t-PAIC单克隆抗体制备及磁微粒化学发光免疫检测

以组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂复合物(t-PAIC)为免疫原制备和筛选了一对特异性单克隆抗体,并建立了一种检测人体血浆t-PAIC的磁微粒化学发光免疫检测方法。通过与参比方法比对,选定了反应速度更快的一步法作为反应模式,然后对t-PAIC检测方法的检测性能进行了评估。结果显示:该方法的空白限为0.43 ng/mL,检出限为0.91 ng/mL;线性范围为0.91~100ng/mL;重复性CV小于4%,精密度CV小于3%;样本回收率在100%~110%之间;常见干扰物对检测结果无明显影响。构建了t-PAIC检测方法的参考区间,健康成年男性参考范围为1.85~15.91 ng/mL,健康成年女性参考范围为1.90~9.43 ng/mL。t-PAIC检测方法反应快速,在血栓疾病诊断中有重要的应用价值。

农杆菌介导的浸花法（Floral—dip）存在的问题及对策

随着植物基因工程研究技术的不断深入，绝大多数具有重要经济意义的农作物品种的遗传转化方法都已建立。1998年Bechtold最早采用真空渗透法将农杆菌菌液转化拟南芥即将开花的植株，得到大量T—DNA插入突变植株，该法将早期植物花穗浸入含农杆菌菌液的液体培养基，真空处理后恢复常压，使农杆菌菌液渗入到植物组织内部从而达到遗传转化的目的。

泛素连接酶Smurf1促进PDK1的多聚泛素化修饰

目的探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)发生多聚泛素化修饰的机制。方法免疫共沉淀(COIP)和免疫印迹(WB)分析PDK1的多聚泛素化修饰,MEF细胞内印证泛素连接酶Smad泛素化修饰调节因子1(Smurf1)增强PDK1多聚泛素化修饰,定点突变和CO-IP及WB确定PDK1多聚泛素化修饰位点。结果 PDK1可发生多聚泛素化修饰,泛素连接酶Smurf1增强PDK1多聚泛素化修饰,且依赖HECT类泛素连接酶Smurf1 K699位点活性;K304是PDK1多聚泛素化修饰位点。结论泛素连接酶Smurf1增强PDK1的多聚泛素化修饰。