牛初乳免疫球蛋白 A的纯化与原子力显微镜观测

目的 :纯化牛初乳免疫球蛋白 A(Ig A)并在原子力显微镜 (AFM)下进行观测。 方法 :应用逐级盐析、透析和离子交换层析等生化手段 ,从牛初乳中提取 Ig A,SDS- PAGE鉴定纯化结果。应用 AFM对吸附在新剥离云母或多聚赖氨酸 (PL L)处理云母片基上的 Ig A进行空气相的结构观测。 结果 :考马斯亮蓝染色鉴定纯化的蛋白含有重链、轻链和分泌片 ;正常生理条件下的 Ig A以寡聚体结构为主 ,单体大约 2 .6 nm× 1 8.0 nm× 2 0 .2 nm,与电镜结果基本吻合 ;Ig A在 PL L 处理云母片基上的吸附呈现树枝状聚集 ,随孵育时间的延长 ,聚集现象更趋明显。 结论 :结合生化方法和 AFM观测 ,可对 Ig A等免疫球蛋白分子进行天然结构状态的微观探测 。

人类新的肝癌高表达基因HCCA3的克隆、鉴定及其临床病理学意义

目的 克隆新的肝癌相关基因并探索其在肝癌发生发展中的作用机制。方法 采用mRNA差异显示技术 ,分析肝癌和癌旁组织差异表达基因谱 ,获得的差异表达基因片断作为探针 ,筛选胎盘cDNA文库 ,以获得全长cDNA序列。通过Northern印迹杂交的方法 ,分析所获得的新基因在 42例肝癌组织中的表达情况 ,并分析其临床和病理学意义。结果 克隆了一个新的肝癌相关基因 ,命名为HCCA3 ,该基因的全长cDNA 170 6bp ,编码一个 2 6 4个氨基酸的蛋白质 ,在人类肝癌中广泛表达 ( 78.6 % ,33/42 ) ,并与肝癌的浸润转移密切相关。结论 HCCA3是一个新的人类基因 ,在肝癌中的异常高表达可能对肝癌的发生发展具有重要的促进作用。

急性或慢性吗啡依赖和戒断对大鼠脑组织CREB-1表达的影响

目的研究急性或慢性吗啡依赖和戒断大鼠脑组织环腺苷酸反应元件结合蛋白-1 (CREB-1)表达的变化。方法雄性SD大鼠30只,随机分为5组(n=6):空白对照组、急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组。急性吗啡依赖组每次背部皮下注射吗啡5 mg/kg,间隔2 h,连续8次;急性吗啡戒断组在急性吗啡依赖后3 h腹腔注射纳洛酮5 mg／kg,催促戒断30 min后处死大鼠。慢性吗啡依赖组每日吗啡用量分3次腹腔注射,从第一天用量5 mg/kg起,直到第12天递增至260 mg／kg,慢性吗啡戒断组在慢性吗啡依赖后的次日腹腔注射纳洛酮5 mg/kg,催促戒断24h后处死大鼠。用Western-blot法测定大脑皮层、伏隔核及海马CREB-1表达。结果与空白对照组比较,急性吗啡依赖、戒断组皮层、伏隔核和海马CREB-1表达差异无统计学意义(P>0．05),慢性吗啡依赖、戒断组皮层、海马CREB-1表达上调,伏隔核CREB-1表达下调(P<0．05);与慢性吗啡依赖组比较,慢性吗啡戒断组伏隔核CREB-1表达下调(P<0．05)。结论急性吗啡依赖、戒断对脑组织CREB-1表达无影响;而慢性吗啡依赖、戒断后不同脑区CREB-1表达不同。