电针对心肌缺血损伤小鼠心肌组织中巨噬细胞极化和TLR4、MyD88表达的影响

目的观察电针对心肌缺血损伤小鼠心功能及心脏组织中巨噬细胞极化、TLR4、MyD88等表达的影响,探讨电针促进心肌损伤保护的可能机制。方法27只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组9只。模型组、电针组通过结扎心脏冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型。电针组于造模成功后,电针小鼠双侧“内关”穴治疗:2/15 Hz,疏密波,1 mA,20 min·次-1,每日1次,共治疗7 d。运用超声心动图评价小鼠心脏射血分数(EF)及短轴收缩率(FS),天狼星红染色观察小鼠心脏纤维化情况,流式细胞术检测心肌组织中中性粒细胞、巨噬细胞数量及各表型巨噬细胞占比,qPCR法检测心肌组织中TNF-α、IL-1β的mRNA表达量,Western blot法检测心肌组织中TLR4、MyD88、IL-1β、IL-17A的蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组小鼠EF、FS值下降(P<0.0001),胶原容积分数升高(P<0.001),心脏组织中中性粒细胞、巨噬细胞数增多(P<0.0001,P<0.001),同时M1型巨噬细胞占比增高(P<0.05),心肌组织中TNF-α、IL-1β的mRNA表达量上升(P<0.01,P<0.001),TLR4、MyD88、IL-1β、IL-17A蛋白表达水平上升(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,电针组小鼠EF、FS值升高(P<0.01,P<0.001),胶原容积分数降低(P<0.001),心脏组织中中性粒细胞、巨噬细胞数减少(P<0.0001,P<0.01),其中M2型巨噬细胞占比增高(P<0.05),心肌组织中TNF-α、IL-1β的mRNA表达量下降(P<0.001),TLR4、MyD88、IL-1β、IL-17A蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.001)。结论电针可能通过降低TLR4、MyD88在心肌组织中的表达,促进心肌缺血损伤后心脏巨噬细胞向M2型极化,减轻局部炎症,抑制心肌纤维化,实现心肌保护效应。

从肾虚血瘀论治更年期综合征

本更年期综合征的治疗以补肾为根本大法,但活血化瘀亦具有重要意义。盖因精血同源,血瘀则精血凝滞,输布受阻,无以为继,治疗中应注重补肾活血的应用,分清阴阳虚实,辨明病因病性,标本兼治。

梓醇促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖过程中Wnt信号通路的变化

目的:观察梓醇促进大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖过程中Wnt信号通路的变化。方法:(1)采用机械分离及差速贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,将细胞分为空白对照组与梓醇(1.0 mg/L)处理组,流式细胞术检测各组细胞细胞周期分布情况,计算其增殖指数。(2)实时荧光定量PCR法检测各组细胞中Wnt3a、Wnt5a、Wnt11及β-catenin mRNA的表达水平;Western blotting技术检测各组细胞β-catenin蛋白的表达变化。结果:(1)空白对照组与梓醇处理组BMSCs增殖指数分别为8.90%±0.46%和17.93%±1.68%(P<0.01)。(2)与空白对照组相比,梓醇处理组Wnt5a、Wnt11、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白表达均明显提高,但Wnt3a mRNA表达无显著变化。结论:梓醇在促进BMSCs增殖过程中可同时激活经典与非经典Wnt信号通路。

梓醇促大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化的机制研究

目的:探讨梓醇促SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)骨向分化的作用机制。方法:(1)细胞分为对照组、成骨诱导组及梓醇组。4-氨基安替吡啉测酚法检测诱导第7、14和21天各组细胞上清碱性磷酸酶(ALP)活性,ALP染色法检测诱导第14天各组细胞ALP阳性染色率,茜素红染色法检测诱导第21天各组细胞矿化结节数;(2)运用real-time PCR法检测诱导第7、14和21天各组细胞中Runx2、骨钙素(osteocalcin)、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt3a、Wnt5a及Wnt11的mRNA表达水平。结果:(1)2.0 mg/L梓醇可增加BMSCs上清中ALP活性及细胞ALP的阳性染色率,同时促进BMSCs矿化结节的形成(P<0.05)。(2)梓醇促BMSCs骨向分化时,Runx2的mRNA表达水平于第14天时达到峰值,随后开始下降,第21天时与对照组无统计学差异;osteocalcin的mRNA相对表达量在第7天时高于对照组,随后持续上升直至第21天。(3)与对照组相比,梓醇促BMSCs骨向分化时,β-catenin与Wnt3a的mRNA相对表达量均于第14和21天时升高并维持在较高水平,而Wnt5a及Wnt11的mRNA相对表达量在第14天达到峰值后开始下降,第21天时Wnt11 mRNA相对表达量显著低于对照组。结论:梓醇通过上调Runx2的表达,促使BMSCs向成骨细胞方向分化,同时还通过增加细胞ALP分泌及osteocalcin的表达,促进细胞矿化的发生,从而促使新生成骨细胞的成熟,此作用可能与其有序激活Wnt信号通路相关。

不同浓度梓醇对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化的影响

目的观察梓醇对SD大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及骨向分化的影响。方法采用机械分离及差速贴壁法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞;MTT法检测不同浓度梓醇在不同时间点(1,3,5,7,9,11 d)对大鼠BMSCs增殖情况的影响;氨基安替吡啉测酚法检测不同浓度梓醇在第3天,6天,9天,12天,15天,18天,21天对细胞上清中ALP活性的影响,茜素红染色法检测不同浓度梓醇对BMSCs矿化情况的影响。结果梓醇促BMSCs增殖的最佳浓度为1.0 mg/L;促BMSCs骨向分化的最佳浓度为2.0 mg/L。结论梓醇具有促BMSCs增殖及骨向分化的作用。

益骨胶囊含药血清在共育体系中对大鼠成骨细胞增殖、ALP活性及IL-11 mRNA表达的影响

目的:观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及白细胞介素-11(IL-11)mRNA表达的影响。方法:(1)取1d龄SD大鼠颅骨分离培养OB,取5d龄SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养破骨细胞(OC),建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,实验分为两组(含药血清组和对照组)。(2)MTT法检测OB增殖,氨基安替吡啉测酚法测定ALP活性,FQ-PCR法测定IL-11mRNA相对表达量。结果:含药血清组中OB的A值、ALP活性、IL-11/β-actin比值均高于对照组(P<0·05)。结论:益骨胶囊含药血清在共育体系中可促进OB增殖、增强OB ALP活性,提高IL-11mRNA的表达。

组蛋白去乙酰化酶:缺血性脑卒中治疗的潜在新靶点

缺血性脑卒中病理生理机制主要包括以神经细胞死亡、炎症发生、血脑屏障破坏等组织损伤为特征的急性期和以神经血管恢复为特征的后期,目前缺乏有效的治疗药物〔1〕。以往研究〔2〕显示仅仅针对脑卒中病理生理机制中单一环节的药物,即使在动物模型中可以有较好的效应,均无法在临床实验中取得相应的疗效。目前认为,只有作用于脑卒中发生发展的多个病理环节并发挥强大神经保护作用的药物才有可能成为有效的脑卒中治疗新药〔2〕。

TNF-α对共育体系中成骨细胞凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对成骨-破骨细胞共育体系中成骨细胞(OB)凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用。方法:(1)将20只10月龄SD大鼠随机分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水灌胃组,制备含药血清与空白血清;(2)将分离的OB与破骨细胞(OC)分别接种到共育体系中,加培养液培养后,同时添入20μg/L、30μg/L、40μg/L、50μg/L、60μg/LTNF-α分别作用24h、48h、72h诱导OB凋亡,用DNA电泳法确定最佳诱导方案;(3)将细胞分为TNF-α组、TNF-α+含药血清组、TNF-α+空白血清组和正常对照组,分别加入DMEM培养液、含药血清培养液、空白血清培养液、DMEM培养液,除正常对照组加入PBS外,其它各组均同时加入60μg/LTNF-α,培养72h后,用荧光染色法、DNA电泳法、流式细胞仪观察各组OB凋亡情况。结果:(1)60μg/LTNF-α作用72h后,共育体系中OBDNA电泳呈较典型的梯形改变;(2)TNF-α+含药血清组中OBDNA电泳仅出现二个条带,荧光染色可见大多数细胞均匀染色,其凋亡率(9.60%±0.26%)明显低于TNF-α组(26.90%±0.06%)与TNF-α+空白血清组(18.10%±0.06%),P<0.01。结论:60μg/LTNF-α作用72h可诱导共育体系中OB凋亡;益骨胶囊含药血清对TNF-α诱导的OB凋亡具有抑制作用。

科研型中医专业研究生培养现状及思考

研究生教育是一个国家教育和科技发展水平的重要标志,本文通过分析目前科研型中医研究生培养中两大主体:研究生及导师各自存在的一些问题,提出对科研型研究生教育改革的一些设想,以期为中医研究生教育模式提供参考。

5-HT与肠道菌群及其在肠-脑相关疾病中的作用研究进展

脑-肠轴是指胃肠道和大脑间相互作用的双向调节系统,肠道菌群目前被认为是调节脑-肠互动的重要调节者。研究显示肠道菌群通过分泌或干预具有神经活性的物质,如神经递质或者其代谢产物的生成,不仅直接影响肠道功能,还可通过肠神经系统影响大脑神经功能,肠道菌群发生改变的动物,其行为和神经生化方面也出现明显的改变,产生中枢神经系统方面问题;相对应的,中枢神经系统疾病也常常伴随肠道症状与肠道菌群的改变[1—2]。

电针预处理抗心肌缺血再灌注损伤及其对MAPK信号通路的影响

目的探讨电针(EA)预处理抗心肌缺血再灌注(I/R)损伤及其大鼠MAPK信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为6组:假手术组(SO)、电针内关穴+SO组(ES)、电针非经非穴+SO组(NS)、I/R组(I/R)、电针内关穴+I/R组(EA)、电针非经非穴+I/R组(NA),每组6只。ES、EA电针内关穴,NS、NA电针鼠尾,连续治疗12d后造模。I/R、EA、NA组均结扎左前降支建立心肌I/R模型,SO、ES、NS组均开胸不结扎。手术过程中监测心电图,测血清肌酸激酶同工酶(CK-Mb),用Western blot检测MAPK信号通路相关蛋白的表达水平。结果与SO组比较,I/R组大鼠血清CK-Mb水平、心律失常评分、蛋白PSAPK/JNK、P-P44/42和Ras表达均增加(P<0.05),而P-P38水平减低(P<0.05)。与I/R组比较,EA、NA组CK-Mb水平均降低,EA组心律失常评分明显减少(P<0.05),EA、NA组P-P44/42和Ras表达均下调(P<0.05),而P-P38水平增高(P<0.05)。结论电针预处理能有效保护心肌抗I/R损伤,该效应可能与其调节受损心肌组织中MAPK信号通路密切相关。

电针对中枢Stat5敲除所致肥胖小鼠瘦素水平和下丘脑Kctd15、Sh2b1 mRNA的影响

目的观察电针对中枢Stat5条件性敲除Stat5Nestin-Cre（Stat5NKO）肥胖小鼠下丘脑Kctd15、Sh2b1基因表达的影响。方法 20只肥胖的Stat5NKO小鼠随机分为肥胖组和电针组,每组10只;10只Stat5fl/fl小鼠作为正常组。其中电针组选取单侧后三里、内庭穴进行针刺治疗,每日1次,双侧交替进行,每次30min,韩氏电针仪频率2/15Hz,疏密波,6d为1个疗程,共治疗4个疗程。运用ELISA法检测血清中瘦素（Leptin）含量,qPCR技术检测下丘脑中肥胖相关基因Kctd15、Sh2b1mRNA的表达。结果与正常组小鼠比较,肥胖组小鼠体质量明显增加（P〈0.01）伴随血清Leptin含量升高（P〈0.05）,下丘脑Leptin水平下降（P〈0.05）,同时下丘脑Kctd15、Sh2b1mRNA表达下调（P〈0.05～0.01）;与肥胖组小鼠比较,电针组小鼠的体质量明显下降（P〈0.01）,血清Leptin含量降低（P〈0.01）,且下丘脑Leptin水平回升（P〈0.01）,Kctd15、Sh2b1mRNA表达水平上调（P〈0.01）。结论电针可能通过调节Leptin水平并促进Kctd15、Sh2b1表达,实现对Stat5NKO小鼠的减肥效应。

Th17-STAT3正反馈通路在类风湿性关节炎促炎机制中的研究进展

类风湿性关节炎是一种慢性炎症性系统性的自身免疫性疾病,发病可累及多关节以及全身多个系统。其发病机制与多种细胞因子有着密切的关系。Th17细胞是T细胞新发现的亚群,经研究证实其分泌的IL-17等多种细胞因子能诱导严重的自身免疫性反应。JAK/STAT信号通路,尤其是STAT3信号通路对类风湿慢性炎症有着重要的正反馈促进作用。Th17细胞的分化与调节机制和STAT3信号通路正反馈调节作用的进一步研究可以为探索类风湿性关节炎的治疗方法提供新的思路。

IL-17和NF-κB通路与类风湿性关节炎的相关性研究

类风湿关节炎发病机制与多种细胞因子有着密切的关系,随着分子生物学和免疫学的进展,类风湿性关节炎动物模型的建立,发现IL-17及NF-κB信号通路在风湿性关节炎中有着重要意义。Th17细胞的发现打破了以往Th1/Th2在风湿性关节炎中的主导作用,Th17细胞可以分泌多种炎症因子,其中大量分泌IL-17,与风湿性关节炎有密切关系。核因子-κB(即NF-kappa B),参与基因转录,并且在炎症和免疫反应中发挥重要作用。同时IL-17与NF-κB信号通路的相互关系可能为风湿性关节炎的治疗提供一种新的思路。

糖尿病骨质疏松症中医病机和治则探讨

糖尿病骨质疏松症涉及多个脏腑系统 ,其发病与脾肾亏损、血行瘀滞等密切相关。从脾肾论治为主 ,强调活血化瘀 ,应是提高糖尿病骨质疏松症临床疗效的有效方法和途径。

参慈胶囊联合顺铂抑制小鼠Lewis肺癌组织血管生成的机制研究

目的:探讨参慈胶囊及顺铂对Lewis肺癌组织生长及血管生成的抑制作用。方法:将40只C57BL/6小鼠自接种Lewis肺癌瘤株细胞建立实体瘤模型,随机分为参慈胶囊组、参慈胶囊+顺铂组、顺铂组、模型组。模型组予等量生理盐水,其余各组荷瘤小鼠均用药21 d,测量肿瘤重量并计算抑瘤率,采用免疫组化技术检测血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)表达情况;采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测Lewis肺癌荷瘤小鼠癌细胞表达血管内皮生长因子受体-2(KDR)mRNA的情况。结果:(1)在抑瘤率方面,参慈胶囊+顺铂组抑瘤率明显高于其它3组,差异显著(P<0.01)。(2)参慈胶囊+顺铂组能降低Lewis肺癌组织VEGF、KDR的表达及MVD的形成,差异显著(P<0.01)。结论:(1)参慈胶囊联合顺铂能抑制Lewis肺癌组织生长及血管生成,二者联用具有相加或者协同效应;(2)下调VEGF及其受体KDR的表达,可能是二者联合抗肿瘤血管生成的机制之一。

电针对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障保护机制研究

目的探讨电针人中、百会对脑缺血再灌注大鼠BBB损伤的作用机理,为针刺治疗脑卒中提供科学依据。方法选用健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组和电针组,采用Longa线栓改良法建立大鼠脑缺血再灌注(MCAO)模型,电针组在造模成功后电针刺激人中、百会30 min。采用神经功能缺损评分、CV染色法测定脑水肿肿胀率、免疫组织化学法与Western blot方法检测MCAO大鼠脑组织中ZO-1表达及以透射电镜观察大鼠右侧脑组织纹状体组织超微结构的变化。结果随着缺血再灌注时间的延长,大鼠神经功能缺损及BBB损伤程度均随再灌注时间延长而逐渐加重,而电针组的大鼠神经功能缺损程度明显低于模型组;模型组大鼠在缺血再灌注6 h缺血侧脑半球开始肿胀,并于72 h达到高峰,电针组大鼠在缺血再灌注24 h、48 h、72 h与模型组比较,差异有显著性(P <0.05或P <0.01);随着缺血再灌注时间的延长,模型组ZO-1蛋白表达显著降低,显著低于电针组,在缺血再灌注24 h、48 h和72 h经统计学处理,有显著性差异(P <0.05);电镜图示电针组较模型组脑组织超微结构损伤较小。结论电针人中、百会可减轻脑缺血再灌注造成的神经损伤,下调脑水肿肿胀率,抑制ZO-1蛋白下降,保护脑组织内的超微结构,以抑制脑缺血再灌注后血脑屏障的损伤。

益骨胶囊含药血清对共育体系中破骨细胞活性和凋亡的影响

目的:观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠破骨细胞(OC)活性和凋亡的影响。方法:(1)取1d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞(OB),取5d龄SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养OC,建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,实验分为含药血清组和对照组;(2)将10月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清;(3)重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和光镜观察骨陷窝数;(4)光镜和荧光显微镜下观察共育体系中OC凋亡情况。结果:含药血清组在48 h7、2 h9、6 h对成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRACP的活性均明显降低于对照组,OC的存活数明显低于对照组,OC的凋亡率明显高于对照组且呈明显的时效关系;所形成骨吸收陷窝的数目明显低于对照组(P<0.01)。结论:益骨胶囊含药血清在共育体系中能够抑制OC活性,诱导破骨细胞的凋亡。

细胞自噬与脑缺血

细胞自噬与脑缺血联系密切,两者相互影响,相互作用,脑缺血可激发细胞自噬作用,同时细胞自噬可加重或减轻脑缺血后神经细胞的损伤。脑缺血可导致细胞自噬的发生,细胞自噬适度激活,有利于脑缺血后神经细胞的修复,但是细胞自噬激活过度或不足,又可导致细胞凋亡,加重脑损伤。因此,细胞自噬激活的度需要一定的控制和把握,同时需要进一步的研究自噬对脑缺血作用的具体信号通路及干预信号通路具体手段等问题。本文探讨近年来国内外关于细胞自噬与脑缺血之间的关系进展,为其临床研究提供新思路。

糖尿病阳痿病机治则探讨

糖尿病阳痿涉及多个脏腑系统,其发病与脾肾亏损、血行瘀滞等密切相关。从脾肾论治为主,强调活血化瘀。