神经酰胺干粉的制备与分析鉴定

采用乙醇多次萃取法从神经酰胺粗制品中制备神经酰胺干粉,红外光谱法鉴定神经酰胺干粉,化学法测定神经酰胺干粉中各成分的质量分数。结果表明,神经酰胺粗制品经纯化后可获得白色、无异味的神经酰胺干粉,其红外光谱与对照品相符。与粗制品相比,神经酰胺干粉中的半乳糖神经酰胺质量分数由30.10%提高到63.14%;磷脂质量分数由44.60%下降至20.55%;胆固醇质量分数由18.81%下降至16.31%。

内吞型EpCAM纳米抗体的筛选及鉴定

上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)是肿瘤靶向治疗的热门靶点,本研究开发了3株高特异性针对EpCAM的胞吞型纳米抗体,为基于此靶点的免疫毒素研究提供基础。研究前期对骆驼免疫EpCAM-Fc蛋白,构建了高质量的噬菌体展示纳米抗体文库,运用噬菌体展示技术通过3轮淘选成功获得了17株互补决定区(complementarity determining region,CDR)3序列不同的EpCAM纳米抗体,原核纯化获得高纯度的抗体蛋白后,流式细胞术确定其中7株具有细胞水平高结合活性。动物实验经复旦大学药学院实验动物伦理委员会(IACUC)批准。通过流式细胞术和激光共聚焦显微术最终鉴定出3株具有较高胞吞活性的EpCAM纳米抗体,且ForteBio测定具高亲和力。本研究以期为EpCAM阳性肿瘤的靶向治疗开辟新的途径,并为其他靶点的纳米抗体免疫毒素研究提供指导。