免疫活性地龙肽的制备及其对小鼠NK细胞活性的影响

目的:提取低分子量免疫活性地龙肽,并就其对自然杀伤(NK)细胞活性的影响进行体外研究。方法:采用粗分离、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等方法分离纯化地龙肽;采用乳酸脱氢酶法测定NK细胞活性。结果:用凝胶过滤层析分离得到地龙肽T(分子量8000～20000,含有7种蛋白)。用离子交换层析又将地龙肽T分为A、B两部分,地龙肽A由5种蛋白组成,其中有4种分子量在13000以下;地龙肽B仅由一种蛋白构成,分子量约11000;地龙肽A和T可明显提高NK细胞的活性;地龙肽A、B和T皆可减弱环磷酰胺和地塞米松的免疫抑制作用,提高NK细胞的杀伤率。结论:地龙肽T、A单独应用即可以增强NK细胞的活性,并与IL-2具有协同作用;地龙肽T、A和B还可以拮抗地塞米松、环磷酰胺等免疫抑制剂。

免疫活性地龙肽的制备及其对小鼠巨噬细胞活性的影响

分离纯化免疫活性地龙肽并研究其对小鼠巨噬细胞活性的影响。通过抽提、离心、超滤及色谱等步骤提取小分子量免疫活性地龙肽;通过体外实验测定其对巨噬细胞吞噬活性的影响。结果表明,一定浓度的3种免疫活性地龙肽在体外均可明显增强小鼠巨噬细胞的吞噬活性,提示其具有免疫调节功能。

槲寄生凝集素对肿瘤细胞细胞周期的影响

目的通过体外实验研究槲寄生凝集素对肿瘤细胞的细胞毒性作用。方法采用MTT比色分析法测定槲寄生凝集素注射液对肿瘤细胞生长曲线的影响 ;采用流式细胞仪技术检测槲寄生凝集素注射液对肿瘤细胞细胞周期的影响。

应激对鼠脾NK细胞穿孔素及颗粒酶的mRNA表达的影响

目的:阐明躯体性应激和心理性应激降低NK细胞杀伤活性的机制及异同。方法:应用Commun ication box系统分别使小鼠连续负荷躯体性应激和心理性应激后,以放免法检测鼠血浆类固醇激素水平;以51Cr释放法检测鼠脾NK细胞杀伤活性;以流式细胞术检测鼠脾NK细胞数量;以RT-PCR技术检测鼠脾细胞中杀伤效应介质———穿孔素、颗粒酶A及B的mRNA表达水平。结果:负荷躯体性应激和心理性应激后,小鼠血浆类固醇激素水平升高,分别于第3天和第5天达高峰后,逐渐下降;两者均可导致鼠脾NK细胞数量减少,杀伤活性降低(P<0.05,P<0.01);两者均可导致穿孔素的mRNA表达下降;但躯体性应激降低颗粒酶A的mRNA表达,而颗粒酶B的mRNA表达反而升高;心理性应激可降低颗粒酶B的mRNA表达,虽然也降低颗粒酶A的mRNA表达,但无显著性差异。结论:躯体性应激和心理性应激均可降低脾NK细胞数量及其杀伤活性,但对杀伤效应介质———穿孔素、颗粒酶A及B的mRNA表达的影响不同,提示躯体性应激和心理性应激对NK细胞功能影响的机制不同。

生物肽SP对NK细胞活化性受体NCRs表达的影响

研究SP对NK92-MI细胞杀伤活性以及活化性受体NCRs(NKp46、NKp44和NKp30分子)的表达的影响,揭示SP对NK细胞杀伤功能的调节作用及其内在作用机制。MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;Real-Time PCR检测NCRs的mRNA表达;流式细胞术检测NCRs的膜表达。在10-14～10-8mol/L浓度范围的SP作用24 h,对NK92-MI细胞的杀伤活性有明显增强作用;10-14～10-8mol/L的SP,均可增加NK92-MI细胞活化性受体NKp44、NKp46及NKp30的mRNA表达;该浓度范围的SP均可增加NKp46的膜表达水平,仅较低浓度(10-14mol/L)的SP对NKp44的膜表达水平有增加作用,各浓度的SP对NKp30的膜表达水平均无明显影响。SP可通过上调活化性受体NCRs的表达水平来调节NK细胞的活性。

铜绿假单胞菌血清学分型及耐药谱分析

铜绿假单胞菌由于分布广泛、生存能力强,对许多常用抗生素有天然耐药性,正日益成为医院感染的主要致病菌。为了更好地给临床提供有效治疗的依据,减少盲目用药,我们将临床标本中分离的铜绿假单胞菌进行血清学分型,并对临床常用的10种抗生素进行耐药性检测,现报告如下。1 材料1.1 菌株来源 208株铜绿假单胞菌来自我院1996年1月～1997年12月住院病人各类送检标本。1.2

细菌性阴道病与阴道感染的其它病原微生物关系的探讨

细菌性阴道病是常见的妇科疾病，可以通过性传播。以往认为其主要病原是阴道加德纳菌(CV)，该菌常与厌氧菌共生，故也有人称之为非特异性阴道炎或加德纳菌性阴道炎等，1984年正式命名为细菌性阴道病(bacterial vaginosis，简称BV)。BV感染可由CV单一引起，也可由CV与其它病原微生物混合感染。

沈阳地区嗜肺军团菌感染血清抗体水平的检测(摘要)

自1992年起对沈阳地区73例有呼吸系感染症状的病人检测了嗜肺军团菌血清抗体水平。临床诊断肺炎45例，呼吸道感染28例。结果表明，抗体阳性者32例，占43．8％；其中12型28例，占阳性例数的87．6%，2、6、10、13型各1例，说明沈阳地区以12型占优势，与国内其他地区报告的以1、6、8型为多见不同。

检测AmpC酶三维试验方法的改进

目的简便检测AmpC酶三维试验的方法。方法将提取AmpC酶冻溶的温度-70℃改为-20℃,将加酶的挖槽法改为打孔法。结果55株耐三代头孢菌素和头孢西丁的细菌,用两种冻溶方法均检出6株高产AmpC酶菌,其中用原提酶法,5株菌在挖槽和打孔中加入粗酶液10μl,另1株菌在挖槽和打孔中加入粗酶液30μl时出现阳性结果;用改进提酶法,5株菌在挖槽和打孔中加入粗酶液10μl,另1株菌在打孔中加入粗酶液30μl,而在挖槽中加入50μl时出现阳性结果。结论改进的提取AmpC酶的方法与原方法结果相同,改进的加酶打孔法比挖槽法优越,改进的三维试验方法简便、准确、不需要特殊设备,适合于各级实验室应用。

革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的 分析革兰阴性杆菌中超广谱 β-内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法 采用双纸片协同法筛选ES BLs菌 ,用纸片扩散法检测其药敏结果 ,分别用TEM、SHV和CTX -M通用引物进行PCR扩增并对PCR产物进行序列分析。结果 大部分产ESBLs菌对头孢噻肟耐药 ,而对头孢他啶敏感 ,少部分对两者都耐药 ,这些菌株前者以CTX-M引物的PCR扩增结果 ,主要为CTX -M - 3,还检出CTX -M - 12、CTX -M - 14 ;后者以SHV引物的PCR扩增结果 ,主要为SHV - 12 ,还检出SHV - 4 0、SHV - 33和SHV - 5型。TEM引物扩增结果全部为TEM - 1型广谱酶。结论 革兰阴性杆菌中ESBLs主要是CTX -M - 3型 ,6 2 9%的菌同时存在 2～ 3种酶。

随机扩增DNA多态性技术在粘质沙雷菌分型研究中的应用

目的 应用随机扩增DNA多态性 (RAPD)技术对医院感染的粘质沙雷菌进行基因分型。方法 对心外科ICU病房 5例术后发热患者血液中分离出的粘质沙雷菌 ,用VITEK细菌全自动分析仪进行系统生化鉴定 ,K B纸片扩散法进行药敏试验 ,用 2条不同的随机引物进行RAPD基因分型。结果 5株粘质沙雷菌药敏谱全部一致 ,2条随机引物中一条引物未能分型 ,另一条引物可分为 2个基因型。其中 ,4株菌扩增出相同带谱 ,为同基因型 ;1株菌有独特的带谱为另一种基因型。结论 本次调查的 5株粘质沙雷菌有 2种RAPD基因型 ,其中 4株为相同基因型 。

1998~2004年临床分离病原菌的耐药性变迁

目的监测临床病原菌的耐药性变迁。方法统计1998年1月-2004年12月临床送检标本中分离的病原菌及药敏结果，不计重复株。细菌分离鉴定按卫生部临检中心颁布的《全国临床检验操作规程》第二版进行。药敏采用纸片扩散法，结果判定根据NCCLS判断标准，耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）采用苯唑西林纸片扩散法，产超广谱肛内酰胺酶（ESBLs）检测采用双纸片协同试验和纸片确证试验。统计分析采用WHONET5软件。结果7年间共检出病原菌16782株，以革兰阴性菌为主，ESBLs和MRS呈逐年上升趋势。1998年产ESBLs大肠埃希菌和产ESBLs肺炎克雷伯菌分别为17．0％和16．0％；2004年上升到52．2％和44．4％。1998年，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRSCN）分别为63．4％和46．7％；2004年上升到76．9％和79．4％。各种菌株的检出比例和耐药性也在不断变化。总的趋势是非发酵菌和葡萄球菌的排序在上升，碳青酶烯类抗生素对肠杆菌科细菌包括ESBLs显示了很好的抗菌活性，耐药率在1％以下；对铜绿假单胞菌耐药率在上升，1998～2001年耐药率低于14％，2002—2004年耐药率已上升至30％～39％。万古霉索对葡萄球菌包括MRS没发现耐药菌。2002年以前，利福平对MRSA的耐药率较低，在9％～35％之间，2003年以后，耐药率迅速增至79％～83％，这种突然的变化可能与近年来结核病抬头，利福平用量增加有关。结论本院病原菌的耐药性变迁符合全球细菌耐药性总趋势，但也有其特殊性。掌握本地区本部门细菌耐药性，对指导临床合理使用抗生素具有实际意义。

P物质在应激活化小鼠皮肤肥大细胞中的作用

目的探讨P物质(substance P,SP)在应激活化小鼠皮肤肥大细胞中的作用。方法应用Communication box系统使小鼠分别负荷足电击和心理性应激,采用甲苯胺蓝(toluidine blue)染色法、免疫组化ABC技术分别检测皮肤肥大细胞数及SP阳性神经纤维数,以ELISA法检测皮肤中SP含量,以I125放免法测定血浆类固醇浓度。结果躯体性应激和心理性应激均可使血浆类固醇升高,躯体性应激负荷鼠的血浆类固醇激素在第3d达高峰,而后逐渐下降;而心理性应激负荷鼠的血浆类固醇激素在第5d达高峰后逐渐下降。腹腔注射WIN51078可明显降低两种应激负荷所致的血浆类固醇浓度,且对足电击的抑制效果优于心理性应激。足电击和心理性应激均可有意义增强皮肤肥大细胞的活化,增加SP阳性神经纤维数。足电击可使皮肤SP含量呈现有意义的减少,而心理性应激则皮肤SP含量增加,这些变化可因非肽性NK1速激肽受体拮抗剂WIN51078的腹腔注射而抑制。结论SP参与了应激导致的肥大细胞活化机制,同时显示了速激肽受体拮抗剂可能会抑制应激导致的皮肤症状的恶化。

双纸片协同试验检测产ESBLs方法的探讨

目的 选择检测产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)双纸片协同试验最佳条件。 方法 30株临床分离经基因法确定的产ESBLs菌 ,用CTX、CAZ、ATM、FEP药敏纸片与AMC药敏纸片做协同试验 ,纸片之间距离分别选择 10mm、15mm、2 0mm、2 5mm、30mm和 35mm。结果 FEP和ATM与AMC协同试验结果最佳 ,纸片之间距离在 10mm～ 2 5mm时阳性检出率是 10 0 % ;CTX与AMC协同试验结果次之 ,距离在 10mm～ 2 0mm之间时阳性检出率是 96 7% ;CAZ与AMC协同试验结果较差 ,距离在 10mm～ 15mm之间时阳性检出率是 86 7% ,距离在 2 0mm时检测率是 83 3%。结论 双纸片协同试验检测产ESBLs最佳底物是FEP和ATM ,最佳距离是 15mm。

超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性调查

目的 分析 134株超广谱 β -内酰胺酶菌株的耐药性 ,以利于药物治疗。 方法 应用双纸片协同试验鉴定超广谱 β-内酰胺酶菌株 ,琼脂稀释法检测超广谱 β-内酰胺酶细菌的最低抑菌浓度 (MIC)。 结果 亚胺培南敏感率 85 8% ,10 7株菌的MIC在 0 12 5～ 4 0 μg/ml之间 ,美洛培南敏感率 94 0 % ,12 6株菌的MIC在 0 12 5～ 4 0 μg/ml之间 ;头孢哌酮 /舒巴坦敏感率 4 0 3% ,4 4株菌的MIC在 0 12 5～ 16 0 μg/ml之间 ;哌拉西林 /他唑巴坦敏感率5 6 0 % ,5 9株菌的MIC在 0 12 5～ 16 0 μg/ml之间 ;头抱西丁敏感率 4 7 0 % ,6 3株菌的MIC在 0 12 5～ 8 0 μg/ml之间 ;左氧氟沙星敏感率 6 1 9% ,83株菌的MIC在 0 12 5～ 2 0 μg/ml之间 ;环丙沙星敏感率 5 3 7% ,72株菌的MIC在0 12 5～ 1 0 μg/ml之间 ;丁胺卡那霉素敏感率 6 4 2 % ,86株菌的MIC在 0 12 5～ 8 0 μg/ml之间 ;氯霉素、头孢噻肟、头孢吡肟、氨曲南敏感率均在 4 0 0 %以下。结论 抗菌活性最好的是碳青霉烯类药物 ,加酶抑制剂的头孢哌酮 /舒巴坦、哌拉西林 /他唑巴坦中介耐药增加 ,主要原因是临床过度使用所致 ,喹诺酮类抗生素对大肠埃希菌以外的细菌抗菌活性较好。

β-catenin的表达与早期胃癌多发性的关系

目的:探讨β-catenin在早期胃癌中的表达与早期胃癌的多发性和单发性的关系.方法:用免疫组织化学方法检测59例早期胃癌患者胃癌组织中β-catenin的表达情况.结果:早期胃癌中存在β-catenin的异常表达,多发组的阳性率为60.00%,单发组的阳性率为13.79%,均高于对照组.多发组的阳性细胞百分率为(58.25±10.54)%,单发组为(29.91±5.14)%,两组比较差异有显著性(P<0.05).结论:在早期胃癌中存在β-catenin的异常表达,与早期胃癌的多发性有关,β-catenin阳性的早期胃癌患者出现多发性胃癌的危险性高于β-catenin阴性者.

紫杉醇对NK-92MI细胞杀伤功能及凋亡的影响

探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明,紫杉醇可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK.92MI细胞的凋亡,而后者与Bcll2/Ba】【基因表达增高有关。

躯体性应激和心理性应激对鼠脾NK细胞受体表达的影响

阐明躯体性应激和心理性应激降低NK细胞杀伤活性的机制及异同。应用Communication box系统分别使小鼠连续负荷躯体性应激和心理性应激后,以^(51)Cr释放法检测鼠脾NK、LAK细胞的杀伤活性;以流式细胞术检测鼠脾细胞、LAK细胞中NK细胞受体的表达水平。结果表明,躯体性应激和心理性应激均可降低鼠脾NK、LAK细胞的杀伤活性,但对脾细胞、LAK细胞中NK细胞受体表达的影响却不同,提示躯体性应激和心理性应激影响NK细胞功能的机制不同。