2021—2023年云南省鸭病统计分析报告

概述了2021—2023年云南省水禽产业现状,重点统计分析了2021—2023年度云南省各地送检的鸭病临床诊断数据、样品病原检测和抗体监测结果,报道了2021—2023年分离鉴定的鸭疫里默氏菌、禽大肠杆菌和鸭源沙门氏菌代表菌株的药物敏感性统计结果,并针对云南鸭疫病流行特点,提出关注重点及防治措施。

云南省部分地方品种鸡禽白血病病毒感染情况调查及南涧乌骨鸡种鸡禽白血病净化效果评估

为了解云南省部分地方品种鸡禽白血病病毒(ALV)的感染情况并评估禽白血病(AL)净化效果,本试验于2019—2021年自云南省5个地区采集12种地方品种鸡的血清和血浆样本共3321份,通过ELISA试剂盒检测禽白血病病毒J亚群(ALV-J)抗体和ALV p27抗原阳性率,分析云南省部分地方品种鸡ALV的感染情况;于2020—2022年对南涧乌骨鸡进行连续3个世代的AL净化并评估净化效果。结果显示:被调查的12种地方品种鸡均存在ALV感染,ALV-J抗体群体平均阳性率为44.82%(765/1707),ALV p27抗原群体平均阳性率为14.06%(227/1614);在不同地方品种鸡群中,公鸡群体阳性率30.52%(405/1327)高于母鸡群体阳性率29.44%(587/1994),散养户ALV-J抗体群体阳性率47.72%(325/681)高于种鸡场ALV-J抗体群体阳性率42.88%(440/1026)。南涧乌骨鸡种鸡经过3个世代净化,与1世代ALV p27抗原阳性率[精液58.33%(658/1128)、蛋清33.71%(360/1068)、40周龄公鸡血浆22.54%(94/417)和母鸡血浆18.71%(119/636)]相比,3世代[精液16.87%(218/1292)、蛋清14.56%(285/1958)、40周龄公鸡血浆0.85%(9/1065)和母鸡血浆0.66%(11/1656)]极显著下降(P<0.01);与1世代相比,3世代商品肉鸡生产性能和种鸡繁殖性能明显提升,说明该净化方案切实可行。本试验为云南省地方品种鸡群AL的净化和防控工作提供参考依据和数据支持,为云南省地方品种鸡遗传资源保护和开发利用提供借鉴。

2021—2023年云南省麻栗坡县口蹄疫血清学监测及分析

为了解云南省中越边境麻栗坡县家畜口蹄疫(FMD)免疫情况,2021—2023年采集麻栗坡县猪、牛、羊血清样品4846份,分别采用口蹄疫病毒(FMDV)O型/A型ELISA抗体检测试剂盒及非结构蛋白3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测。结果显示:麻栗坡县猪、牛和羊O型FMD免疫合格率为74.08%,牛和羊A型FMD免疫合格率为73.95%;不同畜种间O型FMD免疫合格率差异有统计学意义(P<0.05),牛、羊的A型FMD免疫合格率无显著差异(P>0.05);不同年份间,O型/A型FMD免疫合格率差异均有统计学意义(P<0.05);不同饲养规模间,规模场O型FMD免疫合格率显著高于散养户,差异具有统计学意义(P<0.05),牛规模场A型FMD免疫合格率明显高于散养户(P<0.05)。FMDV非结构蛋白抗体结果显示:猪、牛、羊感染抗体阳性率分别为1.30%、16.29%、16.99%,牛和羊的抗体阳性率显著高于猪,差异具有统计学意义(P<0.05)。结果表明:麻栗坡县猪、牛、羊FMD整体免疫合格,但存在不同程度的FMDV感染。建议持续加强FMD疫苗免疫和免疫效果评估,强化血清学和病原学监测,及时掌握FMDV畜间感染情况,防控边境地区FMD流行,降低向内地散播风险。

工作交流

农业农村部调研组赴云南调研农资打假工作。3月8日至12日,农业农村部调研组对云南省农资打假工作情况开展调研。调研组分别对昆明斗南农资交易市场、昆明通威饲料有限公司、云南北玉种子科技有限公司、陆良县曦野蔬菜种植基地和部分乡镇农资经营门店等20余家经营主体进行检查,现场查验种子农药肥料经营门店的备案登记、进货渠道、产品质量、购销台账记录等情况。

一例番鸭3型腺病毒感染的实验室诊断和序列分析

为确诊昆明某番鸭场送检病死番鸭的致病原因,对病死番鸭进行病理剖检、细菌分离培养、PCR检测以及序列分析。结果显示,所检样品无细菌感染,鸭3型腺病毒(DAdV-3)PCR核酸检测结果为阳性,其他病原核酸检测结果均为阴性;阳性PCR产物测序,基因序列比对及进化树分析,发现该样品基因序列与DAdV-3为同一进化树分支,同源性为100%。结合病理剖检特征、PCR检测及临床症状,诊断该番鸭场为鸭3型腺病毒感染。研究结果为DAdV-3感染的防控提供了参考。

云南高原反季节鹅繁育技术

一、技术概况。鹅的繁殖和生产具有明显的季节性,国内夏季维鹅及肉鹅市场供不应求,推广反季节鹅繁育技术具有较好的应用前景。云南高原反季节鹅繁育技术充分利用当地丰富的牧草种类资源和气候条件优势,采用网上饲养,降低养殖成本,减少环境污染,使鹅养殖产业向绿色环保无公害养殖方向发展。

云南地方乌鸡肠炎沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性研究

为鉴定云南某地方乌鸡场疑似沙门氏菌感染的病原菌并研究其生物学特性,通过细菌分离纯化、染色镜检、生化试验、血清分型、PCR检测、16S rRNA基因测序分析进行鉴定,并进行了药敏试验、耐药基因、毒力基因检测,以及致病性试验和动物回归试验。结果显示:分离株经纯化后在SS培养基上为圆形,半透明,中心黑色或全黑色光滑菌落;革兰氏染色镜检可见无芽孢、无荚膜的阴性短杆菌;综合沙门氏菌属血清凝集试验、生化试验、PCR检测、16S rRNA基因测序及遗传进化分析结果确定该菌株为肠炎沙门氏菌,命名为SE001株。动物试验表明:该菌株对试验小鼠致病性强,按照0.2 mL/只剂量接种小鼠(菌液浓度1×10^(4)CFU/mL),24 h内死亡率为50%;对不同品种雏鸡致病性存在差异,按照0.2 mL/只剂量(菌液浓度1×10^(8)CFU/mL)接种白羽蛋鸡雏鸡,7 d内全部死亡;而接种茶花鸡雏鸡不会引起死亡,但剖检可见心脏明显病变。药敏试验结果表明:该菌株对阿莫西林、头孢氨苄、庆大霉素、阿奇霉素、恩诺沙星等20种药物敏感;对红霉素、克林霉素中度敏感;对土霉素、四环素、强力霉素、罗红霉素等8种药物耐药。毒力基因检测表明:该菌株含有spiA、pagC、msgA、invA等14个毒力基因,不含spvB、catB、pefA 3个毒力基因。结果提示,云南地方乌鸡分离出的肠炎沙门氏菌SE001株具有多重耐药性,携带多种毒力基因,对小鼠及雏鸡均有较大的危害。研究为云南地方鸡沙门氏菌的防治提供了科学依据。

广州市及其周边地区马群中盖塔病毒血清流行病学调查

为初步了解广州市及其周边地区马群中盖塔病毒(Getah virus,GTV)感染情况,对2019年该区域内马场及动物园等场点的马匹进行了血清流行病学回顾调查。采用血清微量中和试验,对17个采样点184份血清样品进行了GTV中和抗体检测,并对结果进行了统计分析。结果显示:184份马血清样品中,GTV中和抗体平均阳性率为26.09%(48/184),中和抗体滴度为1:10~1:640;不同采样点的中和抗体阳性率介于0~43.75%,差异明显(P<0.05),其中动物园和4个马场的中和抗体阳性率均大于30%;从年龄分布看,>15~20岁组别的中和抗体阳性率最高(35.29%),其他依次为0~5岁、>10~15岁和>5~10岁组,中和抗体阳性率分别为33.33%、27.14%和22.36%。结果表明,广州市及其周边地区不同年龄段马匹中广泛存在GTV感染,且部分地区感染较严重。结果提示,该地区已形成GTV循环感染的自然生境,因此有必要加强马匹的GTV监测,并采取虫媒控制等防控措施,以减少GTV流行和可能带来的经济损失。

猪瘟传代细胞活疫苗、口蹄疫和高致病性猪蓝耳病联合免疫效果试验研究

为评估猪瘟传代细胞活疫苗在猪瘟、高致病性猪蓝耳病和口蹄疫三种疫苗同步两点免疫新技术（即“321”免疫新技术）应用中的免疫效果,特进行本试验.1 材料与方法1.1 试验地点：富民县赤鹫镇大平地村委会、西山区海口镇双哨村委会.1.2 试验动物：随机选取临床健康生猪,两县区各1000头,合计2000头.

水禽专用高致病性禽流感疫苗临床免疫效果初探

本研究通过对试验组水禽(鸭)免疫禽流感灭活疫苗(H_5N_2亚型D7株)、对照组免疫重组禽流感病毒(H_5N_1亚型)细胞灭活疫苗(Re-6株),在免疫前及免疫后15d、21d、36d、51d和66d分别进行免疫抗体监测及病毒核酸监测,结果显示:免疫后各试验组动物的抗体水平均显著性高于对照组(P<0.05),且试验组之间差异不显著(P>0.05)。试验组和对照组的免疫抗体合格率均为100%,达到合格标准。通过比较分析,禽流感灭活疫苗(H_5N_2亚型D7株)对水禽的免疫效果要优于重组禽流感病毒(H_5N_1亚型)细胞灭活疫苗(Re-6株)。

水禽专用高致病性禽流感疫苗临床免疫效果初探

本研究通过对试验组水禽（鸭）免疫禽流感灭活疫苗（H5N2亚型D7株）、对照组免疫重组禽流感病毒（H5N1亚型）细胞灭活疫苗（Re-6株）,在免疫前及免疫后15d、21d、36d、51d和66d分别进行免疫抗体监测及病毒核酸监测,结果显示：免疫后各试验组动物的抗体水平均显著性高于对照组（P〈0.05）,且试验组之间差异不显著（P〉0.05）。试验组和对照组的免疫抗体合格率均为100%,达到合格标准。免疫后试验组和对照组的抗体水平呈逐渐上升的趋势,并在第15d可达到较高的免疫抗体,获得较强的免疫保护,其中试验组抗体水平为6.9~7.3 log2,对照组为6.2 log2。直至免疫后66d,试验组的抗体水平为8.10~8.75 log2,对照组为6.3log2。免疫前试验组和对照组抗体离散度都比较高,均在60%以上,最高可达到107.34%;免疫后抗体离散度比较低,均在30%以下。通过比较分析,禽流感灭活疫苗（H5N2亚型D7株）对水禽的免疫效果要优于重组禽流感病毒（H5N1亚型）细胞灭活疫苗（Re-6株）。

西藏环状病毒RT-PCR检测方法的建立

建立西藏环状病毒(Tibet orbivirus, TIBOV)RT-PCR诊断方法。根据云南省新分离到的TIBOV Seg-7片段序列设计1套巢式引物为120S7F1/R1、120S7F2/R2。以TIBOV DH13C120株病毒核酸为模板,优化反应条件,建立巢式RT-PCR检测方法,并对云南省新分离的9株TIBOV进行核酸检测。分别采用外引物(120S7F1/R1)和内引物(120S7F2/R2)对TIBOV DH13C120株进行RT-PCR扩增,退火温度分别为52℃和54℃,外引物扩增出片段大小为1 050 bp条带;内引物扩增出的片段大小为500bp,扩增条带大小与设计预期相一致。而蓝舌病毒(BTV)JCC12-7株和阴性对照两轮扩增均为阴性,采用该方法对云南省新分离的9株TIBOV、2株BTV和1株鹿流行性出血热病毒(EHDV)进行检测,9株TIBOV扩增均为阳性,而BTV、EHDV和阴性对照均为阴性。建立了TIBOV巢式RT-PCR检测方法,该方法可用于云南省目前动物或媒介中流行的TIBOV核酸检测。

内蒙古呼和浩特市摇蚊鉴定与COI基因序列分析

为了解内蒙古呼和浩特市摇蚊的分类鉴定与COI基因序列特征。2016年7月在内蒙古自治区呼和浩特市采集摇蚊标本,在体视显微镜下观察摇蚊形态学特征,同时提取虫体基因组DNA,用COI基因特异引物PCR扩增和序列测定,然后采用生物信息学软件进行核苷酸同源性和遗传进化分析。共采集摇蚊标本41只,其中雌蚊38只(92.68%)、雄蚊3只(7.32%)。9只摇蚊具有与Ch.riparius相似形态学特征,32只摇蚊具有与Ch.muratensis相似的形态学特征。序列分析结果显示3只摇蚊COI基因核苷酸同源性在83.3%～99.8%,其中HS1-1-1、HS1-1-2两只蚊虫与Ch.riparius位于同一进化分枝内,核苷酸同源性均为99.8%;HS1-3-2与Ch.muratensis位于同一进化分枝内,核苷酸同源性为99.6%。

云南部分地区猫血巴尔通氏体感染状况的监测

为获悉云南省部分地区猫血巴尔通氏体的感染情况,采集来自云南省部分地区猫血液样品338份,PCR扩增猫血巴尔通氏体的16S rRNA基因,通过测序、序列比对分析、构建进化树,确定所检获的猫血巴尔通氏体种属关系。结果有21个样本确定为猫血巴尔通氏体感染阳性,总体感染率为6.21%(21/338),其中检测20份样品为猫小型血巴尔通氏体,1份样品为猫大型血巴尔通氏体。对不同养殖模式和不同年龄进行感染因素分析,表明感染率在不同养殖模式和不同年龄段之间有显著的差异(P<0.05)。本研究首次报道了云南省部分地区猫体内存在猫血巴尔通氏体的感染,为云南省猫血巴尔通氏体病的防控提供了数据参考。

昆明地区尖音库蚊复合组蚊虫分子鉴定

从分子水平明确云南省昆明地区尖音库蚊复合组蚊虫分类,为媒介及其传播虫媒病毒病控制提供依据。2017年5月在昆明市青龙山云南省畜牧兽医科学院家属区室内采集蚊虫标本,根据形态学和分子生物学方法对蚊虫标本进行种类鉴定。2017年5月17日—22日5 d共采集到蚊虫标本50只,均为雌虫,在体视显微镜下观察50只蚊虫形态特征均相同,具有虫体中等大小,淡棕色;喙无清楚界限的白环,腹节背板有淡色基带,平齐和侧板相连,各足跗节全部色暗、无淡色环等形态特征。COI、COII和ITS 3个基因遗传进化分析结果显示:昆明采集蚊虫M1与尖音库蚊复合组的尖音库蚊、骚扰库蚊、淡色库蚊和致倦库蚊遗传进化关系密切,核苷酸同源性均在96.4%~100%;在ITS基因构建的系统进化树上,昆明采集蚊虫M1与尖音库蚊和骚扰库蚊位于同一进化分支内,核苷酸同源性也较高,在99.1%~99.9%,而与淡色库蚊和致倦库蚊位于不同进化分支,核苷酸同源性也较低,在96.4%~96.6%。通过形态学和分子生物学方法鉴定了昆明地区存在与尖音库蚊和骚扰库蚊遗传进化关系密切的库蚊。

鸭坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusuvims,DTMUV)荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制标准曲线,用SYBRGreenI法检测MGB探针法qRT-PCR的引物是否有非特异性扩增,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样品检测。结果显示:MGB探针法qRT-PCR标准曲线的相关系数为0.999 3,其引物没有非特异性扩增;对于其他阳性样本,如鸭肝炎病毒(DHV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)等抗原无扩增曲线,只能检出DTMUV;qRT-PCR敏感性可达3×10^(2) copies/μL,是普通RT-PCR的10 000倍;批内和批间重复性试验变异系数(CV)为0.08%~0.49%,均小于0.5%。从云南省不同地区采集20份临床出现产蛋下降症状的病鸭组织,应用试验建立的qRT-PCR方法检出12份阳性样品,而普通RT-PCR检出10份,两者的阳性率分别为60% (12/20)和50% (10/20)。结果表明,本试验成功建立了基于DTMUV NS5基因的MGB探针qRT-PCR检测方法,其标准曲线线性关系显著,特异性强,与其他禽源性病原无交叉反应性,敏感性和重复性良好,敏感性和阳性检出率较普通RT-PCR高,更适合于DTMUV感染的临床诊断和流行病学调查。

鸭坦布苏病毒病RT-PCR检测方法的建立

鸭坦布苏病毒病是近年来新发的危害养鸭业较严重的传染病之一。自2019年疑似病例在云南发生以来,给云南养鸭业造成严重损失。针对鸭坦布苏病毒(DTMUV)保守的非结构蛋白NS5基因序列,设计1对引物,建立DTMUV的RT-PCR检测方法。该方法特异性地扩增出718 bp,检测的敏感度为3.24 pg/μL;对鸭肝炎病毒、新城疫病毒、禽腺病毒、减蛋综合征病毒和禽流感病毒均无扩增条带;应用建立的RT-PCR方法检测临床疑似病料,阳性结果经测序证明感染DTMUV。为鸭坦布苏病毒病的病原检测提供了一种快速方法。

鸭坦布苏病毒快速实时荧光RT-LAMP方法的建立及初步应用

为建立检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)的荧光逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法,根据DTMUV NS5基因保守序列设计1套特异性引物,对反应时间和温度进行优化,并评价该方法的特异性、敏感性、重复性和临床适用性。结果显示:建立的荧光RT-LAMP最优反应条件为65℃25 min;只特异性扩增DTMUV,而不扩增其他几种禽类病毒;最低检测限为4×10^(2)copies/μL,与qRT-PCR方法敏感性一致,是普通RT-PCR的100倍;批内和批间重复性高;应用该方法检测DTMUV不同剂量人工感染鸭肝脏样品,对接毒剂量为10^(3-7)TCID_(50)和10^(2-7)TCID_(50)组的阳性检出率均为100%,对接毒量10^(1.7)TCID_(50)组的阳性检出率为90%(9/10)。结果表明,本研究建立的荧光RT-LAMP检测方法特异性强、重复性好、敏感性高,可成为快速诊断DTMUV的方法之一。

云南省肉鸡规模养殖成本分析与可持续发展

为了解云南省肉鸡规模养殖成本和收益情况,以2014—2016年肉鸡规模养殖场(户)数量、大中型养殖场费用和用工、成本收益和定点集贸市场活鸡与白条鸡价格等数据为基础,分析了影响云南省肉鸡养殖发展的因素,提出推进适度规模养殖场建设、加大祖代和父母代种鸡场建设、完善地方良种肉鸡繁育体系、开展孵化技术研究和孵化设备研制、加强养殖设施设备的投入和升级改造、加大自身科技投入等促进云南肉鸡产业可持续发展的建议。

扎实开展基层人才对口培养工作 助推云南高原特色农业健康发展

为深入贯彻落实云南省委、省政府《关于创新体制机制加强人才工作的意见》(云发〔2014〕1号),着力培养扎根基层、有发展潜力的优秀中青年专业技术人才,根据省委组织部等7部门《关于印发〈云南省基层人才对口培养计划实施办法(暂行)〉的通知》(云组发〔2014〕7号)文件精神,按照省委组织部和云南省农业厅安排,自2014年以来,云南省畜牧兽医科学院共接收来自全省15个州(市)43个县的46名基层优秀专业技术人员进行为期1年的畜牧兽医专业技术对口培养,研修期间主要采取“导师+助手”的培养模式进行培养。