慢性肾衰大鼠体感诱发电位和坐骨神经传导速度变化及其机理的探讨

观察了８只５／６肾切除术后４个月的慢性肾衰大鼠和１０只正常大鼠的神经电生理和有关生化及组织学指标，发现慢性肾衰大鼠体感诱发电位各波的潜伏期显著延长，坐骨神经传导速度显著减慢，伴有神经组织钠钾ＡＴＰ酶活性显著下降和脂质过氧化物浓度显著升高，钠钾ＡＴＰ酶活性与脂质过氧化物浓度呈显著负相关，坐骨神经未发现显著组织学异常。提示慢性肾衰时神经传导功能下降，其传导功能下降可能与钠钾ＡＴＰ酶活性下降有关，而后者可能与异常增高的氧自由基反应有关。

薄层色谱法纯化卟啉锰修饰的TFO

目的 筛选分离纯化卟啉锰 TFO 吖啶化合物的简单有效的方法。方法 以固相亚磷酰胺法合成吖啶、6碳氨基连接臂修饰的TFO ,并以温和法切割和脱保护 ;四苯基卟啉四羧酸经金属化、酯化后 ,与上述TFO偶联 ;分别以变性聚丙酰胺凝胶电泳、寡核苷酸纯化柱、薄层色谱法分离纯化偶联反应产物。结果 以凝胶电泳分离偶联反应产物时 ,偶联反应产物带、卟啉锰活性酯带位于同一水平 ,未分离出独立的卟啉锰 TFO 吖啶化合物带。以寡核苷酸纯化柱分离偶联反应产物时 ,紫外分光光度仪检测结果显示 ,回收物仍为卟啉锰 TFO 吖啶化合物与游离的卟啉锰活性酯的混合物。以薄层层析分离偶联反应产物时 ,在卟啉锰活性单酯带后 ,出现一条绿色月牙型带 ,紫外光光谱分析显示 ,此带回收物同时具有寡核苷酸和卟啉锰的特征吸收峰 (UVλmax =2 6 0、4 6 8nm) ,质谱分析结果证实 ,回收物分子量实测值与卟啉锰 TFO 吖啶化合物理论一致。结论 薄层色谱法可简单有效分离纯化卟啉锰 TFO 吖啶化合物。

能与HBV-DNAC启动子结合成三链结构的寡核苷酸的设计与筛选

目的 :筛选出能与HBV DNAC启动子形成三链结构的高亲和力寡核苷酸。方法 :以体外合成的3 2 P标记的HBV DNAC启动子区序列 ( 173 4～ 175 4)为靶序列 ,合成 5种有可能与该靶序列形成三链结构的寡核苷酸链 (TFO) ,同时设计对照靶序列和对照TFO ,用凝胶滞留试验、酶足迹试验等方法对比分析这些TFO与靶序列是否形成三链结构及其结合的亲和性、特异性。结果 :在 3 7°C、pH7 4条件下 ,CT TFO和GT TFOp与3 2 P 靶序列DNA结合的亲和力十分微弱 ,其Kd均 >10 -6mol/L ;GT TFOap和AG TFOs与靶序列DNA结合的亲和力较高 ,Kd分别为 5× 10 -7mol/L和 2 5× 10 -8mol/L ;AG TFO1与靶序列结合的亲和力最高 ,Kd为 3× 10 -9mol/L ,而且两者的结合具有序列特异性。结论 :含AG或GT的TFO可与HBVC启动子区类同聚嘌呤链逆平行方向结合成三链DNA ,其中AG TFO1与靶序列结合的亲和力最高 ,反应完全 ,可使靶双链DNA均转变成三链DNA ,经一定修饰后 ,可试用于HBV基因转录抑制实验。

卟啉锰-TFO-吖啶的合成

目的 合成卟啉锰 TFO 吖啶化合物。方法 合成含 7 去氮 2 脱氧黄嘌呤的TFO ;以吖啶修饰TFO的 3′末端 ,以 6碳氨基连接臂修饰TFO的 5′末端 ;四苯基卟啉四羧酸经金属化、酯化后 ,与TFO的 5′末端偶联 ;薄层层析纯化 ,质谱、紫外光光谱分析鉴定。结果 薄层层析结果显示在对照寡核苷酸带前方有一条淡黄色的吖啶 TFO带 ;紫外光光谱分析显示卟啉锰 TFO 吖啶化合物同时具有 2 60nm处寡核苷酸的特征吸收峰和 468nm处卟啉锰的特征吸收峰。质谱分析结果证实 ,卟啉锰 TFO 吖啶化合物分子量实测值与理论值一致。结论 合成了卟啉锰 TFO

病毒与单核细胞因子的相互作用

在病毒的刺激下,激活了的单核巨噬细胞分泌的白细胞介素-1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子具有显著的间接和直接抗病毒作用,同时也能促进人免疫缺陷病毒、单纯疱疹病毒和巨细胞病毒等病毒在宿主细胞内的增殖和表达.另一方面,人免疫缺陷病毒和乙型肝炎病毒等病毒也能影响单核细胞因子的合成与分泌.本文对这些复杂的相互作用进行了综述.

胚胎肾脏发育的调控因素

人类肾脏起源于间介中胚层体节外侧的生肾索,生肾索的尾端发育为后肾,即人体的肾脏。人类妊娠32天,中肾导管尾端的后肾间充质分泌一种胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF),诱导中肾导管尾端向背侧长出一个输尿管芽。输尿管芽与后肾间充质相互诱导,促使肾发育成熟。影响肾发育的主要因素包括细胞因子、细胞外基质,以及介导细胞与细胞因子和细胞外基质相互作用的中介物。

三股螺旋寡核苷酸的性能影响因素及其应用前景

能形成三股螺旋的寡核苷酸（ＴＦＯ）可特异性地识别相应 ＤＮＡ双股螺旋的靶位点，在基固分析、疾病诊断、疾病治疗等方面具有潜在运用前景。ＴＦＯ与靶ＤＮＡ结合的亲和力和特异性与ＴＦＯ的碱基成分、排列顺序、链的长短等多种因素有关，并受离子浓度、ｐＨ值、结合配基等因素影响。为了更好地应用，需对ＴＦＯ进行一系列改造和修饰，本文综述了近年来国外关于ＴＦＯ性能及其影响因素和ＴＦＯ应用前景的研究进展。

一种靶向肿瘤或炎症组织的新载体——工程巨噬细胞载体

近年 ,人们利用组织内的巨噬细胞 (macrophages ,M)具有聚集于炎症及肿瘤缺氧区的生物学特性 ,开发了一类新载体———工程M载体。M经携带治疗基因的重组病毒稳定转染 ,并以细胞因子或细菌脂多糖激活后 ,静脉注入体内 ,可靶向炎症组织和肿瘤组织 ,并不断产生和分泌重组病毒 ,有效介导治疗基因的转导 ,为肿瘤。

某些病毒与P53蛋白的相互作用

病毒感染人体后,病毒与宿主之间即开始相互斗争、相互作用。除了人们熟知的机体免疫系统能产生特异的细胞免疫和体液免疫反应以清除病毒外,近年发现宿主细胞的某些基因产物,如P53蛋白,也参与了抗病毒机制。P53蛋白是一种肿瘤抑制因子,可诱导细胞凋亡,以限制病毒生长,并能直接抑制病毒复制。此外,病毒对P53蛋白也有反作用。本文就宿主细胞编码的P53蛋白与某些病毒之间的相互作用作一综述。

儿童哮喘α_1-抗糜蛋白酶杂合缺失研究

目的探讨α1 抗糜蛋白酶(α1 antichymotrypsin,α1 ACT)杂合缺失是否为儿童哮喘发病的遗传因素。方法应用火箭免疫电泳技术检测90例哮喘儿童、180例健康儿童及200例健康成人血浆α1 ACT含量 ,家系调查确定α1 ACT杂合缺失 ,统计学方法分析α1 ACT杂合缺失和非缺失患儿的有关临床资料。结果哮喘组、儿童对照组以及成人对照组α1 ACT杂合缺失频率依次为4.4 %、0、0.05 % ,哮喘组较成人对照组明显增高[Prevalenceradio(PR)=8.89, 2MH =5.68,95 %置信区间(1.47,53.60) ,P<0.05] ;且α1 ACT杂合缺失患儿哮喘初发年龄早、住院次数多、放射性过敏原吸附试验阳性率显著增高[PR=3.91, 2MH=10.190,95 %置信区间(1.69,9.03) ,P<0.01]。结论α1 ACT杂合缺失与儿童哮喘发病及其严重性存在一定的联系。

抗病毒新途径:TFO切割病毒DNA研究进展

慢性病毒感染性疾病的治疗仍是一个临床难题。近年来对三股螺旋形成寡核苷酸（ＴＦＯ）的研究表明，ＴＦＯ与双链ＤＮＡ结合成三链ＤＮＡ具有高度的序列特异性，ＴＦＯ末端经金属配合物（啡咯啉铜、卟啉锰、甲磺酸去铁胺铜、乙二胺四乙酸铁）、细胞毒药物（博来霉素、玫瑰树碱）、同位素（１２５Ｉ、１１１Ｉｎ）光敏物质（菲并二氢二恶英、恶唑黄、氨基－Ｐ－喹吖啶）、酶激活剂（吲哚并咔唑）等修饰，能显著提高ＴＦＯ对靶 ＤＮＡ的亲和性和切割能力。目前已对多种病毒核酸分子内三股螺旋结构的形成进行了研究，并有学者试用卟啉锰、氨基－Ｐ－喹吖啶化合物修饰的ＴＦＯ定点切割ＨＩＶ基因中的靶序列，在体外实验中获得了可喜的成效。但ＴＦＯ在临床的应用还有许多问题需进一步研究。

β_2-肾上腺素能受体基因多态性与重庆汉族儿童哮喘关联的初步研究

目的 探讨β２－肾上腺素能受体（β２－ＡＲ）第１６、２７位点基因多态性与重庆汉族儿童哮喘的关联。方法 采用ＰＣＲ－限制性核酸内切酶分析法对５０例哮喘儿童缓解期β２－ＡＲ１６、２７位基因多态性进行检测，并与５０例健康儿童及５０例健康成人进行对照。结果①健康人群对照组β２－ＡＲ第１６、２７位点突变纯合子频率为０．１９、０．１２，突变等位基因频率为０．４２、０．３０。②哮喘组儿童β２－ＡＲ第１６、２７位点突变纯合子频率为０．２２、０．０８，突变等位基因频率为０．４９、０．２８，与健康人群对照组比较差异均无显著性（Ｐ＞０．０５）。③β２－ＡＲ第１６位突变纯合子及突变等位基因频率在重度组为０．６７、０．７８，分别与轻度（０．０７、０．３０）、中度（０．１２、０．５０）哮喘组比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论 β２－ＡＲ第１６、２７基因多态性与本研究范围内哮喘儿童发病无关联，但１６位点基因多态性与哮喘病情严重度相关联。

血清羟脯氨酸浓度和脯肽酶活性在判断肾纤维化病程中的意义

目的 :探讨血清羟脯氨酸浓度和脯肽酶活性在反映肾纤维化中的意义。方法 :经肾活检证实的有(纤维化组)和无(无纤维化组)肾小球硬化与肾间质纤维化的肾脏病人各10例 ,健康献血员(对照组)10例 ,测血清羟脯氨酸浓度、血清脯肽酶活性等指标。结果 :纤维化组血清羟脯氨酸浓度显著高于无纤维化组(P<0.001)和健康对照组(P<0.001) ,以此指标显著增高判断肾纤维化 ,敏感性100 % ,特异性91 % ,假阳性9 % ,与肾活检符合率95 %。纤维化组血清脯肽酶活性亦显著高于无纤维化组(P<0.05)和健康对照组(P<0.05) ,以此指标显著增高判断肾纤维化 ,敏感性80 % ,特异性100 % ,未发现假阳性 ,与肾活检符合率90 %。血清羟脯氨酸浓度与患者血清肌酐浓度、纤维化肾小球比率和病变肾小管、肾间质比率显著正相关。结论 :血清羟脯氨酸浓度和脯肽酶活性 ,可作为判断肾脏病人肾纤维化的无创性检查指标 ,尤其适用于有肾活检禁忌症的病人。

延肾胶囊延缓残肾损伤的实验研究(英文)

目的探讨延肾胶囊延缓残进行性损伤的量效关系。方法Wistar大鼠120只,随机分为6组,A组为假手术对照组;B组为5/6肾切除;C,D和E分别为5/6肾切除+低、中、高剂量延肾胶囊;F组为5/6肾切除+肾衰宁。术后A和B两组给予等容积生理盐水灌胃。定量喂养,自由饮水。于术后15,90天测定血尿素氮(BUN)、血肝酐(SCr)、血红素(Hb),肾组织光镜及其形态计量、电镜,每组每时相点观察10只大鼠。结果术后B组BUN和SCr显著高于A组,Hb显著低于A组;C,D和E组BUN和SCr也有所升高,但显著低于B组,随着延肾胶囊剂量增加,BUN和SCr逐渐降低;F组的BUN和SCr低于B组,高于E组。术后B组,光镜下可见肾小球系膜细胞增生,肾小球系膜区增宽,肾小球硬化和肾间质纤维化,术后时间越长病变越重,形态计量示硬化肾小球比率和病变肾小管肾间质比率显著高于A组,C,D和E组硬化肾小球比率和病变肾小管肾间质比率逐渐降低;F组硬化肾小球比率和病变肾上管间质比率低于B组,但高于D和F两组。电镜观察,B组术后肾小球系膜细胞增生,未见明显系膜细胞凋亡,C,D和E组可见增生的系膜细胞凋亡,A组无明显异常发现。结论延肾胶囊能显著降低血BUN,SCr,抵制残肾纤维化,延缓慢性肾衰的进程,呈剂量依赖性,其效果优于肾衰宁;

铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因的扩增与克隆

目的PCR扩增及克隆铜绿假单胞菌的弹性蛋白酶基因。方法从铜绿假单胞菌培养物中提取染色体DNA,PCR扩增弹性蛋白酶基因成熟蛋白编码区,AT克隆于pMD18T载体中,对重组质粒进行酶切与测序鉴定。结果从高GC含量的铜绿假单胞菌染色体DNA中扩增到弹性蛋白酶基因并进行了克隆与鉴定。结论本研究成功克隆到铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,为实现活性弹性蛋白酶的高效表达奠定了基础。

5/6肾切除大鼠残肾血小板源生长因子-α表达及其意义的探讨

目的：研究慢性肾衰残余肾组织血小板源生长因子－α（ＰＤＧＦ－α）的表达状况及其机理和意义。方法：采用斑点杂交和形态计量等方法，对假手术对照大鼠、５／６肾切除大鼠、以及５／６肾切除术后给予维生素Ｅ治疗的大鼠肾组织ＰＤＧＦ－αｍＲＮＡ含量及其相关指标进行定量分析。结果：①５／６肾切除大鼠残存肾组织ＰＤＧＦ－αｍＲＮＡ含量显著增高；②５／６肾切除大鼠周围血单个核细胞内游离钙浓度显著增高，细胞内游离钙浓度与ＰＤＧＦ－αｍＲＮＡ含量成正相关；③５／６肾切除大鼠残肾组织有显著的固有细胞增殖、肾小球硬化和肾间质纤维化，肾组织羟脯氨酸含量显著增高，ＰＤＧＦ－αｍＲＮＡ含量与硬化肾小球比率、病变肾小管和肾间质体密度、肾组织羟脯氨酸含量成正相关；④给予维生素Ｅ治疗的大鼠，随着细胞内游离钙浓度和ＰＤＧＦ－αｍＲＮＡ含量降低，残肾硬化肾小球比率、病变肾小管和肾间质体密度、肾组织羟脯氨酸含量显著下降。结论：ＰＤＧＦ－α高表达可能是残存肾组织进行性纤维化的重要原因之一；维生素Ｅ治疗能降低ＰＤＧＦ－α表达，抑制残肾纤维化。

SD大鼠胚胎后肾间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究

目的对SD大鼠胚胎后肾间充质细胞(MMSCs)进行分离培养,并检测其生物学特性。方法采用胚胎后肾微组织块接种培养法,检测其生长曲线和生长周期,并进行细胞表面抗原和成骨能力的鉴定。结果MMSCs体外培养生长状况良好,具有活跃的增殖能力。细胞周期显示90%以上细胞处于G0/G1期。表面抗原检测绝大多数细胞阳性表达波形蛋白(vimen-tin)和纤维连接蛋白(fibronectin),几乎不表达CD34。在体外能够向成骨细胞分化。结论原代分离、培养的细胞为MMSCs,细胞纯度高、扩增迅速、生物学性状稳定,可为组织工程提供比较理想的种子细胞。

铜绿假单胞菌LexA蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

目的克隆铜绿假单胞菌PAO1株的LexA蛋白编码区,在大肠杆菌中表达并纯化表达蛋白。方法提取铜绿假单胞菌PAO1株基因组DNA,PCR扩增LexA蛋白编码区,A-T克隆于质粒pMD 18-T载体中,阳性重组子经酶切后,回收目的片段连接至相应线性化的表达型载体pET-28a(+)中,重组质粒经测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21感受态,筛选高效表达株,表达产物经SDS-PAGE初步鉴定后,用镍珠吸附一步法纯化,表达蛋白转印PVDF膜后,经N-端测序证实。结果本研究成功克隆到PAO1株的LexA蛋白编码区并在大肠杆菌中获得表达,纯化表达蛋白经N-端测序证实确为PAO1的LexA蛋白。结论研究结果为铜绿假单胞菌PAO1株基因组中SOS盒的实验鉴定及LexA蛋白调控基因的筛选奠定了基础。

100例重庆市汉族儿童哮喘α_1-抗糜蛋白酶基因突变初探

目的 :了解儿童哮喘α1 抗糜蛋白酶(α1 antichymotrypsin,α1 ACT)基因点突变情况。方法 :应用聚合酶链反应(PCR)和限制性酶切图谱分析技术 ,对100例重庆市汉族儿童哮喘α1 ACT基因外显子(exon)Ⅱ和Ⅲ进行检测。结果 :所有研究对象均未发现Bonn 1及Bochum 1变异体。结论 :Bonn 1和Bochum 1变异体与100例重庆市汉族儿童哮喘发病无平行关系。