五味子乙素对胰腺癌Pan02细胞增殖的抑制作用及其机制

目的:探讨五味子乙素对胰腺癌Pan02细胞增殖的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度(0、0.78、1.56、3.12、6.25、12.50和25.00 mg·L^(-1))五味子乙素作用下Pan02细胞增殖率,以选择五味子乙素作用的最适浓度和最佳作用时间。小鼠胰腺癌Pan02细胞分为对照组(0 mg·L^(-1)五味子乙素)、2.5 mg·L^(-1)五味子乙素组、5.0 mg·L^(-1)五味子乙素组和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组。光学显微镜观察各组Pan02细胞形态表现,5-乙基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测各组Pan02细胞中EdU阳性细胞率,流式细胞术检测各组不同细胞周期Pan02细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组Pan02细胞周期和凋亡相关蛋白表达水平。结果:CCK-8法,五味子乙素作用Pan02细胞48和72 h后,与0 mg·L^(-1)五味子乙素比较,其他浓度五味子乙素作用下Pan02细胞增殖率明显降低(P<0.01),72 h时细胞抑制作用最明显。选择0、2.5、5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素作用Pan02细胞,作用时间为72 h。对照组Pan02细胞呈长梭形,状态良好,紧密且贴壁生长,细胞器和细胞质正常;2.5和5.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞体积减小,细胞之间黏连消失,细胞膜虽完整但通透性增强,细胞质皱缩,细胞内部产生空泡结构,部分呈碎片状漂浮于溶液表面;10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞有明显凋亡小体生成,呈现凋亡状态。EdU染色法,与对照组比较,2.5、5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞中EdU阳性细胞率均明显降低(P<0.01)。流式细胞术,与对照组比较,2.5、5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞S期细胞百分率明显升高(P<0.01),G_(2)/M期细胞百分率明显降低(P<0.01),5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组G_(0)/G_(1)期细胞百分率明显降低(P<0.01);与对照组比较,2.5、5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。Western blotting法,与对照组比较,2.5 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞中p27、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)和裂解的多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶(cleaved PARP)蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)A2、Cyclin E2和Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),p27、 Bax、 cleaved Caspase-3和cleaved PARP蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:五味子乙素具有抑制胰腺癌Pan02细胞增殖的作用,其作用机制可能与激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)通路诱导细胞凋亡和激活p27蛋白并诱导细胞周期S期阻滞有关。

载外泌体银纳米颗粒抗菌水凝胶的构建及其对人表皮HaCaT细胞增殖的影响

目的:构建负载间充质干细胞外泌体(MSC-Exo)和银纳米颗粒(AgNPs)抗菌水凝胶,初步探讨该水凝胶的抗菌活性及促人表皮HaCaT细胞增殖的效果,阐明其在皮肤损伤治疗方面的应用潜力。方法:利用氧化葡聚糖(ODex)和改性透明质酸(HA-ADH)制备基础水凝胶骨架,以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为稳定剂制备AgNPs;培养间充质干细胞(MSC)获取MSC-Exo。构建AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶和MSC-Exo@AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶。通过BCA法评估外泌体的负载率,选用动态光散射(DLS)分析、Zeta电位分析、紫外-可见分光光度计表征AgNPs形貌、表面带电情况和结构,利用红外光谱表征HA-ADH/ODex水凝胶骨架的结构组成,通过透射电子显微镜(TEM)、纳米流式检测仪和蛋白免疫印迹(Western blotting)法对MSC-Exo进行鉴定,CCK-8法检测HA-ADH/ODex水凝胶和AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶的细胞存活率及MSC-Exo@AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶对HaCaT细胞的细胞增殖率的影响,平板涂布法和比浊法评估AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶的抗菌活性。结果:DLS分析、Zeta电位分析和紫外分光光度计检测,成功制备了粒径大小均一、表面带正电的AgNPs。红外光谱检测,HA-ADH/ODex水凝胶制备成功。TEM、纳米流式检测和Western blotting法验证MSC-Exo成功提取,BCA法证实在MSC-Exo@AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶中MSC-Exo负载率为77.8%。CCK-8法检测,稀释倍数为0、1、2、4、8、16、32和64的HA-ADH/ODex水凝胶浸提液处理的HaCaT细胞存活率接近100%。稀释8倍及以上的AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶浸提液处理的HaCaT细胞存活率均大于85%。平板涂布法检测,AgNP/HA-ADH/ODex和MSC-Exo@AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶具有明显的抗菌活性,其对金黄色葡萄球菌(S.aureus)的抗菌率分别为(96.44±0.16)%和(96.62±0.16)%,对大肠杆菌(E.coli)的抗菌率分别为(95.73±0.28)%和(95.58±0.14)%。CCK-8法检测,MSC-Exo@AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶能够促进HaCaT细胞增殖,细胞增殖率为(115.00±7.42)%。结论:MSC-Exo@AgNP/HA-ADH/ODex水凝胶具有优异的抗菌性能,能够有效促进人表皮HaCaT细胞的增殖,可作为一种安全有效的生物敷料,用于皮肤创伤的治疗。

高频感应电机车在我国井下的应用前景

目前,在我国煤炭工业中,井下平巷运输约有80%以上使用电机车,包括架线式和蓄电池式两种型式。架线式电机车运输系统由牵引变流所,架空线。