COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的探讨Ⅳ型胶原蛋白1(COL4A1)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的作用,及其上游调控机制。方法将COL4A1过表达载体、人着色性干皮病基因(XPD)过表达载体、miR-29a-3p模拟物、miR-29a-3p抑制物、Si-COL4A1、Si-XPD按实验目的转染各组细胞,以空载质粒、NC-模拟物、NC-抑制物、NC-SiRNA作为相应的对照组;qRT-PCR检测COL4A1和XPD mRNA水平;蛋白质印迹法检测COL4A1、XPD和EMT相关蛋白质水平;MTT检测细胞活力;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力;萤光素酶报告基因实验验证miR-29a-3p和COL4A1的靶向关系。结果肝癌组织中COL4A1 mRNA[(3.25±1.10)vs(0.88±0.45),P<0.01]和蛋白质[(2.58±0.50)vs(1.00±0.14),P<0.01]水平均高于癌旁组织。SMMC-7721、HepG2(P<0.01)和Hep3B(P<0.05)细胞株的COL4A1 mRNA和蛋白质水平均高于L02细胞。与Hep3B+空载质粒相比,过表达COL4A1促进了Hep3B细胞增殖[(0.48±0.06)vs(0.76±0.09),P<0.01]、迁移[(109.00±9.17)个vs(199.33±15.04)个,P<0.01]、侵袭[(84.67±8.02)个vs(133.00±11.53)个,P<0.01]和EMT(P<0.05)。与HepG2+NC-SiRNA相比,沉默COL4A1抑制了HepG2细胞增殖[(0.62±0.09)vs(0.42±0.03),P<0.01]、迁移[(173.00±12.00)个vs(75.00±7.94)个,P<0.01]、侵袭[(105.33±7.51)个vs(47.00±5.57)个,P<0.01]和EMT(P<0.05)。过表达XPD后,HepG2细胞的COL4A1 mRNA[(1.00±0.09)vs(0.55±0.06),P<0.01]和蛋白质[(1.00±0.09)vs(0.33±0.04),P<0.01]水平较HepG2+空载质粒组下降,沉默XPD在Hep3B细胞中出现了相反的结果[与Hep3B+NC-SiRNA相比:mRNA,(1.00±0.08)vs(2.52±0.25);蛋白质,(1.00±0.09)vs(2.56±0.36),P<0.01]。转染miR-29a-3p模拟物后,HepG2细胞中COL4A1 mRNA[(1.00±0.13)vs(0.47±0.07),P<0.01]和蛋白质[(1.00±0.15)vs(0.36±0.09),P<0.01]水平较NC-模拟物+HepG2下降;而miR-29a-3p抑制物在Hep3B细胞中出现了相反的结果[与NC-抑制剂+Hep3B相比:mRNA,(1.00±0.13)vs(3.30±0.41),P<0.01;蛋白质,(1.00±0.14)vs(2.91±0.30),P<0.01]。miR-29a-3p模拟物逆转了沉默XPD介导的Hep3B细胞COL4A1上调(P<0.01)。结论COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT,并受XPD-miR-29a-3p轴的负性调控。

Cyclin D1 siRNA转染人肝癌细胞的增殖、凋亡变化及其机制

目的观察Cyclin D1 siRNA转染的人肝癌细胞增殖、凋亡变化,并探讨其机制。方法培养人肝癌细胞株Hep3B,将细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。阴性对照组和实验组分别通过脂质体转染NC siRNA和Cyclin D1 siRNA,转染48 h后收获细胞。采用MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞仪观察凋亡细胞并计算细胞凋亡率;免疫组化法检测各组细胞中的Caspase-3蛋白;采用RT-PCR法检测各组细胞中的乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)、着色性干皮病基因蛋白D(XPD)、Bcl-2、Bax mRNA;Western blotting法检测各组细胞中的HBx、XPD、Bcl-2、Bax蛋白。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力减弱、凋亡率升高、Caspase-3相对表达量增高(P均<0.01)。与空白对照组和阴性对照组相比,实验组HBx、Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调,XPD、Bax mRNA及蛋白表达上调(P均<0.01)。结论 Cyclin D1 siRNA转染的人肝癌细胞增殖受到抑制、凋亡增多,其机制可能与HBx、Bcl-2表达下调及XPD、Bax表达上调有关。

早期持续血液滤过联合芒硝外敷治疗重症急性胰腺炎的临床观察

目的探讨早期持续血液滤过联合芒硝外敷治疗重症急性胰腺炎的临床疗效。方法选取2015年6月-2017年12月期间本院收治的68例重症急性胰腺炎患者。随机分为对照组和观察组,各34例。所有患者入院后均给予相应常规内科综合治疗,在此基础上,对照组用芒硝外敷治疗,观察组给予早期持续血液滤过联合芒硝外敷治疗;比较两组患者治疗前后生命体征、APACHEⅡ评分、血清生化指标,治疗后腹痛症状缓解时间、肠鸣音恢复时间、首次排便时间及住院时间等情况。结果两组患者治疗前后生命体征、APACHEⅡ评分、腹腔内压、血清生化指标、炎症反应指标等比较无显著差异(P>0.05),治疗后均明显改善(P<0.05);观察组治疗后体温、心率、呼吸频率、平均动脉压、APACHEⅡ评分、腹腔内压、AMY、ALT、SCr、BUN、CRP、PaO_2/FiO_2及白细胞计数等指标,改善效果明显优于对照组(P<0.05);观察组治疗后腹痛缓解时间、肠鸣音恢复时间、首次排便时间及住院时间均显著少于对照组(P<0.05)。结论早期持续血液过滤联合芒硝外敷法能有效缓解患者临床症状及体征、改善患者器官功能、提高临床疗效,是临床治疗重症急性胰腺炎的有效措施。

C-sis基因对过氧化氢诱导大鼠肝细胞凋亡的抑制作用

目的探讨大鼠C-sis基因对过氧化氢(H_2O_2)诱导肝细胞凋亡的影响。方法使用脂质体转染法把重组质粒pc DNA3.1/C-sis和空载质粒pc DNA3.1转染进入正常大鼠肝细胞株BRL细胞,转染后的6~8 h用浓度为200μmol/L的H_2O_2处理细胞,作用48 h后收获细胞。细胞分为正常对照组、空载质粒组、C-sis质粒组、H_2O_2组、空载质粒+H_2O_2组、C-sis质粒+H_2O_2组。利用荧光定量PCR检测C-sis的m RNA表达;利用Western blot检测C-sis的蛋白表达和Caspase3活性;利用CCK8检测细胞活力;利用TUNEL检测细胞凋亡;利用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果与正常对照组和空载质粒组相比,C-sis质粒组的C-sis m RNA和蛋白表达水平显著升高(P均<0.01)。与正常对照组相比,H_2O_2组的细胞活力明显下降(P<0.01),激活型Caspase3蛋白明显升高(P<0.01);与空载质粒+H_2O_2组相比,C-sis质粒+H_2O_2组的细胞活力升高(P<0.01),激活型Caspase3蛋白降低(P<0.05)。TUNEL结果显示,与正常对照组相比,H_2O_2组的细胞凋亡明显升高(P<0.01);与空载质粒+H_2O_2组相比,C-sis质粒+H_2O_2组的细胞凋亡明显降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与正常对照组相比,H_2O_2组的细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与空载质粒+H_2O_2组相比,C-sis质粒+H_2O_2组的细胞凋亡明显降低(P<0.01)。各组之间的细胞周期没有明显区别(P>0.05)。结论 C-sis基因能抑制H_2O_2诱导的肝细胞凋亡,并促进其生长。

人剪切修复基因D介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用

目的 探讨人剪切修复基因D（XPD）是否介导氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）促进人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡。 方法 以ox-LDL建立HUVEC凋亡模型。用脂质体将XPD-siRNA转染HUVEC,给予ox-LDL处理。实验分6组：空白对照组；阴性对照siRNA组；XPD-siRNA组；ox-LDL组；ox-LDL ＋阴性对照siRNA组；ox-LDL＋XPD-siRNA组。MTT测定细胞活力；流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期；用RT-PCR和Western blot检测XPD、Bax和Bcl-2的表达。 结果 建立HUVEC凋亡模型ox-LDL的最佳浓度为100 mg/L。与阴性对照siRNA组相比,XPD-siRNA组的细胞凋亡率明显下降（P〈0.05）,存活率明显增加（P〈0.01）,G0/G1期细胞减少（P〈0.05）、S期细胞增加（P〈0.05）,XPD、Bax表达降低（P均〈0.05）,Bcl-2表达增高（P〈0.05）；与空白对照组相比,ox-LDL组细胞凋亡率明显增加（P〈0.01）,细胞存活率下降（P〈0.05）,G0/G1期细胞增加（P〈0.05）、S期细胞明显减少（P〈0.01）,XPD、Bax表达升高（P均〈0.05）,Bcl-2表达降低（P〈0.05）；与ox-LDL＋阴性对照siRNA组相比,ox-LDL＋XPD-siRNA组细胞凋亡率下降（P〈0.05）,细胞存活率明显增加（P〈0.01）,G0/G1期细胞减少（P〈0.05）、S期细胞增加（P〈0.05）,XPD、Bax表达降低（P均〈0.05）,Bcl-2表达增高（P〈0.05）。 结论 XPD能介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用。

复方甘草酸苷治疗肝炎肝硬化临床观察

目的:观察复方甘草酸苷治疗肝炎肝硬化的临床疗效。方法:将120例肝炎肝硬化患者随机分为对照组和治疗组各60例,治疗组采用复方甘草酸苷注射液20mL/d,静脉点滴,1次/d,同时结合综合疗法治疗,对照组仅采用综合疗法,不使用与复方甘草酸苷相关的任何药物,60天后观察两组的临床症状、血常规、肝功能、HBV-DNA和HCV-RNA的情况、胃镜、B超,并进行对比分析。结果:复方甘草酸苷在抑制病毒增殖、提高免疫力、改善肝细胞损伤方面均优于对照组。结论:复方甘草酸苷为治疗肝炎肝硬化的有效药物,值得临床推广应用。

ICU脑出血颅脑术后患者颅内感染的诊断及预后相关性分析

目的对ICU脑出血颅脑术后患者颅内感染的诊断及预后相关性进行分析。方法选择2013年7月-2017年2月医院ICU脑出血颅脑术后治疗的患者182例。依据患者术后是否发生颅内感染分为感染组和非感染组,采集患者相关标本对其两组患者治疗前及治疗第1d、2d、3d、5d、7d、9d、12d的体温和相关指标进行监测。结果两组患者体温比较,感染组高于非感染组(P<0.05);治疗前感染组患者在C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及白细胞(WBC)计数上要明显高于非感染组(P<0.05);感染组患者在给予相关治疗后CRP、PCT及MMP-9的水平呈现明显下降趋势(P<0.05);CRP诊断颅内感染的灵敏度为86.08%、特异度为79.75%,PCT分别为91.14%和87.34%,MMP-9分别为88.61%和87.34%,PCT联合MMP-9分别为97.47%和96.20%,PCT+CRP+MMP-9分别为98.73%和97.47%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 PCT、CRP及MMP-9对于脑出血后颅脑感染可进行有效的临床诊断,其水平表达在一定程度上影响着患者的预后,因此尽早的对脑出血患者进行PCT、CRP及MMP-9的联合监测,对于术后患者发生颅内感染早期诊断及指导临床用药有着重要意义。

经消化内镜治疗胃十二指肠出血的治疗效果分析

目的探讨经消化内镜治疗胃十二指肠出血的治疗效果.方法选定本院于2017年1月到2019年8月收诊的66例胃十二指肠出血患者,均经消化内镜辅助治疗,等距抽样法分为对照组(肾上腺素止血,33例)与观察组(氩离子凝固术,33例)2组,比较2组胃十二指肠出血患者的住院天数、止血天数、输血量、出血量、再出血率,4周内死亡率.结果观察组胃十二指肠出血患者住院天数(5.31±0.47)d、止血天数(1.62±0.17)d、输血量(412.74±34.61)mL,出血量(367.28±28.52)mL均低于对照组(P<0.05);观察组胃十二指肠出血患者的再出血率(3.03%)、4周内死亡率(0.00%)均低于对照组(P<0.05).结论氩离子凝固术(消化内镜下)应用后,可对胃十二指肠出血患者的出血量、再出血率,恢复时间进行减少,值得使用推广.

重组质粒pcDNA3.1/C-sis对大鼠FHF的影响

目的探讨重组质粒pcDNA3.1/C-sis导入大鼠对暴发性肝功能衰竭(FHF)的影响。方法利用流体力学的方法将重组质粒pcDNA3.1/C-sis导入大鼠肝脏,48h后用内毒素(LPS)+D-半乳糖胺(D-GalN)诱导大鼠FHF;利用荧光定量PCR及蛋白质印迹法(Western blotting)检测C-sis表达;利用苏木精-伊红(HE)染色及测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性检测凋亡;利用Western Blotting检测Bcl-2和Bax的表达变化;计算大鼠24h观察期内的死亡率。结果 FHF+C-sis质粒组的C-sis mRNA和蛋白表达水平较正常对照组和FHF+空载质粒组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组和FHF+空载质粒组肝脏细胞凋亡增多;与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组肝脏细胞凋亡减少。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组大鼠肝脏组织中Caspase-3的表达增多(P<0.01);与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组大鼠肝脏组织中Caspase-3的表达减少(P<0.05)。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组大鼠肝脏组织中Bcl-2表达明显减少(P<0.01),Bax表达明显增多(P<0.01);而与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组大鼠肝脏组织中Bcl-2表达增多(P<0.05),Bax表达减少(P<0.05)。在24h观察期内,正常对照组大鼠均存活,FHF+林格液注射组及FHF+空载质粒组大鼠死亡率分别为70.0%和80.0%;而FHF+C-sis质粒组大鼠仅20.0%死亡。结论 C-sis基因可减弱LPS+D-GalN诱导的大鼠FHF。