提高医学实习生同理能力是建立未来和谐医患关系的基础

文章从同理心的概念及其在医学领域中的作用入手,阐述了同理心教育的现状和影响因素,并重点探讨了临床实习阶段,如何在教师—学生—患者之间开展同理心互动训练课程,培养医学生的同理能力,切实提高医学生人文素质,为将来提高临床能力,构建和谐医患关系作好准备。

血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化的动态观察

目的:从形态学和血清学角度探讨血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化之间的关系。方法:用血吸虫尾蚴感染新西兰家兔,建立血吸虫病动物模型。采用石蜡切片、HE染色动态观察日本血吸虫病急性期、慢性期、晚期肝脏虫卵肉芽肿大小,放射免疫检测仪测定不同时期的血清中透明质酸(hyaluron ic ac id,HA)含量的变化。结果:感染第6周家兔肝脏出现虫卵肉芽肿,第12周肉芽肿缩小,周围发现成纤维细胞,至第21周时虫卵肉芽肿明显缩小,肝脏纤维化程度增高,并有纤维组织增生。同时,血清HA含量检测显示随感染时间延长,体内HA水平逐渐升高。结论:血吸虫病是一个持续进展的过程,包含虫卵肉芽肿与肝脏纤维化两大病理变化,两者间发病机制不同,肝纤维化是虫卵肉芽肿的间接延伸。

加强驻点教学医院临床师资队伍建设的实践与思考

临床教师素质的高低是保证驻点教学医院临床教学质量的关键因素。近年来，江苏大学在驻点教学医院通过严把师资队伍质量关，制订并完善各项教学规章制度和奖惩措施，开展多种形式的师资培训和教学活动，建立了一支素质优良的临床师资队伍，有效地提高了临床教学意识和教学水平。

日本血吸虫6种粗抗原和组分抗原的比较

目的比较日本血吸虫6种抗原(粗抗原及其组分抗原各3种)的敏感性和特异性。方法①用阳性钉螺逸出的尾蚴感染新西兰家兔,制作日本血吸虫病动物模型。②于感染后42天分别收集雌、雄成虫和虫卵,制作粗抗原及其组分抗原。③采用ELISA法检测抗原的敏感性和特异性,并以X2检验作统计学处理和分析。结果除雌虫组分抗原的敏感性(51%)较差外,都显示出日本血吸虫成虫及其虫卵组分抗原的较好敏感性和特异性。结论日本血吸虫组分抗原用于免疫诊断,具有较好的敏感性和特异性,但抗原分离、纯化方法有待进一步探讨。

加强实习生医德教育 培养合格医学人才

从目前实习生医德教育面临的问题着手，在分析医德教育紧迫性的基础上，提出完善医德教育的分阶段教育模式，突出，临床带教教师的医德示范效应，建立医德考核机制以及加强优秀学生榜样作用的若干建议，以期为促进现阶段我国临床实习生医德教育改革提供参考。

重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12-Fc融合蛋白载体的构建和表达

目的用p IRES2-EGFP-Fc载体构建重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12(MED12)-Fc真核表达质粒,转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达MED12-Fc融合蛋白,纯化和鉴定MED12-Fc。方法根据Gen Bank中的序列信息,从基因组上扩增出人MED12基因第2、3和4外显子,并通过Overlap聚合酶链反应(PCR)拼接获得目的基因片段,以p IRES2-EGFP-Fc真核表达质粒为载体,构建重组人MED12-Fc真核表达质粒。使用脂质体瞬时转染293T细胞,48 h收集上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定质粒的表达能力。表达质粒电转CHO细胞,通过G418抗性筛选及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达的稳定细胞株。使用稳定细胞株培养表达人MED12-Fc融合蛋白,收集上清液,用Proein A亲和纯化柱纯化蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)检测蛋白质分子量。结果通过DNA测序和瞬时转染表达鉴定,证实MED12第2、3和4外显子基因序列正确,成功获得重组人MED12-Fc真核表达质粒。通过电转化、G418及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达重组人MED12-Fc的稳定表达细胞株。通过细胞培养,亲和层析纯化,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白。结论成功构建MED12-Fc融合蛋白的表达载体,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白,为进一步研究MED12蛋白功能奠定基础。

银杏酸、阿奇霉素和大蒜素抗弓形虫增殖效果研究

目的评价银杏酸、阿奇霉素和大蒜素体外和体内抗弓形虫增殖的效果。方法体外试验,培养HFF细胞做为弓形虫宿主细胞,采用MTT法检测3种药物的安全浓度和体外抗弓形虫增殖的效果。体内试验,以腹腔注射的方式给药,观察感染弓形虫小鼠的存活时间,比较3种药物的体内抗弓形虫增殖效果。结果银杏酸和阿奇霉素可显著抑制细胞内弓形虫的增殖,两者效果相近。银杏酸和阿奇霉素均可延长小鼠存活时间。大蒜素抗弓形虫效果微弱。结论银杏酸具有抗弓形虫作用。

5种结核杆菌检测方法的临床应用价值

目的比较和分析免疫磁珠捕获联合双内标聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验定量检测结核杆菌技术(IMC-PCR-ELISA)与其他几种结核杆菌检测法在结核病诊断中的临床应用价值。方法以102例结核分枝杆菌痰培养阳性的患者作为阳性对照,以48例结核分枝杆菌培养阴性的非结核普通住院患者作为阴性对照。比较抗酸染色涂片法(AFS)、免疫磁珠-抗酸染色涂片法(IMC-AFS)、金标抗结核抗体检测法(DICA)、普通PCR及IMCPCR-ELISA的敏感性及特异性。结果 IMC-PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌全过程约4.5h,最低检测限为5copy/μL,本法的特异性和敏感性均为100.00%,其他4种(AFS、IMC-AFS、DICA、普通PCR)检测方法的敏感性分别为35.29%、43.14%、60.78%、93.14%,特异性分别为95.83%、95.83%、75.00%、91.67%。结论 IMC-PCRELISA与AFS、IMC-AFS、DICA及普通PCR相比,具有快速、灵敏、特异、可定量的特点,是临床快速诊断结核病的有效检测方法。

绦虫永久染色标本的制作技术

目的制作绦虫玻片染色标本用于教学和科研。方法用墨汁染色法制作绦虫妊娠节片玻片标本,卡红染色法制作绦虫成熟节片、头节和囊尾蚴玻片标本。结果妊娠节片、成熟节片、头节和囊尾蚴经染色制片后特征结构明显可见。如妊娠节片染色标本清晰可见染成墨汁颜色的子宫主干和分支状的子宫侧支,节片一侧边缘中部可见突出的生殖腔;成熟节片染色标本均染成红色,内有着色更深的雌雄生殖系统各一套。结论墨汁染色和卡红染色制作带绦虫染色标本效果好,可永久保存。

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性。方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原。分别以SDS-PAGE和W estern b lot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较。结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原。SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带。AWA-f见15条蛋白带,其中Mr26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带。AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带。SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带。结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠。该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白。

免疫磁珠捕获联合PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法学研究

目的采用免疫磁珠捕获（IMC）联合双内标PCR-ELISA（IMC-PCR-ELISA）技术,建立定量检测结核分枝杆菌的方法。方法制备能够特异性捕获结核分枝杆菌的免疫磁珠（Dynabeads）。并根据结核分枝杆菌Mtp40基因序列以及结核分枝杆菌复合体群IS6110序列,设计2对特异性引物（上游引物的5′端用生物素修饰）,以及2条与PCR扩增片段等长的内参照片段（其与扩增模板在引物区的序列相同）和3套捕获探针（3′端用地高辛标记）。先通过免疫磁珠特异性捕获结核分枝杆菌,再联合双内标PCR-ELISA技术检测结核杆菌。结果采用IMC-PCR-ELISA技术定量检测结核分枝杆菌,全过程约4h,检测限为5×10^3 copies/mL,当低内标模板浓度在30-70copies/mL,高内标模板浓度在8 000-12 000copies/mL时,计算出的浓度与实际加入的目的模板浓度之间有良好的线性关系（r^2=0.998）,未发现非特异性反应。结论成功建立了IMC-PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法,此方法具有快速、灵敏、特异、可定量的特点。

刚地弓形虫绿色荧光蛋白突变株的构建

目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的弓形虫突变株,探讨以其检测宿主细胞感染率的效果。方法在人子宫颈癌(HeLa)细胞中培养弓形虫RH株速殖子,电穿孔法向虫体导入质粒ptubP30-GFP/sag-CAT,氯霉素和极限稀释法筛选稳定表达P30-GFP融合蛋白的突变株,RT-PCR法和荧光显微镜检测GFP蛋白在虫体内的表达。HeLa细胞分别感染1×104～1×107个突变株虫体,24 h后,显微镜计数各孔10个高倍镜视野下具有GFP荧光的HeLa细胞数。流式细胞仪检测"纳虫泡",评估HeLa细胞感染率。结果导入ptubP30-GFP/sag-CAT质粒后,经氯霉素筛选获得阳性克隆。RT-PCR检出虫体GFP基因表达,镜下可见GFP荧光聚集于虫体外膜。HeLa细胞感染率随虫体接种量的增多而增加,接种1×104～1×107个虫体24 h后,具有GFP荧光的HeLa细胞数分别为(14±6)、(133±45)、(332±93)和(443±90)个;流式细胞仪检测HeLa细胞感染率分别为(0.49±0.09)%、(8.76±0.50)%、(21.02±1.49)%和(39.00±3.47)%。结论构建了刚地弓形虫GFP荧光蛋白突变株,为检测虫体在宿主细胞内的增殖提供了新途径。

日本血吸虫不同方式感染宿主的免疫病理研究

目的建立等量血吸虫尾蚴单次感染和多次感染的动物模型,比较这两种不同感染方式对家兔肝脏的损害程度。方法制作肝脏病理切片,测量单个虫卵肉芽肿的体积;放免法检测家兔血清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN);RT-PCR-ELISA半定量测定肝组织中的TGF-β1mRNA。结果单次感染组家兔急性期肉芽肿反应最明显,慢性期和晚期肉芽肿体积逐渐缩小,而多次感染组肉芽肿缩小不明显;血清中HA和LN、肝组织中的TGF-β1mRNA量,在感染各组均高于正常对照,但多次感染组升高更明显。结论等量的尾蚴,多次感染比单次感染的危害引起的肝纤维化更为严重。

安氏隐孢子虫在HCT-8和AGS细胞中增殖效果的研究

目的比较安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)在人结肠腺癌(human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8)细胞和人胃腺癌(human stomach adenocarcinoma,AGS)细胞中的增殖。方法取培养至对数生长期的HCT-8细胞和AGS细胞,接种于6孔培养板中,待细胞生长融合至60%～70%时,加入2.5×105个安氏隐孢子虫卵囊,培养至24 h和48 h,以Giemsa染色法和Real-time PCR技术检测虫体在细胞中的增殖。结果 Giemsa染色法观察24 h和48 h HCT-8细胞中虫体数量均高于AGS细胞(P<0.05)。Real-time PCR技术测得24 h和48 h HCT-8细胞中安氏隐孢子虫卵囊COWP基因拷贝数均高于AGS细胞(P<0.05)。结论与AGS细胞相比,以HCT-8细胞作为体外感染模型更利于安氏隐孢子虫的增殖。

腹水CA125异常患者临床诊断分析

目的分析60例腹水CA125异常患者的临床特点。方法对采用化学发光方法和放射免疫方法测出的某三甲医院近5年来腹水CA125、CA199、CA242、CA153、CA50异常的60例该院住院患者的确诊疾病进行分析。结果 60例CA125异常的患者中非肿瘤疾病检出率为43.33%;恶性肿瘤检出率为23.33%;其他为原因不明者。CA125阳性非肿瘤疾病检出率较高的从高到低依次为甲状腺肿(26.92%)、上消化道出血(23.07%)、肝硬化(23.07%);CA125阳性恶性肿瘤检出率较高依次为胃癌28.57%、肝癌14.28%、肺癌14.28%、卵巢癌14.28%。结论引起腹水CA125超过参考值的临床疾病种类很多,其特异度低,疾病的确诊需结合其他检查方法。

基于hxgprt^-缺陷的弓形虫顶质体荧光突变株的构建

目的:构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记顶质体的弓形虫突变株,建立检测顶质体的简便方法。方法:扩增顶质体酰基载体蛋白(acyl carrier protein,ACP)基因并构建转染载体pHX-ACP-GFP,转入弓形虫hxgprt-株速殖子,经霉酚酸和黄嘌呤筛选荧光突变株。激光共聚焦显微镜和蛋白质印迹技术检测突变株ACP-GFP融合蛋白的表达。结果:通过霉酚酸和黄嘌呤筛选,可以在1周内获得突变株。激光共聚焦显微镜下观察到ACP-GFP融合蛋白聚集于顶质体,用抗GFP抗体能检测出ACP的转运肽型和成熟型蛋白。结论:顶质体荧光突变株可清晰标记出顶质体的位置,借助GFP标签即可检测融合蛋白的表达。

镇江地区结核分枝杆菌DNA指纹图谱分型及耐药性分析

目的：分析镇江地区结核分枝杆菌的DNA指纹图谱分型及耐药情况。方法收集174例疑似结核病患者痰液标本，通过鉴别培养基对硝基苯甲酸（ PNB）和噻吩－2－羟酸肼（ TCH）进行分枝杆菌菌型初筛，再通过本室建立的PCR－ELISA法明确鉴定结核杆菌菌种，用比例法进行药敏实验，用DNA随机扩增多态性（ RAPD）指纹分型法，对其中44株耐药人型结核分枝杆菌进行DNA指纹图谱分型。结果从174份标本中分离出人型结核分枝杆菌141株（81．03％），牛型结核分枝杆菌20株（11．49％），非结核分枝杆菌13株（7．47％），总耐药率42．53％；耐药率由高到低依次为异烟肼（INH）＞氧氟沙星（OFX）＞利福平（RFP）＞链霉素（SM）＞乙胺丁醇（EMB）＞卡那霉素（KM）＞卷曲霉素（ CPM）＞阿米卡星（ AKM）；非结核分枝杆菌对EMB、RFP、SM、INH的耐药率显著高于结核分枝杆菌（ P＜0．01）。复治组对EMB、RFP、SM、INH的耐药率显著高于初治组的耐药率（P＜0．01）。中、老年患者耐药率明显高于青年患者（P＜0．05或P＜0．01）。将44株耐药人型结核杆菌，用RAPD－PCR分型，并用NTsys 2．10e软件作聚类分析，共分为5型（Ⅰ型-Ⅴ型），其中以Ⅰ-Ⅲ型为主，占84．09％。各型的耐药率差异无统计学意义（P＞0．05）。结论本地区肺结核以人型结核分枝杆菌为主，结核杆菌总体耐药率和耐多药率相对较高。 RAPD指纹分型结果显示，该地区结核分枝杆菌具有明显的基因多态性，成簇类型是主要流行菌株。各型与耐药性无明显相关性。

免疫诊断技术用于姜片虫病流行病学调查的研究 Ⅲ.间接血凝试验检测姜片虫感染的初步研究

本研究以姜片虫成虫纯化抗原（ＰＡＡ）（蛋白含量为１０μｇ／ｍｌ）致敏经醛化和鞣化的人“Ｏ”型血红细胞，采用间接血凝试验（ＩＨＡ）检测了６９份姜片虫感染者血清和６０份正常人血清，若以抗体滴度≥１：１０者为阳性，则两者的阳性率分别为８１．２％和６．７％（Ｐ＜０．００５）；此外，还检测了日本血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫和长膜壳综虫感染者血清，其交叉反应率分别为１０．０％（４／４０）、１２．５％（１／８）、０（０／８）和０（０／４）。结果表明，该法具有较好的敏感性和特异性。

Dot—ELISA检测姜片虫病人血清抗体的研究

斑点ELISA(Dot—ELISA)已用于黑热 病、疟疾、包虫病、肝吸虫病、肺吸虫病及血吸虫 病等多种寄生虫病的实验诊断,但尚未有用 于诊断姜片虫病的报道。为此,我们在对该法的 操作进一步加以改进的预实验基础上,对75例 姜片虫病人的血清抗体进行检测,取得了较好 效果,现报道如下。 1 材料和方法 1.1 抗原制备 姜片虫成虫纯化抗原 (Pure Adult Antigen,PAA)按文献报道的方 法制备。用于致敏载体的抗原蛋白质含量分 别为10μg/ml、5μg/ml及1μg/ml。