PCT和NT-proBNP对脓毒血症患者生存状况的预测价值

目的探讨降钙素原(PCT)与N端前体脑利钠肽(NT-pro BNP)对脓毒血症患者生存状况的预测价值。方法 56例脓毒血症患者根据患者纳入研究后28 d的生存状况分为死亡组和存活组。对比两组患者间PCT和NT-pro BNP和急性生理与慢性健康状况(APACHEⅡ)评分,并建立ROC曲线,观察PCT、NT-pro BNP对患者生存预后评估的价值。结果两组患者间PCT、NT-pro BNP和APACHEⅡ评分的差异具有统计学意义(P<0.05)。PCT、NT-pro BNP与APACHEⅡ评分的Pearson相关性分析结果显示均具有显著相关性(r=0.306,P=0.016;r=0.295,P=0.012)。各项指标生存状况的ROC曲线的敏感性与特异性均较高。NT-pro BNP的预测敏感性与特异性分别为78.5%、71.6%,PCT的预测敏感性与特异性分别为82.4%、85.2%,PCT与NT-pro BNP联合应用对患者生存状况的预测敏感性与特异性分别为77.9%、89.5%。结论 PCT与NT-pro BNP对脓毒血症患者的生存状况有很好的预测价值,两者联合应用检测能够提升特异性。

高效液相色谱-串联质谱法检测血清油酸及其在胰岛素抵抗中的应用

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测血清油酸(OA),初步评估OA在2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗(IR)中的作用。方法用OA-[^(13)C_5]作为同位素内标物,OA和OA-[^(13)C_5]的离子对分别为281.3/281.3和286.3/286.3。ZORBAX SB-Aq C18反相色谱柱,流动相A为超纯水,流动相B为甲醇乙腈(1∶1,v/v),梯度洗脱,流速0.3 mL/min。根据EP15-A3文件,考察精密度和正确度、线性范围、稳定性、携带污染率等性能以评价该方法的可靠性。选取临床确诊T2DM患者109例及体检健康者100例,用HPLC-MS/MS检测血清OA,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价IR,进一步分析OA与IR的关系。结果建立的检测OA的HPLC-MS/MS特异性好,在10～1 000μmol/L范围内线性关系良好,y=0.007 55x+0.004 83,r=0.997 7,定量限(LLOQ)为10μmol/L,批内不精密度(以变异系数CV表示)≤1.62%,实验室内CV≤1.73%,方法精密度较好,适合临床血清样品的测定。与健康人对照组血清OA水平(113.20±58.00)μmol/L比较,T2DM组血清OA水平(425.58±220.17)μmol/L升高,且对照组和T2DM组OA与HOMA-IR均呈正相关。以OA诊断IR的AUC为0.689,当根据约登指数确定cut-off值为235.8μmol/L时,敏感性为70.4%,特异性为63%;当OA联合FPG诊断IR时,AUC增至0.806,且与OA诊断IR的AUC比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论建立了科学、高效定量检测血清OA浓度水平的HPLC-MS/MS,为动态监测代谢性疾病人群OA含量的变化提供了可靠的方法。

ICU病原菌的分布特点及耐药分析

目的了解ICU病原菌分布特点及其耐药性。方法对2013年1~12月上海市第八人民医院ICU所有病原菌进行细菌鉴定与药敏试验。结果共分离出病原菌187株,其中革兰阳性菌37株（占19.79%）,以金黄色葡萄球菌为主,革兰阳性菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺耐药率为0.00%;分离革兰阴性菌135株（占72.19%）,以铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌为主,其中鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、米诺环素耐药率较低,分别为43.59%、46.15%,铜绿假单胞菌对阿米卡星、头孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低,分别为27.91%、32.56%,30.23%;分离出真菌15株（占8.02%）,主要为白色假丝酵母菌、热带假丝酵母菌。结论定期检测ICU病原菌的分布种类和耐药变化,为临床合理使用抗菌药物提供依据。

G6PI对阿霉素诱导类风湿关节炎关节滑膜细胞凋亡的保护作用

研究葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,G6PI)对阿霉素(adriamycin,ADR)诱导类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响,探讨其作用机制。本研究从RA的关节滑膜组织中分离培养FLS,利用ADR建立细胞凋亡模型,通过流式细胞仪检测G6PI对细胞凋亡的影响,并通过western blot、Q-PCR检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase 3、Fas、Cyclin B1的表达;收集细胞培养上清,通过ELISA方法测定IL-1β和TNF-α含量。结果显示,G6PI(1μg/ml)和G6PI(10μg/ml)组RA-FLS的凋亡指数均显著低于ADR对照组;G6PI(1μg/ml)组与G6PI(10μg/ml)组间无显著差异。ADR凋亡模型中,Caspase 3、Fas和Bax表达明显上调,Cyclin B1下调;G6PI作用后,Caspase 3和Fas表达明显低于对照组,Cyclin B1表达则明显高于对照组。G6PI处理组的细胞培养上清中IL-1β和TNF-α含量均显著高于ADR对照组。研究表明G6PI可能通过Fas介导的Caspase通路来保护FLS免遭凋亡,同时促进RA-FLS分泌炎症因子IL-1β和TNF-α,从而参与RA的发生与发展。

小干扰RNA沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响

目的 研究小干扰RNA（siRNA）沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PADI4）基因在滑膜成纤维细胞（FLS）凋亡调控中的作用,为进一步研究PADI4在RA发病机制中的作用奠定基础.方法 设计并合成2对针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链,通过脂质体介导将siRNA转入RA-FLS细胞中,作用48 h后收集FLS细胞,抽提RNA逆转为cDNA,并提取FLS细胞蛋白质,通过荧光定量PCR、蛋白印迹技术,确定siRNA成功干扰PADI4表达后,比较siRNA实验组FLS细胞和对照组FLS细胞凋亡率,细胞周期调控蛋白CyclinB1和P21的表达量.收集细胞培养液,ELISA法测定IL-1β.所有数据采用配对t检验进行分析.结果 所设计的针对PADI4的siRNA成功干扰PADI4在FLS中的表达,空白对照组（si-NC）中PADI4 mRNA水平为1.00±0.20,si-944和si-1225干扰组分别为0.38±0.20（t=9.607,P＜0.01）和0.39±0.23 （t=8.394,P＜0.01）;FLS中与对照组细胞凋亡率（1.6±0.3）％相比,si-944和si-1225干扰组分别为（5.4±0.6）％（t=-19.223,P＜0.01）,（6.1±0.6）％（t=-24.229,P＜0.01）,细胞凋亡明显增加.siRNA转染组细胞周期蛋白CyclinB1表达下降,P21表达上升.与对照组IL-1β水平（23.9±0.7） ng/ml相比较,si-944和si-1225干扰组IL-1β分泌增多[分别为（26.8±0.7） ng/ml,（27.7±0.7） ng/ml;t=-10.747,-10.967,P均＜0.01）.结论 PADI4在FLS细胞凋亡中起着重要的调控作用,可能在RA的发病中起着一定的作用.

超高效液相色谱串联质谱检测α-羟基丁酸方法的建立

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测血清α-羟基丁酸(α-HB)的方法。方法方法学建立及评价。使用电喷雾电离源负离子及多反应监测模式检测α-HB,对方法的线性范围、定量下限、精密度、回收率、干扰等进行评估,并检测上海市东方医院收集的表观健康人群血清标本130份(其中来自男62例,女68例)初步建立该方法的参考区间,用Dixon法判断离群值,采用K-S检验进行数据正态性分析,标准曲线采用一元线性回归分析。结果所建立的方法分析时间为4 min,在0.5~40.0 mg/L浓度范围内线性良好(r=0.999 4);定量下限为0.5 mg/L;批内和批间精密度分别小于4.1%和6.3%;回收率在95.8%~103.8%;溶血样本(血红蛋白浓度约为5 g/L)、脂血样本(三酰甘油浓度约为12 mmol/L)、黄疸样本(总胆红素浓度约为150 μmol/L)对检测无明显干扰,表观健康人群参考区间为1.46~6.48 mg/L。结论本研究建立了UHPLC-MS/MS检测血清α-HB的方法,方法性能满足临床检测,且简便快速,可用于临床样本检测。