目的探讨小剂量三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)联合3’-叠氮-3’-脱氧胸腺嘧啶核苷(3’-azido-3’-deoxythymidine,AZT)对人肝癌HepG2细胞自噬的影响及其可能存在的作用机制,为肝癌的治疗提供新思路。方法分别用As_2O_3(2μmol/L...目的探讨小剂量三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)联合3’-叠氮-3’-脱氧胸腺嘧啶核苷(3’-azido-3’-deoxythymidine,AZT)对人肝癌HepG2细胞自噬的影响及其可能存在的作用机制,为肝癌的治疗提供新思路。方法分别用As_2O_3(2μmol/L)、AZT(20μmol/L)及两药联合处理人肝癌HepG2细胞,同时以未经任何药物处理的HepG2细胞作为空白对照组。药物作用24 h后,吖定橙染色法观察各组人肝癌HepG2细胞中酸性囊泡和自噬溶酶体的堆积情况;荧光定量PCR法检测各组人肝癌HepG2细胞的Beclin1、lc3和p62 m RNA的表达;蛋白质印迹法检测各组人肝癌HepG2细胞Beclin1、lc3Ⅱ、lc3Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白的表达。结果吖啶橙染色法显示:联合用药组酸性囊泡和自噬溶酶体的堆积多于对照组及各单药组(P<0.01);荧光定量PCR法显示:联合用药组HepG2细胞的Beclin1、lc3 m RNA表达明显高于对照组及各单药组(P<0.01),p62 m RNA表达低于对照组及各单药组(P<0.01);蛋白质印迹法检测结果显示联合用药组HepG2细胞的Beclin1、lc3Ⅱ、lc3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量高于对照组及各单药组(P<0.01),p62蛋白表达低于对照组及各单药组(P<0.01)。结论 As_2O_3联合AZT促进人肝癌HepG2细胞自噬的作用明显强于各单药组,可能与两药联合导致Beclin1的表达上调有关。展开更多
文摘目的探讨小剂量三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)联合3’-叠氮-3’-脱氧胸腺嘧啶核苷(3’-azido-3’-deoxythymidine,AZT)对人肝癌HepG2细胞自噬的影响及其可能存在的作用机制,为肝癌的治疗提供新思路。方法分别用As_2O_3(2μmol/L)、AZT(20μmol/L)及两药联合处理人肝癌HepG2细胞,同时以未经任何药物处理的HepG2细胞作为空白对照组。药物作用24 h后,吖定橙染色法观察各组人肝癌HepG2细胞中酸性囊泡和自噬溶酶体的堆积情况;荧光定量PCR法检测各组人肝癌HepG2细胞的Beclin1、lc3和p62 m RNA的表达;蛋白质印迹法检测各组人肝癌HepG2细胞Beclin1、lc3Ⅱ、lc3Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白的表达。结果吖啶橙染色法显示:联合用药组酸性囊泡和自噬溶酶体的堆积多于对照组及各单药组(P<0.01);荧光定量PCR法显示:联合用药组HepG2细胞的Beclin1、lc3 m RNA表达明显高于对照组及各单药组(P<0.01),p62 m RNA表达低于对照组及各单药组(P<0.01);蛋白质印迹法检测结果显示联合用药组HepG2细胞的Beclin1、lc3Ⅱ、lc3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量高于对照组及各单药组(P<0.01),p62蛋白表达低于对照组及各单药组(P<0.01)。结论 As_2O_3联合AZT促进人肝癌HepG2细胞自噬的作用明显强于各单药组,可能与两药联合导致Beclin1的表达上调有关。