除虫菊愈伤组织和发状根中除虫菊酯杀虫活性测定

以除虫菊作为材料探讨除虫菊愈伤组织和发状根中除虫菊酯的杀虫活性,为利用细胞工程生产除虫菊酯提供理论依据。以除虫菊的茎和叶作为外植体诱导愈伤组织和发状根,用丙酮浸提愈伤组织和发状根中的除虫菊酯,然后以粘虫作为测试对象采用浸虫和浸叶2种方式测定除虫菊酯的杀虫活性。结果表明:除虫菊愈伤组织和发状根中的除虫菊酯有杀虫活性,其对粘虫的拒食作用强于触杀作用,且发状根中除虫菊酯的杀虫活性优于愈伤组织,以浸虫方式处理的除虫菊酯杀虫活性更高。本文为未来利用细胞工程方式工业化生产除虫菊酯开拓了新途径。

刺萆薢石油醚部化学成分研究

目的:研究刺萆薢根茎石油醚部化学成分。方法:运用色谱法进行分离纯化,利用理化性质和波普技术鉴定化合物结构。结果:从刺萆薢根茎石油醚萃取物中分离得到7个化合物,分别为β-谷甾醇(1),24-乙基-4-胆甾烯-3,6-二酮(2),多花二醌C(3),胡萝卜苷(4),原儿茶酸甲酯(5),O-对香豆酰基甘油酯(6),丁香酸(7)。结论:化合物1~7均为首次从该植物中分离得到。

除虫菊愈伤组织诱导及叶的解剖结构研究

本试验分别以除虫菊3个生长阶段的花蕾作为外植体,采用MS+1.0ml/L 2.4-D+0.5 ml/L KT+30.0g/L蔗糖培养基诱导除虫菊愈伤组织,结果发现,以半开放阶段的花蕾诱导愈伤组织,诱导率最高,超过50%,而以未开放阶段的花蕾诱导愈伤组织,其诱导率在30%左右,接近全开放阶段的花蕾其诱导率低于5%;同时采用常规石蜡切片法对除虫菊的愈伤组织进行解剖观察,观察到愈伤组织中有大量胚性细胞、非胚性细胞、管状分子、厚壁细胞等,其中胚性细胞明显区别于非胚性细胞,除虫菊愈伤组织体细胞胚为单细胞起源,在愈伤组织内部和愈伤组织表层都能发生。

2-{[4-(3,5-二甲基异唑-4-基)-2,6-二氟苯基]氨基}苯甲酸乙酯的合成及晶体结构

报道2-{[4-(3,5-二甲基异唑-4-基)-2,6-二氟苯基]氨基}苯甲酸乙酯(化合物1)的合成及晶体结构。在三乙胺碱性条件下,2-{[4-(2,4-二氧戊烷-3-基)-2,6-二氟苯基]氨基}苯甲酸乙酯(化合物2)与盐酸羟胺反应得到目标化合物1。考察并确定适宜的反应条件为:当反应溶剂为乙醇、物料比为n(盐酸羟胺):n(化合物2)=1.4:1、回流反应6h,产物化合物1的收率达到58.5%(以化合物2计)。通过质谱及XRD单晶衍射对产物结构进行表征。

2-{[2,6-二氯-4-(3,5-二甲基异唑-4-基)苯基]氨基}苯甲酸的合成及晶体结构

报道了2-{[2,6-二氯-4-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基]氨基}苯甲酸(化合物1)的合成及晶体结构。在氢氧化钠碱性条件下,苯甲酸乙酯衍生物(化合物2)经酯水解反应得到化合物1。考察并确定水解反应的适宜条件为:在反应溶剂为四氢呋喃与水的混合物(体积比为3∶1)、反应温度为40℃、反应时间为2h的条件下,化合物1的收率达到92.6%。通过XRD单晶衍射对产物结构进行表征。

Ca^(2+)对丹参培养细胞中迷迭香酸合成及其相关酶活性的影响

探究了外界Ca2+(0~50 mmol/L)对丹参培养细胞迷迭香酸合成及其相关酶活性的影响,并利用细胞膜钙离子通道抑制剂异搏定(Verpamil,VP)及钙离子载体A23187初步探讨了外界Ca2+浓度变化影响丹参培养细胞次生代谢的机制。结果显示:培养6 d时的丹参细胞中迷迭香酸积累量与外界Ca2+浓度显著相关,其中10 mmol/L Ca2+最有利于迷迭香酸的合成,迷迭香酸最大积累量达20.149 mg/g DW,比1 mmol/L和3 mmol/LCa2+处理分别高37.3%和20.4%。分析迷迭香酸合成的两条支路上的关键酶PAL和TAT活性变化发现,两种酶活性亦受外界Ca2+浓度影响,且活性变化先于迷迭香酸的积累,说明这两种酶均参与迷迭香酸的生物合成,但PAL比TAT促进作用更明显。进一步用VP和A23187处理发现,外界Ca2+影响迷迭香酸的合成是通过影响胞内Ca2+浓度实现的,胞外Ca2+内流可能参与了这一过程。

茉莉酸甲酯对丹参培养细胞中迷迭香酸生物合成及相关酶活性的影响

茉莉酸甲酯是植物细胞响应外界刺激产生的重要信号分子,与植物次生代谢物的生物合成有关。本研究考察了茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)对丹参培养细胞中迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)生物合成的影响。结果显示,10μmol·L-1的MeJA诱导24 h后可显著提高丹参愈伤细胞中RA的积累量及其相关酶(PAL、TAT)的活性,在48 h时RA积累量和酶活性达到最大。布洛芬(IBU)处理可抑制MeJA对RA积累量和相关酶活性的促进作用,外源施加MeJA可部分解除IBU对RA合成及其相关酶活性的抑制作用。说明MeJA可以显著促进丹参培养细胞中RA的生物合成,IBU抑制了MeJA合成、PAL和TAT活性,从而导致了RA合成受阻。

胞内、外Ca^(2+)在水杨酸诱导丹参幼苗迷迭香酸生物合成过程中的作用

目的:为探讨胞内、外钙离子是否在水杨酸诱导丹参迷迭香酸生物合成中起作用。方法:以生长50 d的丹参幼苗为材料,通过喷施水杨酸诱导迷迭香酸合成量增加,再利用胞外钙通道抑制剂verapamil(Vp)和LaCl3、胞内钙调素拮抗剂trifluoperazine(TFP)和胞内钙通道上IP3受体抑制剂LiCl处理,分别考察水杨酸、钙离子通道抑制剂/钙调素拮抗剂处理后迷迭香酸的合成量及其合成相关酶(PAL,TAT)的活性变化。结果:2.0 mmol·L-1的水杨酸处理24 h后可诱导迷迭香酸合成量升高到(40.51±2.16)mg·g-1,是对照的1.97倍,迷迭香酸合成相关酶PAL活性升高到对照的1.42倍,TAT活性升高到对照的1.29倍;Vp,LaCl3,TFP,LiCl处理均抑制了水杨酸诱导的PAL,TAT活性的升高,从而导致了迷迭香酸合成量降低。结论:水杨酸诱导丹参迷迭香酸生物合成过程中,胞内、外钙离子发挥着重要的信号转导作用。

Ca^(2+)对水杨酸诱发的丹参幼苗丹酚酸B生物合成的影响

为研究Ca2+在水杨酸诱导丹参幼苗丹酚酸B生物合成过程中的作用,分别用激光共聚焦显微镜和高效液相色谱仪检测胞外Ca2+通道抑制剂Vp和LaCl3,胞内Ca2+通道抑制剂LiCl以及胞内钙调素拮抗剂TFP处理前、后水杨酸诱导丹参叶片保卫细胞内Ca2+荧光强度和丹酚酸B含量的变化。结果表明,水杨酸(SA)处理后6 min即可诱发丹参幼苗叶片保卫细胞内Ca2+迸发,持续时间为2~3 min,丹参幼苗丹酚酸B生物合成量亦显著增加,且丹酚酸B合成量的增加发生在Ca2+迸发之后。胞外Ca2+通道抑制剂、胞内Ca2+通道抑制剂以及胞内钙调素拮抗剂均可抑制水杨酸诱导的Ca2+迸发和丹酚酸B的生物合成。结果表明水杨酸诱发的Ca2+对丹参幼苗丹酚酸B生物合成具有重要的调控作用。