浅谈高校科研实验室危险化学品安全管理

规范危险化学品的安全管理是高校实验室安全的基础,对高校教学、科研与生产活动的顺利开展有着重要的意义。本文阐述了当前高校实验室在危险化学品安全管理方面存在的漏洞,并针对其中存在的主要问题,提出了相应的管理措施,为消除实验室安全隐患以及加强实验室安全管理提供帮助。

高校实验室管理研究

随着近年来我国高等教育的飞速发展,高校实验室的管理也需不断改革创新,与时俱进。本文探讨了实验室管理体制和机构改革、仪器设备管理、实验技术人员队伍建设、信息化管理平台建设等内容,以期建立更加科学、有效的实验室管理运行机制。

从单个兔B细胞获得抗人cGAS蛋白单克隆抗体

为研究环鸟苷酸-腺苷酸合成酶入核的机制,利用兔外周血B细胞筛选抗人cGAS蛋白单克隆抗体.针对已三次免疫人cGAS(161-522)蛋白的新西兰兔,运用流式细胞术得到阳性效应B细胞,在单管里对单细胞裂解,得到总RNA,逆转录生成cDNA,两步巢式PCR扩增同一个B细胞来源的抗体重链和轻链可变区序列,抗体基因扩增成功率高达80%以上.293T重组表达兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体并鉴定,获得1个具有较好结合特异性的兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体,ELISA检测结果显示抗体的效价达1∶10 000.

论利用新媒体开展研究生思想政治教育的新思路

随着我国经济进入新常态,信息化进程不断加快,近年来兴起的互联网、微博、微信等新媒体更是得到了前所未有的发展。研究生学历层次较高、思维活跃,是新媒体的主要使用群体。新媒体的发展对高校研究生的人生观、价值观、世界观以及道德观念、心理成长等也产生了越来越大的影响。如何有效利用新媒体开展研究生思想政治教育已成为高校思想政治教育工作者需要深入研究的重要课题之一。本文通过分析研究生群体的特征及利用新媒体开展思想教育的必要性,提出利用新媒体开展研究生思想政治教育的新思路,以期为研究生思想政治教育工作的发展提供基础资料。

生物学一级学科硕士课程体系优化

课程学习是我国研究生教育制度的重要特征,是培养具有创新能力、适应社会需求的生物学人才的重要保障。该文就目前生物学一级学科硕士课程体系存在的具体问题进行分析,结合福建师范大学生命科学学院生物学一级学科硕士授权点的实际情况,对生物学一级学科硕士课程体系的优化路径进行了探讨,以期为生物学一级学科硕士课程体系的优化提供基础资料。

IFIT1负反馈上调干扰素β表达促进抗HSV-1病毒保护

Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)是危害人类健康的常见病原体之一,能够通过受损皮肤或黏膜感染宿主细胞并引起多种疾病。HSV-1的侵入激活先天免疫模式识别受体,诱导干扰素β(IFN-β)的产生,通过表达干扰素刺激基因(ISG)发挥抗病毒功能。近年来,干扰素诱导的四肽重复蛋白1(IFIT1)在病毒感染过程中的作用引起了广大研究者的关注。然而,其具体机制尚未完全清楚。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了小鼠成纤维细胞(L929)IFIT1敲除细胞株,免疫印迹方法检测敲除细胞株IFIT1在蛋白质水平的表达。转染HT-DNA和Poly[I:C]刺激L929 WT和IFIT1敲除细胞株,实时定量PCR技术检测发现,HT-DNA刺激敲除细胞时,IFN-β及下游ISGs的表达量显著升高。IFN-β的表达量比L929-WT组平均高出13.4倍,IFIT1和趋化因子10(CXC chemokine ligand-10,CXCL10)的表达量比L929 WT组分别平均高出6.7倍和21倍(P<0.001),而Poly[I:C]刺激无明显变化(P>0.05),表明IFIT1是通过DNA信号通路来行使其负反馈调节作用。为研究IFIT1基因的抗病毒作用,利用CRISPR/Cas9技术改造的HSV-1-VP26-mCherry病毒感染该敲除细胞株,通过测定病毒荧光数及病毒拷贝数,发现IFIT1敲除细胞株与L929 WT细胞相比,存活率提高了60%(P<0.001),病毒增殖能力在48 h后降低28.6倍(P<0.001)。该结果表明,IFIT1基因的缺失有利于抵抗HSV-1的感染。综上所述,IFIT1通过DNA信号通路负反馈上调IFN-β及ISG的表达,IFIT1的缺失对病毒入侵发挥了保护作用。该结果为后续研究开发治疗HSV-1感染相关的治疗药物提供了一个新思路。

利用电转的方法对T细胞TET2基因敲除并探讨TET2对T细胞增殖的影响

近年来,利用重组病毒对T细胞进行基因编辑用于免疫治疗,受到了广泛重视。然而,重组病毒因存在随机整合,制备耗时长且昂贵的缺点制约了其应用。与此同时,电转染技术的应用能够快速将外源DNA带入细胞内,有助于提高T细胞基因编辑效率。TET(Ten-eleven translocation)家族蛋白可以催化5-甲基胞嘧啶(5mC)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5hmC),5hmC作为细胞中的DNA去甲基化酶,在细胞基因组表观遗传学中起着重要调控作用。研究表明TET2基因的缺失能够促进CAR-T细胞的快速繁殖,产生强力的CAR-T细胞。该研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对TET2基因进行敲除。首先对sgRNA进行体外转录,与大肠杆菌诱导表达的Cas9蛋白孵育形成Cas9:gRNA核糖核蛋白复合物(RNP),并在体外酶切验证sgRNA的活性。接着利用电转染技术将Cas9:gRNA核糖核蛋白复合物(RNP)带入细胞内,并检测T细胞基因编辑效率。最后利用流式细胞分析技术检测T细胞的增殖情况。基因测序与T7EⅠ酶切结果表明,T细胞中的TET2基因被成功敲除,T细胞活力和功能并未受到影响。流式细胞技术,CCK-8以及台盼蓝细胞活率检测结果显示缺失Tet2蛋白后,T细胞的增殖速率明显快于野生型T细胞。该研究为非病毒载体替代传统的慢病毒载体构建携带嵌合抗原T细胞奠定了基础,具有制备周期短,安全性高的特点。同时TET2缺失促进了CAR-T细胞的增殖,使其能够引发有效的抗肿瘤反应,为CAR-T细胞免疫治疗提供了新的思路。

高致病性禽流感病毒广谱嵌合抗体的构建表达及活性研究

高致病性禽流感病毒高度变异且缺乏有效的治疗药物.在前期研究工作中,本课题组发现一株鼠源广谱中和单抗13D4,在动物实验中显示出对H5N1禽流感病毒具有广谱治疗效果.在本研究中,从分泌13D4单克隆抗体的杂交瘤细胞株中抽提总RNA,经RT-PCR扩增出轻重链可变区DNA序列,并分别与人IgG1的轻重链恒定区基因序列拼接,构建人-鼠嵌合抗体.筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO细胞株,从培养上清中纯化出嵌合抗体.竞争Elisa结果表明,嵌合抗体与鼠源单抗能够识别同一个抗原表位并具有相似的亲和力.血凝抑制反应和中和活性测定结果证明,13D4嵌合抗体保留了对不同亚型H5N1病毒的广谱反应性,并且对两株H5N1病毒具有中和活性.本研究获得的13D4嵌合抗体将具有潜在的治疗价值.

叠氮化钠诱导细胞线粒体损伤及mtDNA的释放

线粒体是真核细胞中具有重大作用的细胞器,在调控细胞凋亡等方面也发挥着重要作用。一旦线粒体受到损伤且无法发挥其正常功能,将会导致细胞内环境变化,最终导致组织、器官损伤病变,尤其对能量要求较高的一些组织或者器官影响很大。希望探索线粒体损伤机制,减少线粒体损伤及其影响。通过叠氮化钠建立线粒体损伤模型,并通过检测叠氮化钠刺激后细胞中腺嘌呤核苷三磷酸水平以及线粒体膜电位变化情况等方法证实建立的线粒体损伤模型是有效的,可用于线粒体损伤机制的研究。成功使用叠氮化钠刺激L929细胞系建立线粒体损伤模型,并在离体线粒体损伤中检测到mtDNA的释放。叠氮化钠使用的最佳质量浓度会对线粒体产生损伤,并影响其正常功能,且对细胞活率影响不大。

低温电转联合Sleeping beauty转座子系统增强CAR-T修饰效率

嵌合抗原受体T淋巴细胞(chimeric antigen receptor T cells,CAR-T cells)在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效。CAR-T治疗通过分离病人外周血单个核细胞PBMC,经适当的基因编辑手段表达CAR结构,令T细胞获得靶向肿瘤细胞的能力,扩增后过继到体内完成对肿瘤的杀伤。该文主要探索在低温状态将含有睡美人(Sleeping beauty)转座子/转座酶系统的质粒电转进PBMC内表达CD19-CAR制备CAR-T细胞,并添加特定细胞因子进行增殖,并验证CAR表达、细胞活性与杀伤能力。结果表明,转染效率高达58.8%±4.1%,增殖后的CAR-T细胞能够整合并表达CAR基因,在与靶细胞共培养后,表现出与慢病毒制备的CD19-CAR相似的细胞活性和毒性。该文确定了一种基于Sleeping beauty转座子/转座酶和电转制备CAR-T细胞的方法,为临床CAR-T治疗提供了新的思路。