设计,以温度和诱导剂IPTG浓度两个影响因素诱导SDB2多酚氧化酶基因在重组菌株中高效表达,经SDS-PAGE和WB双重验证后,确立最佳诱导条件,最终纯化出目标酶蛋白。结果表明:(1)成功克隆SDB2多酚氧化酶基因,构建出异源表达重组菌株。(2)克隆出的SDB2重组多酚氧化酶基因含目标核苷酸741个,总编码氨基酸263个(含标签氨基酸20个),氨基酸组成的蛋白相对分子质量为28499.0,理论等电点为6.94,据此预测出SDB2重组多酚氧化酶三维结构模型。(3)确立SDB2多酚氧化酶异源高效表达的最佳诱导条件为温度37℃,IPTG浓度1 mmol,该条件下表达出大量可溶性酶蛋白,有利于工业化生产。本试验条件下,大肠杆菌SDB2多酚氧化酶成功实现了分子克隆及异源高效表达,为我国非粮饲料资源实现高效利用提供了技术参考。

白芥子诱导的鸡内源性芥子碱降解菌的筛选、鉴定及酶活测定

本试验旨在通过分离鉴定白芥子诱导的芥子碱降解菌,并对其核心功能酶漆酶进行酶活测定,建立芥子碱的生物降解方法,为探寻白芥子等十字花科类非粮饲料资源的高效利用提供技术支撑。本试验以藏香鸡为模型,在基础日粮中添加20%白芥子饲喂28 d进行芥子碱降解菌体内诱导。分别采集鸡空肠、回肠、盲肠内容物在不同培养基中分离筛选芥子碱降解菌,对筛选出的优势菌进行形态学和分子生物学鉴定,测定该菌株的芥子碱降解效果和漆酶活性。结果表明:(1)在鸡盲肠中筛选出9株目标菌,筛出率明显高于空肠和回肠,并进一步选出1株芥子碱降解优势菌SDB2(Sinapine-degrading bacteria 2)。(2)经鉴定,SDB2菌株属于变形菌门;γ-变形菌纲;肠杆菌目;肠杆菌科;大肠埃希菌。(3)芥子碱浓度与SDB2菌株培养时间存在极显著的线性回归关系(P <0.01),芥子碱浓度随培养时间增加而降低,培养72 h的芥子碱降解率可达50%。(4)漆酶活力与SDB2菌株培养时间存在极显著的线性回归关系(P <0.01),漆酶活力随培养时间增加而降低。(5)漆酶活力与芥子碱浓度存在极显著的线性回归关系(P <0.01),漆酶活力与芥子碱浓度呈正相关。综上,本试验条件下,筛选出的SDB2能利用自身分泌的漆酶有效降解芥子碱,为高效利用十字花科类非粮饲料资源奠定了基础。

膨化发酵菜籽粕对肉鸡生长性能、血清生化及抗氧化指标的影响

试验旨在研究膨化发酵菜籽粕对肉鸡生长性能、血清生化及抗氧化指标的影响。选择60日龄、平均体重700 g左右的崇仁麻公雏鸡600只,随机分为5组,每组5个重复,每个重复24只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验组分别在日粮中添加2.5%、5.0%、7.5%、10.0%膨化发酵菜籽粕。试验期56 d。结果表明:2.5%、5.0%、7.5%、10.0%膨化发酵菜籽粕组平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和耗料增重比(F/G)与对照组均无显著差异;膨化发酵菜籽粕添加水平与F/G存在二次回归关系(P<0.05),F/G随添加水平升高呈先降低后上升的趋势,以5.0%添加量最低;各组血清碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)和尿素氮(BUN)含量均无显著差异;各组血清过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均无显著差异,5.0%膨化发酵菜籽粕组总抗氧化能力(T-AOC)含量与0.0%组无显著差异,2.5%和5.0%膨化发酵菜籽粕组丙二醛(MDA)含量与对照组无显著差异。本试验条件下,肉鸡日粮中添加5.0%膨化发酵菜籽粕效果最佳。

膨化发酵菜籽粕对肉鸡肉质风味及肝脏病理的影响

为研究膨化发酵菜籽粕对肉鸡肉质风味及肝脏病理的影响,试验选择60日龄、平均体重700 g左右的崇仁麻公鸡600只,随机分为5个处理组,每个处理组5个重复,每个重复24只鸡。对照组(0.0%组)饲喂基础日粮,试验1、2、3、4组分别在基础日粮中添加2.5%、5.0%、7.5%、10.0%膨化发酵菜籽粕等氮替代豆粕。试验期56 d。结果表明:(1)与对照组相比,除胸肌肉黄度b*值存在显著差异的趋势(P=0.09,0.05≤P<0.10)外,其余肉质指标pH45 min、pH24 h、24 h滴水损失、胸肌肉亮度L*值和红度a*值均无显著差异(P>0.05)。(2)与对照组相比,各试验组的肌肉肌苷酸、天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸等风味氨基酸含量、必需氨基酸及16种氨基酸总量均无显著差异(P>0.05)。(3)与对照组相比,各试验组肝细胞病理损伤评分均无显著差异(P>0.05);对膨化发酵菜籽粕添加水平和肉鸡肝细胞病理损伤评分进行回归分析,未发现两者之间存在线性或二次回归关系。本试验条件下,膨化发酵菜籽粕等氮替代豆粕对崇仁麻鸡肉品质、风味均无明显影响,且未引起肝细胞发生明显的病理损伤,说明膨化发酵菜籽粕替代豆粕是可行的。

川牛膝多糖对鸡血清抗体和血液生化指标的影响

给7日龄仔鸡饲喂400mg/kg的川牛膝多糖,同时设对照组。在14、21和28日龄采颈静脉血,分别检测血清抗体(IgG、IgA、IgM)和血液生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、钙、白蛋白)。结果显示:川牛膝多糖400mg/kg剂量组与对照组相比,IgG、IgA和IgM差异均显著(0.01<P≤0.05),而白蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、钙的差异均不显著。说明川牛膝多糖可通过提高血清水平来提高机体的免疫能力;同时对机体各项血液生化指标无不良影响,可作为饲料添加剂应用于畜禽业。

系留气球雷电直接效应防护设计

系留气球携带大量电气、电子设备,升空执行探测、通信等任务,其体积比较大,空中工作时停泊高度高,容易遭受雷电直接伤害。通过对避雷索保护范围、防雷杆高度以及避雷索截面积等重要参数的分析计算,为系留气球雷电直接效应防护设计提供关键性依据。保证系统安全可靠地长时间留空工作,对系统进行了完善的直击雷防护设计。

MCS-51单片机与GPS-OEM板的串行数据通讯的实现

本文讨论了读取GPS-OEM板定位数据的方法,介绍了OEM板及其基本应用系统的组成和特点,着重对NMEA-0183语句的数据格式,单片机与OEM板的串行数据通讯进行了论述。

翻车机C_(70E(H)-A)敞车适应性改造研究与应用

本论述针对C_(70E(H)-A)敞车容积增大、高度提升,国内最大载重110 t的单车翻车机不适合对C_(70E(H)-A)敞车的翻卸作业需求的问题,通过研究C_(70E(H)-A)敞车结构改造中的通过性及压车机构安全可靠压紧敞车的技术难题,深入分析翻车机压车机构的结构形式和压车梁的压车力学结构,比较分析翻车机压车梁上耐磨橡胶板与C_(70E(H)-A)敞车上侧梁接触宽度和压车形态,提出压车梁铰支座位置改进并将压车梁上三角形耐磨橡胶板优化为圆弧形的受力结构的方法。运用图示计算、仿真模拟和工程实验等方法,对改进后的翻车机经过多项技术匹配性试验与测试,改进后的翻车机满足现有60 t级和70 t级敞车的翻卸要求,达到C_(70E(H)-A)敞车安全翻卸的技术标准,验证了所用方法、技术合理,结构安全可靠,实现了技术改进的目的。

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