贵州黑山羊GFI1B基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备

独立生长因子1(GFI1)及其同源物GFI1B是造血所需的谱系特异性转录因子,定位到人类基因组的9号染色体(9q34.13),编码一种331个氨基酸的多肽,GFI1和GFI1B均有6个C末端C2H2锌指和1个N末端SNAG(SNAIL/GFI1)转录抑制结构域。为进一步探索GFI1B的基因功能,公开一种贵州黑山羊新基因GFI1B多克隆抗体的制备方法,将在实验室中克隆的山羊GFI1B基因序列首先用于在原核载体中表达,并进行原核表达载体pET32a-GFI1B的构建,再进行GFI1B蛋白的原核表达,最后进行GFI1B蛋白的纯化和大白兔GFI1B多克隆抗体的制备与纯化。结果表明:高效表达了原核表达载体pET32a-GFI1B,纯化的His-GFI1B融合蛋白可满足制备多克隆抗体的要求;ELISA检测结果显示,GFI1B多克隆抗体可与His-GFI1B融合蛋白进行特异性结合,制备出高度特异的山羊GFI1B多克隆抗体。该方法获得的多克隆抗体效价高、特异性好,弥补了GFI1B羊上的多克隆抗体的研究空白。

中国南方荷斯坦奶牛不同生理状态下热应激对维持行为的影响

【目的】为了分析不同泌乳阶段(盛期、中期、末期)、胎次(1胎、2胎、3胎)和日产奶量水平(<20,20~30,>30 kg)等因素对热应激奶牛维持行为的影响,从而为改进奶牛饲养环境、制定科学的管理制度提供可靠的依据.【方法】研究从2018年5月至10月持续6个月对南方某中型牧场中拴系饲养的40头中国南方荷斯坦奶牛的维持行为逐头进行24小时观察,记录奶牛进入热应激状态前后的行为变化.【结果】长江下游牧场大约于5月中旬开始进入热应激状态,10月中旬出热应激状态,热应激条件下,奶牛的胎次、泌乳阶段和产奶量水平不同均会影响其主要行为特征(饮水、采食、排泄和反刍等)的变化,进而影响到奶牛的生产性能和牧场的经济效益.【结论】饲养人员应根据牛舍内温湿指数、奶牛的呼吸频率和直肠温度等的实时变化情况及时采取相应的措施,从而降低奶牛的热应激损失.

智利进口荷斯坦牛β-Lg和β-CN基因多态性及其对泌乳性能的影响

本研究利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对江苏某大型奶牛场智利进口荷斯坦牛β-Lg(β-乳球蛋白)和β-CN(β-酪蛋白)基因多态性进行分型,同时收集采样牛只2016～2018年DHI检测结果,利用最小二乘模型分析其多态性及其对泌乳性能的影响。结果表明,在检测群体中β-Lg有A、B两种等位基因,基因频率分别为0.527和0.473,有AA、AB、BB三种基因型,优势基因型为AB型,频率为0.569;β-CN有A、B两种等位基因,其基因频率分别为0.960和0.040,有AA和AB两种基因型,优势基因型为AA型,频率为0.920。方差分析表明,β-Lg对日产奶量、乳蛋白率、体细胞评分(SCS)和尿素氮含量均有极显著影响(P<0.01);β-CN对乳蛋白率和脂蛋白比有显著影响(P<0.05),对日产奶量影响极显著(P<0.01)。该结果为利用乳蛋白基因多态性提高智利进口荷斯坦牛泌乳性能提供了参考资料。

探究牛源肺炎克雷伯菌bla-SHV耐药基因转移机制

[目的]鉴定分离到牛源肺炎克雷伯杆菌的SHV表型,并通过接合转移实验确定能够水平转移给其他细菌,以探明其耐药基因转移的机制。[方法]对已经分离得到的肺炎克雷伯菌进行药敏试验,检测耐药基因,做水平转移实验。[结果]从分离得到的71株肺炎克雷伯菌中,产超光谱β-内酰胺酶的菌株共有66株,66株中共有7株含SHV基因的肺炎克雷伯菌,选取其中5株进行水平转移试验,获得3株接合子。[结论]ESBLS肺炎克雷伯菌能够通过结合性质粒介导AMP、GEN、AMX等多种耐药基因的水平转移。