miR-276-3p在白纹伊蚊幼虫几丁质代谢调控中的作用研究

目的探讨miR-276-3p在白纹伊蚊幼虫几丁质代谢中的作用,为实现利用几丁质代谢相关miRNA防控白纹伊蚊提供新的靶标。方法合成miR-276-3p特异性模拟物agomir和抑制剂antagomir的壳聚糖纳米颗粒,通过饲喂法过表达或抑制白纹伊蚊幼虫体内miR-276-3p的表达。利用反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测幼蚊体内miR-276-3p的相对表达量,利用生化分析法测定幼蚊及蛹的几丁质含量变化,并统计幼蚊存活率、化蛹率及蛹的羽化率。表达量差异比较使用two-way方差分析,几丁质含量两组间比较使用t检验,存活率差异分析采用乘积极限法的log-rank检验和Mantel-Cox检验。结果miR-276-3p agomir壳聚糖纳米颗粒可有效过表达白纹伊蚊幼虫体内miR-276-3p的表达量,第1和第3天后表达量较对照分别上调73.96%(F=932.401,P<0.001)、16.95%(F=114.551,P=0.047);miR-276-3p antagomir壳聚糖纳米颗粒可有效抑制miR-276-3p的表达,第1和第5天后表达量较对照分别下调13.42%(F=293.632,P<0.001)和1.49%(F=69.542,P=0.014);过表达miR-276-3p导致幼虫几丁质含量上升了25.34%(t=85.838,P=0.019),幼虫存活率下降,第8天较对照组差异有统计学意义(χ^(2)=77.490,P=0.020),化蛹率为70.00%,低于对照组的90.00%;抑制miR-276-3p表达导致白纹伊蚊幼虫与蛹的几丁质含量分别下降了40.06%(t=71.811,P=0.028)和46.82%(t=92.147,P=0.011)。结论miR-276-3p对于白纹伊蚊幼虫的几丁质含量、存活率及化蛹率存在显著影响,相关研究结果为利用miRNAs调控白纹伊蚊幼虫的几丁质代谢,进而实现蚊虫防控提供了基础资料。