可溶性鸟苷酸环化酶在心力衰竭治疗中的机制及临床应用进展

心力衰竭已成为严重威胁人类健康的难治性疾病。在心力衰竭发生过程中,氧化应激可引发一氧化氮(NO)-可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)-环鸟苷酸(cGMP)通路受损,导致血管功能失调、心室纤维化、肥大等心脏不良反应发生,进而导致心脏功能障碍。因此,NO-sGC-cGMP通路可作为心力衰竭的重要治疗靶点。刺激sGC可通过直接或间接提高cGMP水平保护心脏功能。维利西呱是sGC刺激剂,可促进cGMP产生,改善心肌和血管功能,达到治疗心力衰竭的目的。深入研究sGC在心力衰竭治疗中的机制,可以为疾病的治疗提供新思路。

聚乙烯亚胺修饰的白蛋白微泡转染CHO细胞实验研究

目的:制作非病毒基因转移载体,提高白蛋白微泡转基因效率。方法:采用人体白蛋白、聚乙烯亚胺(PEI)和葡萄糖按一定的质量比混合后用超声振动仪声振20s制得PEI修饰的白蛋白微泡(PAMB),通过流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞比率以比较PEI、PEI+白蛋白、PAMB和Lipofectamine2000的基因转移效率。结果:单纯PEI组、白蛋白+PEI组、PAMB组和Lipofectamine2000组的平均转基因效率分别为(13.75±4.88)%、(5.20±1.15)%、(49.17±6.75)%和(53.72±5.69)%。PAMB组明显高于单纯PEI组,而与商品化Lipofectamine2000组没有统计学差异。结论:经PEI修饰后的白蛋白微泡转基因效率明显提高,是一种有效的体外基因转移载体,本研究也可能为在体基因转移提供新的方法。

四维超声定量技术评价不同分级肝硬化患者左房容积和功能的特征

目的探讨四维超声定量技术评价不同程度肝硬化患者左房容积和应变功能变化的价值。方法纳入肝硬化患者60例,按照Child-Pugh分级分为Child-Pugh A组26例、Child-Pugh B组19例和Child-Pugh C组15例,对照组为60例同期健康体检者。应用四维超声左房定量技术(4D LAQ)检测,获得左房最大容积(LAV_(max))、左房最小容积(LAV_(min))及左房收缩前容积(LAV_(preA)),计算出左房每搏量(LAEV)和左房整体射血分数(LAEF);获取左室收缩期、舒张早期和舒张晚期的左房心肌纵向应变(LASr、LAScd和LASct)和圆周峰值应变参数(LASr_c、LAScd_c和LASct_c);同时测量常规超声参数:左房内径(LAD)、左室舒张末期内径(LVEDD)和左室射血分数(LVEF)等。结果与对照组相比,肝硬化各组的左房四维容积参数LAV_(max)、LAV_(min)、LAV_(preA)及LAEV均显著升高(P<0.01)。肝硬化Child-Pugh A组患者的LASr、LASct、LASr_c和LASct_c的绝对值较对照组增大(P<0.01),LAScd和LAScd_c的绝对值与对照组差异无统计学意义。Child-Pugh B和Child-Pugh C组患者LASr、LASct、LASr_c和LASct_c的绝对值均较Child-Pugh A组下降,LAScd和LAScd_c的绝对值较对照组降低(P<0.05)。相关分析显示LAV_(max)、LAV_(min)和LAV_(preA)与肝硬化分级均呈正相关(rs分别为0.383、0.325、0.302,P<0.05),LASr、LAScd、LASct、LASr_c、LAScd_c和LASct_c的绝对值与肝硬化的分级均呈负相关(rs分别为-0.387、-0.463、-0.623、-0.365、-0.456、-0.467,P<0.01)。结论四维超声左心房定量技术可敏感评价左房的结构和功能变化,为肝硬化心肌病患者早期诊断、治疗干预和疗效评价提供可靠的证据。

不同浓度二十二碳六烯酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制

目的:探讨不同浓度二十二碳六烯酸(DHA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法:酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞。采用全细胞膜片钳实验技术记录在未孵育与孵育细胞色素P450环氧化酶抑制剂SKF525A并灌流不同浓度DHA条件下BK通道电流密度变化;采用单通道膜片钳实验技术记录灌流不同浓度DHA时BK单通道开放概率的变化。结果:0.01~1.00μmol/L(定义为低浓度)DHA激活BK通道的半效浓度(EC50)为(0.24±0.05)μmol/L,但经SKF525A孵育后激活作用消失;3.00~10.00μmol/L(定义为高浓度)DHA激活BK通道的EC50为(2.38±0.22)μmol/L,经SKF525A孵育后,激活作用仍存在,且EC50无明显变化。在电极外液钙离子浓度为1μmol/L和刺激电位60 m V条件下,DHA浓度为0、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00μmol/L时,BK通道开放概率分别为(0.095 2±0.009 5)、(0.093 9±0.012 6)、(0.098 6±0.016 9)、(0.099 5±0.014 7)、(0.097 5±0.010 4)和(0.102 3±0.020 6)(P>0.05,n=5),提示低浓度DHA不能激活BK单通道;继续增加DHA浓度,当浓度为3、10μmol/L时,BK单通道开放概率分别为(0.700 3±0.013 2)和(0.892 7±0.052 3)(P<0.05,n=5),提示高浓度DHA呈浓度依赖性激活BK单通道,EC50为(3.37±0.10)μmol/L。结论:不同浓度DHA激活BK通道的机制不同,低浓度DHA通过细胞色素P450环氧化酶途径激活BK通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合后直接激活。

血红素加氧酶1分子克隆及表达载体的构建

背景:近年来许多研究发现血红素加氧酶1具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用,并且在心肌缺血-再灌注损伤等应激反应中有重要的保护作用,从而成为研究热点。目的:克隆大鼠血红素加氧酶1全长基因,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建血红素加氧酶1的真核表达载体。设计、时间及地点:实验于2008-03/06在苏州大学生物技术研究所完成。材料:成年雄性SD大鼠,由苏州大学动物实验中心提供,用于脾脏细胞总RNA的提取;克隆载体PMD18-T购自Takara公司;表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学生物技术研究所保存。方法:分离大鼠脾脏获取脾脏细胞,Trizol法提取脾脏细胞的总RNA,经反转录-聚合酶链反应扩增获得血红素加氧酶1基因,将扩增出来的产物与克隆载体PMD18-T连接,转化TOP10感受态细菌,挑取阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序确证。测序正确后抽提质粒作为模板进行PCR,Sal-Ⅰ和BamH-Ⅰ同时双酶切PCR产物和载体PIRES2-EGFP,再在T4DNA连接酶的作用下进行连接,构建其真核表达载体。主要观察指标:血红素加氧酶1基因的克隆和DNA测序结果证实序列是否正确;PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1真核表达载体的构建以及测序证实目的基因成功插入载体。结果:①实验完成了大鼠血红素加氧酶1基因的克隆,所获得的序列与GeneBank中收录的大鼠血红素加氧酶1序列完全一致。②构建真核表达载体PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1,测序正确说明血红素加氧酶1基因成功插入表达载体PIRES2-EGFP中。结论:实验成功克隆了大鼠血红素加氧酶1基因全长,并构建了其真核表达载体。

炎症小体在心力衰竭发生发展中的作用及表观遗传学调控机制研究进展

心力衰竭(心衰)是各种原因导致心脏泵血功能受损,心排血量不能满足全身组织基本代谢需要的综合征。导致心衰发生的因素较多,大量研究表明炎症小体的异常激活参与心衰的发生发展。DNA甲基化、组蛋白翻译后修饰和非编码RNA对炎症小体的表观调控在心衰的发生发展中起重要作用。对于炎症小体及其表观调控的探讨不仅可开拓心衰发病机制研究的新方向,而且可能为心衰的治疗提供新的潜在靶点。本文主要综述炎症小体在心衰发生发展中的作用及其表观遗传学调控机制。

冷冻球囊消融治疗房颤的有效性、安全性及复发因素分析

目的探讨冷冻球囊消融治疗房颤的有效性、安全性和复发的危险因素。方法将114例房颤患者分为阵发性房颤组(n=61)和持续性房颤组(n=53)。所有患者均行环肺静脉冷冻球囊消融术,对持续性房颤患者额外行前庭区域扩大冷冻消融。分析两组手术操作时间、X线曝光时间、环肺静脉冷冻消融的即刻和长期成功率以及手术相关并发症。比较两组患者术后一年内房颤复发率及相关复发因素。结果两组肺静脉隔离即刻成功率均为100%。两组手术操作时间、X线曝光时间和术中肝素用量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组均未出现严重并发症。随访12个月,阵发性房颤组和持续性房颤组房颤消融成功率分别为85.25%和81.13%(P=0.62)。房颤持续时间和左心房内径与持续性房颤的复发相关。结论冷冻球囊消融对阵发性和持续性房颤均有较高的有效性和安全性,消融前房颤持续时间和左心房内径是持续性房颤患者术后复发的独立危险因素。

致心律失常性右室心肌病患者猝死的预防:植入型心律转复除颤器还是导管消融?

致心律失常性右室心肌病(arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy,ARVC)是一种正常心肌被脂肪和(或)纤维组织替代的遗传性心肌病,病变主要局限于右心室,也会累及左心室,临床表现为心力衰竭、室性心动过速及猝死。目前对ARVC的治疗主要包括运动限制、抗心律失常药物、安装植入型心律转复除颤器(implantable cardioverter-defibrillator,ICD)和导管消融。本文主要综述ICD和导管消融在治疗ARVC及预防ARVC患者猝死方面的最新研究进展。

右上肺静脉起源房性心动过速致心律失常性心肌病一例

局灶性房性心动过速的起源点主要位于心房内的一些特殊解剖部位。本文报道一例起源于右上肺静脉房性心动过速致心律失常性心肌病患者的临床表现、体表心电图、腔内电生理检查及导管消融治疗情况。

rs2200733多态性对心房颤动射频消融术后复发的预测价值

目的经导管射频消融术治疗心房颤动(AF)的复发率相对偏高。文中探索rs2200733多态性对AF射频消融术后复发的预测价值。方法纳入2015年7月至2016年9月南京医科大学附属无锡人民医院行磁导航指导下AF射频消融术患者53例,收集患者基线资料,所有患者均进行rs2200733基因分型并随访症状、并发症、心电图及动态心电图。采用Cox生存分析法确定影响AF射频消融术后复发的独立预测因子,并分别计算其预测术后12和24个月复发的敏感性、特异性等。结果本组患者均为汉族,平均随访(21.6±9.5)个月。其中25例(47.2%)复发,平均复发时间为术后(6.6±5.3)个月。Kaplan-Meier生存分析显示在加性和隐性模型中,rs2200733基因型可影响AF复发(P<0.01)。多因素COX生存分析显示,rs2200733基因型(隐性模型)是AF射频消融术后复发的独立预测因子(OR=3.184,95%CI:1.378~7.357,P=0.007)。rs2200733TT预测术后12个月内AF复发的敏感性、特异性、阳性预测价值、阴性预测价值和准确性分别为64%、81%、70%、76%和74%;预测术后24个月内AF复发的敏感性、特异性、阳性预测价值、阴性预测价值和准确性分别为60%、82%、75%、70%和72%。结论rs2200733基因型是AF射频消融术后复发的一个独立预测因子。其高特异性提示rs2200733基因型可考虑作为汉族人群AF射频消融术适应症的一个筛选工具。

13,14-环氧化二十二碳六烯酸舒张冠状动脉作用机制

目的二十二碳六烯酸对心血管系统的保护机制尚未完全阐明,文中探讨其代谢产物13,14环氧化二十二碳六烯酸(13,14-EpDPE)对正常大鼠冠状动脉的舒张作用机制。方法酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,采用单通道膜片钳技术研究不同浓度(分别为0、1、10、100 pmol/L)13,14-EpDPE对冠状动脉平滑肌细胞BK通道开放概率的影响,采用全细胞膜片钳技术研究13,14-EpDPE对冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度的影响。采用血管张力测定检测BK通道特异性阻滞剂蝎毒素预孵育与未孵育时(即预孵育和未孵育组),不同浓度13,14-EpDPE对正常大鼠冠状动脉的舒张作用。结果在电极外液钙离子浓度为1μmol/L,刺激电位60 mV条件下,在0、1、10和100 pmol/L 13,14-EpDPE灌流后,正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NPo分别为0.25±0.03、0.34±0.03、0.44±0.06和0.85±0.16,其中100pmol/L 13,14-EpDPE灌流时较0、1、10 pmol/L差异有统计学差异(P<0.05)。BK通道被13,14-EpDPE浓度依赖性激活,其半效浓度EC50为(15.94±1.21)pmol/L。在维持电位-60mV和测试电位+100mV下,10pmol/L 13,14-EpDPE灌流前、灌流后的BK通道电流密度分别为(58.27±16.35)pA/p F和(95.94±23.00)pA/p F,差异有统计学意义(P<0.05)。使用内皮素收缩血管后,10-12、10-11、10-10、10-9、10-8和10-7mol/L的13,14-EpDPE对IBTX未孵育组及预孵育组大鼠冠状动脉的舒张百分率均依次增加,且相同浓度13,14-EpDPE作用下,IBTX预孵育组较未孵育组大鼠冠状动脉舒张百分率均降低(P<0.01)。结论 13,14-EpDPE可通过激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道,从而舒张冠状动脉,这可能是13,14-EpDPE对心血管系统具有保护作用的机制之一。

不同浓度胎牛血清对原代心肌成纤维细胞增殖及分化的影响

目的:探讨不同浓度胎牛血清体外培养对原代心肌成纤维细胞增殖和分化的影响。方法:用酶消及差速贴壁法分离并培养SD乳鼠心肌成纤维细胞;采用不同浓度胎牛血清(1%、5%、10%和20%)培养心肌成纤维细胞并观察细胞形态,免疫荧光共聚焦法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达,划痕实验检测心肌成纤维细胞的迁移能力,CCK8实验检测心肌成纤维细胞的增殖能力。结果:随着胎牛血清浓度升高,细胞形态逐渐变圆,细胞表面积增加,α-SMA阳性细胞比例增加,心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞分化增多,细胞迁移能力增加。高浓度胎牛血清(20%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最旺盛,低浓度胎牛血清(1%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最低,5%和10%胎牛血清培养时心肌成纤维细胞增殖均旺盛。结论:高浓度胎牛血清培养会导致心肌成纤维细胞分化,5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较10%和20%胎牛血清培养分化程度少,增殖能力较1%胎牛血清好,选用5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较好。

磁导航指导下持续性心房颤动导管消融术后复发因素的分析

目的探讨磁导航指导下持续性心房颤动(房颤)导管消融患者术后复发的危险因素。方法在磁导航指导下,对49例持续性房颤患者行双侧肺静脉前庭电隔离+左心房顶部和二尖瓣峡部线性消融术。术后随访一年,分为房颤复发组(n=21)和房颤未复发组(n=28),比较两组患者手术操作时间、建模时间、肺静脉隔离时间、X线暴露时间、肺静脉前庭隔离急性成功率、手术相关并发症发生率及49例患者术后1个月、3个月、6个月和12个月的房颤复发率。结果 49例患者均成功实施左心房建模、标测和消融;复发组和未复发组手术操作时间、建模时间、肺静脉隔离时间、消融时间、X线暴露时间和肺静脉前庭隔离急性成功率差异均无统计学意义(P>0.05)。两组患者均未发生肺静脉狭窄、心脏穿孔、心包填塞和猝死等严重并发症。随访一年,持续性房颤消融成功率为57.1%;Cox回归分析提示术前房颤发作时间及合并冠心病与术后房颤复发有关。结论磁导航指导下持续性房颤导管消融具有较高的有效性和较好的安全性。术前房颤持续时间及合并冠心病是术后持续性房颤复发的独立危险因素。

基于心电图的机器学习在心血管疾病预测中的应用进展

心电图是心电记录仪从体表记录的心脏电信号,是诊断心血管疾病的一种重要工具。作为人工智能的一个重要分支,机器学习可以从大型心电图数据集中获取信息特征,从而对心电图做出精确的分类诊断和释义,诊断效能甚至可达医学专家水平,已在临床得到广泛应用。近年来研究发现,机器学习还可以有效提取心电图中人眼不能识别的特征,从而对未明确的心血管疾病进行预测,如左心室收缩功能不全、无症状性房颤和阵发性室上性心动过速等。作为机器学习的一种重要算法,以卷积神经网络为代表的深度学习能使疾病预测更加准确。本文主要综述基于心电图的机器学习在心血管疾病预测中的应用进展。

自噬在糖尿病心肌病发生中的作用

高血糖和胰岛素抵抗或缺乏是糖尿病的特征,糖尿病伴随着能量代谢紊乱,而成人心脏收缩和舒张所需的能量主要由线粒体产生,糖尿病心肌病的心肌细胞线粒体受损,伴随着心肌细胞肥大、纤维化和凋亡,自噬尤其是具有高度特异性的线粒体自噬通过清除异常线粒体,在控制线粒体功能中起关键作用。尽管目前线粒体自噬在糖尿病心肌病进展中的作用尚未明确,但其在不同类型糖尿病心肌中的效果不同。因此,了解线粒体自噬在糖尿病心肌中的作用对于糖尿病心肌病预后、糖尿病住院患者临床管理以及潜在治疗方案均有重要意义。

脂联素对冠状动脉的保护作用及其机制研究进展

冠心病是最常见的心血管疾病之一,严重危害人类健康。其发生与冠状动脉粥样硬化有关,涉及多种病理事件。针对其病理过程,寻找有效治疗靶点,可以达到改善动脉硬化的目的。脂联素是脂肪组织分泌的脂肪因子,具有抗炎、抗氧化应激和改善代谢的作用。脂联素对多种心血管疾病均有治疗作用,其中与冠心病最为密切,其通过改善脂质代谢、保护血管内皮细胞、抑制泡沫细胞形成和血管平滑肌细胞增殖等途径发挥对冠状动脉的保护作用。进一步探索脂联素治疗心血管疾病的作用机制,寻找增加血清脂联素水平的方法,可为冠心病的治疗提供新思路。

右侧房间隔局灶房性心动过速诱发并维持心房颤动1例

本文报道1例较少见的右侧房间隔卵圆窝附近起源的局灶房速诱发并维持持续房颤,经磁导航系统导管射频消融成功,术后无复发。

心房颤动冷冻球囊消融与磁导航指导下消融放射暴露对比研究

目的对比分析心房颤动(房颤)冷冻球囊(CRYO)消融术与磁导航(RMN)指导下房颤消融术两种消融方式,探讨房颤消融术中减少放射暴露的方法。方法回顾性分析本院144例冷冻消融患者(CRYO组)和121例磁导航指导下房颤消融患者(RMN组)术中在线随机参考点累积皮肤表面入射剂量(CD)和X射线照射时间,分析不同类型患者辐射剂量及手术效果之间的差异。结果与RMN组相比,CRYO组患者的手术时间明显缩短[(165.0±23.6)、(97.8±18.4)min,t=26.05,P<0.001],但X射线暴露时间明显延长[(8.1±3.1)、(23.4±6.2)min,t=-24.57,P<0.001]、CD值明显增加[(232.3±130.7)、(669.0±387.5)mGy,Z=-12.29,P<0.001]。随访两组患者总体维持窦性心律比例未见明显差异(71.9%、75.7%,P=0.618)。多元回归分析提示,肥胖患者、非阵发性房颤患者、肺静脉存在变异患者与CRYO组患者CD值增加有关(t=5.47、2.23、3.39,P<0.05),且CRYO组上述3类患者X射线暴露时间也增加(t=2.87、3.86、3.25,P<0.05)。但RMN组中仅有肥胖患者CD值增加(Z=-4.15,P<0.001),且X射线暴露时间不增加。CRYO组和RMN组上述3类患者对比在随访期间维持窦性心律方面未见明显差异(P>0.05)。结论与RMN房颤消融术相比,CRYO消融术放射暴露明显增加,但手术时间减少,其中肥胖患者、非阵发性房颤患者和肺静脉变异的患者放射暴露量更多,对于这类患者改用RMN消融可在不影响手术效果的同时减少放射暴露。

超声介导不同种类微泡破裂对基因转移的影响

基因治疗目前在治疗基因缺陷疾病、肿瘤、炎症以及其他临床疾病方面显示出巨大潜力，但作为一种有效的方法，其成功与否很大程度上取决于它所使用的载体是否能以最小的毒性、有效地、选择性地将靶基因转移到靶细胞或靶组织。虽然病毒载体具有转染率高、能稳定持久地表达所携带的外源目的基因等优点，但病毒的免疫原性和潜在致突变性限制了其安全使用。

正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道的组成及二十二碳六烯酸的激活作用

目的探讨正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道的组成及二十二碳六烯酸（DHA）的激活作用。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞，以全细胞膜片钳技术记录灌流不同钾离子通道阻滞剂后钾离子通道电流的变化，以及DHA灌流后钾离子通道电流变化。结果未加阻滞剂时，5μmol／LDHA灌流后钾离子通道电流明显增加，在刺激电压为100mV时，DHA灌流前后的电流密度分别为（52．80±6．68）和（110．09±13．39）pA／pF（P〈0．05）。在非特异性钾离子通道阻滞剂四乙胺10mmol／L作用下，DHA灌流不能激活钾离子通道。与未灌流时基础状态比较，在大电导钙激活钾离子通道特异性阻滞剂ibritoxin100nmol／L、中电导钙激活钾离子通道阻滞剂TRAM-34200nmol／L、小电导钙激活钾离子通道阻滞剂apamin1μmol／L、电压依赖性钾离子通道阻滞剂4-aminopyridine5mmol／L和ATP依赖性钾离子通道阻滞剂glyburide10μmlol／L作用下，钾离子通道电流密度分别减少47．6％、12．4％、13．6％、41．5％和0．1％，再同时灌流DHA后钾离子通道电流密度分别增加32．4％、124．2％、108．5％、149．5％和144．7％。结论大电导钙激活钾离子通道与电压依赖性钾离子通道为正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞上分布的主要的钾离子通道。DHA可激活冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道，其中主要为大电导钙激活钾离子通道，这可能是DHA扩张冠状动脉、保护心血管系统的机制之一。