穿山龙液泡H^+-ATPase c亚基基因片段的克隆

利用抑制消减杂交(SSH)和SMART技术,构建了3年生和1年生穿山龙(Dioscoreanipponica)根组织mRNA群体间正向差减cDNA文库.从34个随机测序的cDNA克隆中,发现了1个编码液泡H+-ATPase(V-H+-ATPase)c亚基的克隆,并命名为DnVHAc1(Acces-sion No:DN792564).序列同源性分析表明,其cDNA序列长486bp,3’端具有PolyA结构,其编码的氨基酸序列(115个氨基酸残基)也与多种植物的液泡H+-ATPase c亚基(16kDa prote-olipids)具有较高同源性,具有3个跨膜疏水结构域,结构域Ⅲ为功能保守的区域,有dicyclo-hexylcarbodimide(DCCD)结合位点,Glu-92在调节液泡H+-ATPase具有重要作用.该研究结果为克隆其全长基因和进一步研究其在薯蓣皂甙次生代谢生物合成中的功能提供了重要的实验基础.