以Candin为佐剂的人乳头瘤病毒多肽治疗疫苗刺激朗格汉斯细胞分泌IL-12的研究

目的探讨佐剂Candin及包含佐剂Candin和HPV多肽的疫苗对朗格汉斯细胞(langerhans cells,LCs)分泌IL-12的影响。方法采用淋巴细胞分离液分离人外周血PBMCs,采用磁珠分选系统分选CD14+细胞,经细胞因子rhGM-CSF(1 000IU/ml)、rhIL-4(1 000IUs)、TGF-β1(10ng/ml)诱导后获得LCs,采用流式细胞术鉴定。用佐剂Candin(50、100、150μl/ml)、包含佐剂Candin(50、100、150μl/ml)和HPV16E6多肽(10μmol/ml)疫苗刺激LCs 24h,ELISA法检测IL-12p70水平。结果诱导培养7d的细胞高表达LCs特征性的表面分子Langerin。佐剂Candin及HPV多肽疫苗均能不同程度刺激LCs分泌IL-12p70。佐剂Candin刺激LCs分泌IL-12p70最高达175ng/ml,HPV多肽疫苗刺激组最高达298ng/ml。含有Candin 100μl/ml的HPV多肽疫苗刺激LCs分泌IL-12p70水平较相应剂量的单独佐剂Candin组高。结论佐剂Candin及HPV多肽疫苗均能刺激LCs分泌IL-12。HPV多肽疫苗刺激LCs分泌IL-12的能力较单独佐剂Candin更强。

自体EBV-LCL及同种异体单核细胞在ELISPOT试验中的抗原递呈作用研究

目的探索自体EB病毒(EBV)转化的B淋巴母细胞系(EBV-LCL)细胞及同种异体单核细胞在ELISPOT试验中的抗原递呈功能。方法采用Ficoll分离PBMC,采用CD14磁珠分选CD14单核细胞;采用序列特异性引物PCR扩增HLA等位基因特异性片段,进行HLA分型;复苏冻存的表位特异性的T细胞克隆细胞及相应的自体EBVLCL细胞,采用酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测自体EBV-LCL细胞及具有表位相关HLA分子的同种异体单核细胞的抗原递呈功能。结果表位特异性的T细胞克隆细胞能够识别由自体EBV-LCL细胞及具有表位相关HLA分子的同种异体单核细胞递呈的抗原肽并分泌IFN-γ。EBV-LCL细胞与单核细胞的抗原递呈能力无明显区别。表位特异性T细胞克隆细胞冻存复苏后其IFN-γ产生细胞的比率小于10%。结论自体EBVLCL细胞及具有表位相关HLA分子的同种异体单核细胞在ELISPOT试验中能发挥抗原递呈功能。