黑斑蛙(Rana nigromaculata)不同组织器官和不同发育时期同工酶的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶平板电泳 (PAGE) ,对黑斑蛙的五种不同组织器官和五种不同发育时期的个体进行了酯酶 (α—EST)和过氧化物酶 (PO)同工酶的差异比较研究 .结果显示 ,不同组织器官中两种同工酶均存在明显的区别 ;不同发育期的α—EST同工酶也存在质的差异 .从蝌蚪到幼蛙的发育中 ,α—EST同工酶谱逐渐增加 ,但从幼蛙发育到成体蛙 ,α—EST同工酶谱却出现了减少现象 .不同发育时期的个体Rf为 0 .2 3的α—EST酶谱皆得以表达 .

酸铝对大麦不同耐性品种形态、生长及元素吸收的影响

通过对耐酸铝性不同的两个大麦品种 (嵊县无芒六棱、浙皮二号 )进行耐酸铝性鉴定表明 ,两品种的苗高、根长及干重受到的影响均存在显著性差异 (P <0 .0 1) .经酸铝培养液处理后 ,敏感品种“嵊县无芒六棱”体内铝元素含量显著增加 (P <0 .0 1) ,而营养元素 (P ,Ca ,K ,Na ,Fe等 )

神经醇磷脂的生物学功能和细胞病理

神经醇磷脂广泛存在于所有真核生物细胞中，包括神经鞘髓磷脂、酰基鞘氨醇、脑苷类和神经节甙脂等．神经醇磷脂参与重要的细胞生理活动，神经元的生长、细胞的通透性、细胞的调控等都与神经醇磷脂有关；另外，神经醇磷脂的异常还会导致一些疾病，如高歇氏病、疟疾、细胞的恶性生长等．

玉米单染色体的分离和体外扩增

建立了玉米单染色体的分离及体外扩增的方法。取95％乙醇固定后经果胶酶和纤维酶酶解的根尖制备染色体标本，用自制的微细玻璃针在倒置显微镜下挑取目的染色体。染色体DNA经Sau3A酶切后与人工合成的Sau3A连接接头连接，经两次PCR扩增获得足以用于构建单染色体DNA文库的扩增产物。片段大小为0．3～5kb，多数为0．5～3．5kb．与前人研究方法相比，所需底物量少（只需1条染色体），扩增片段大，为植物中小型染色体分离、体外扩增进而进行单染色体DNA文库构建奠定了基础。

抗菌核病转基因油菜植株的获得

将携带菜豆几丁质酶基因的植物表达载体pBch 通过农杆菌介导法导入甘兰型油菜H165 中。经卡那霉素对T0 、T1 和T2 代植株进行连续的筛选和菌核病(sclerotiniasclerotinorium) 接种试验, 共获得33 株抗菌核病的T2 代植株。对其中的22 株进行PCR 检测, 从6 株扩增得到与菜豆几丁质酶基因大小对应的DNA 带型,Southern 杂交证实其中2 株呈现阳性结果, 表明外源基因已整合到油菜基因组中。对转化植株抗菌核病的接种试验及在菌核病高发区的种植试验表明, 含几丁质酶基因的转化体对菌核病具有抗性, 并已得到T3

血红蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的表达及其作用的研究

革兰氏阴性菌Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ的血红蛋白与氧结合力强，能降低该菌需氧量。将该血红蛋白的结构基因（Ｖｇｂ）连接到枯草杆菌质粒ｐＡＫ４的β－内酰胺酶基因（ｂｌａ）启动子下（框架正确），构建了重组质粒ｐＡＶ，并将此质粒先转化至枯草杆菌ＤＢ １０４，继而又转化到枯草杆菌碱性蛋白酶工程菌Ｇ３３１和产木聚糖酶枯草杆菌Ｂ５３。经酶切和电泳分析显示转化株的质粒ＤＮＡ含有大小与 Ｖｇｂ相同的电泳带，又经非放射性同位素标记杂交实验，证明为含Ｖｇｂ基因的克隆，并采用一氧化碳鼓泡法测出血红蛋白的表达。在试管和三角瓶发酵实验中，在同一培养条件下碱性蛋白酶活性和木聚糖酶活性有所提高，为获得枯草杆菌发酵中降低需氧量，提高产量研究开辟新途径。

大豆单染色体的显微分离及体外扩增

采用玻璃针分离法，通过显微操作器成功地分离到大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）单染色体。将分离到的两条大豆染色体分别放入两个０．５ｍＬＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，经Ｓａｕ３Ａ酶切，并在染色体ＤＮＡ片段两端加上Ｓａｕ３Ａ人工接头后，进行两轮ＰＣＲ扩增，得到０．３～３ｋｂ之间的ＤＮＡ片段。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明，这些大豆单染色体扩增片段与大豆基因组ＤＮＡ之间有同源性，从而证明两条单染色体ＤＮＡ确实已被成功地扩增了，同时表明两条不同的大豆单染色体扩增产物存在一定的差异。在常规的倒置显微镜下对小型染色体进行了显微分离，为小型单染色体ＤＮＡ的体外扩增及微克隆奠定了基础。

定点整合抗虫基因到油菜叶绿体基因组并获得转基因植株

以基因枪法进行了油菜叶绿体基因组的定点转化。载体 pNRAB携带抗壮观霉素的筛选标记基因aadA和抗虫基因cry1Aa10 ,基因的两侧被添加了可用于同源重组的叶绿体DNA序列。基因枪轰击过的油菜子叶柄经植株再生和壮观霉素筛选 ,获得了 36株抗性植株。PCR检测和Southern杂交显示 ,其中 4株的叶绿体基因组已被转化 ,外源基因已被定点整合进叶绿体基因组的rps7和ndhB基因之间。用转基因植株的叶片饲喂二龄小菜蛾 ,1周后幼虫死亡率达33%～ 47% ,存活幼虫的生长明显减慢 。

黑麦1R染色体微克隆文库的构建与分析

通过玻璃针分离法 ,从黑麦 (SecalecerealeL .)根尖细胞中期分裂相中显微分离出 2条及 5条 1R染色体。经Sau3A接头介导的PCR(LA_PCR)方法对其进行体外扩增 ,得到了 0 .3～ 2 .5kb之间的DNA片段。以DIG标记的探针进行多次Southern杂交 ,证明显微分离出的染色体的体外扩增产物与黑麦基因组DNA同源 ,并且来自 1R染色体。然后利用 5条 1R染色体的第二轮PCR产物构建质粒文库 ,可得到 2 2 0 0 0 0个重组子。随机挑选 172个重组子进行分析 ,发现插入片段主要介于 30 0～ 180 0bp之间。此外 ,根据基因组点杂交结果推算出该文库包含约 42 %的中、高重复序列和 5 8%的单、低拷贝序列 ,而且文库的冗余度较低。研究构建的黑麦 1R染色体微克隆文库为 1R染色体高密度遗传图谱的建立以及位于其上的重要基因的定位与分离提供了便利。

猪脑组织中磷脂的综合提取研究

介绍了利用哺乳动物猪脑组织提取神经醇磷脂、卵磷脂和脑磷脂的工艺流程，并对某些关键环节进行了分析讨论，不仅为研究磷脂的生物学效应提供了原料，也为猪脑组织的综合利用开辟了一条可行的途径．

神经醇磷脂的细胞病理

神经醇磷脂，即鞘脂类（ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ），主要包括神经鞘磷脂（ｓｐｈｉｎｇｏｍｇｅｌｉｎｓ），酰基鞘氨醇（ｃｅｒａｍｉｄｅ），脑苷（ｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅ）和神经节甙脂（ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ）等［１，２］。其中以神经鞘磷脂为典型代表。神...

利用微分离黑麦1R染色体的体外扩增产物进行染色体着染研究

首先对显微分离出的黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）１Ｒ染色体进行了两轮Ｓａｕ３Ａ连接接头介导的ＰＣＲ扩增（ＬＡ＿ＰＣＲ）。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实这些染色体扩增片段来源于基因组ＤＮＡ之后，再利用１Ｒ染色体的第二轮扩增产物、黑麦基因组ＤＮＡ、ｒＤＮＡ基因为探针，与其根尖细胞中期分裂相进行染色体原位杂交，发现微分离的１Ｒ染色体体外扩增产物中包含大量的非该染色体特异性重复序列，而其信息量却较黑麦总基因组少；当以适量的黑麦基因组ＤＮＡ进行封阻时，微分离染色体的体外扩增产物成功地被重新定位在中期分裂相的一对１Ｒ染色体上，说明微分离１Ｒ染色体的ＰＣＲ扩增产物中的确包含了该染色体特异性的片段。此外，以从１Ｒ染色体微克隆文库中筛选出的一单、低拷贝序列和一高度重复序列分别为探针，染色体原位杂交检测发现，这一高度重复序列可能为端粒相关序列；而单、低拷贝序列却未检测到杂交信号。这些结果从不同侧面反映出染色体着染技术是证实微分离、微切割染色体的真实来源及筛选染色体特异性探针的有利工具。建立了可供参考的植物染色体着染实验体系，为染色体微克隆技术在植物中的进一步应用提供了便利。

酸性红黄壤土上大麦遗传改良研究

本文报道了酸性红黄壤土上大麦遗传改良研究结果:(1)采用酸铝营养液培养幼苗的方法鉴定了我国3871份大麦品种的耐酸铝性,得到一级耐性材料315份,占鉴定总数的8.13％;(2)相关通径分析表明,酸性红黄壤土上大麦单株籽粒产量损失起主要作用的是有效分蘖数下降(P=0.7324)、每穗实粒数减少(P=0.5923)和千粒重降低(P=0.5877)由此可见,这是在红黄壤土田间条件下选择耐酸铝性大麦的三个主要选择指标;(3)发现大麦耐酸铝性基因遗传方式除单基因遗传方式外,尚有多基因控制的表现数量性状遗传方式;(4)从对酸铝性表现敏感的大麦品种“早熟3号”的花药、幼胚等外植体诱导出的愈伤组织,通过离体细胞突变体筛选,得到了“耐性细胞系”.以上结果表明,通过耐酸铝性遗传改良培育出适应酸性红黄壤土种植的大麦新品种是可行的,亦为开发利用红黄壤土地资源补充了另一条有效途径.

油菜叶绿体核糖体蛋白基因rps7的克隆和序列分析(英文)

从甘蓝型油菜 (Brassicanapuscv .H1 65)叶绿体基因组克隆得到了编码核糖体蛋白的基因rps7。经序列分析得知 ,该基因编码区包含 468个核苷酸 ,编码一个分子量为 2 0 1 0 9D、由 1 55个氨基酸组成的蛋白质。该基因的核苷酸和编码的氨基酸序列与烟草对应基因的同源性皆高达 97% ;而与水稻对应基因的同源性分别为 90 %和 84%。该基因不含内含子 ,没有典型的SD序列 ,但在 5’端 - 2 5～- 2 2位发现一个与烟草psbA基因的顺式作用元件RBS2完全相同的TGAT框。与烟草和水稻的同源序列比较 ,该基因在 3’端非编码区变异较大 ,发生了多次插入和缺失。构建了包含该基因在内的一个 1 .0kbDNA的限制性内切酶图谱。所报告的基因序列已登录GenBank。

中国大麦种质资源耐酸铝性初步鉴定

以酸铝营养液培养方法对来自6个省(区)的3871份大麦品种进行了耐酸铝性的鉴定。结果表明:(1)品种间耐酸铝性存在显著的差异,获得1级耐性品种315份,占8.13%;(2)红壤主要分布区浙江省的耐性品种比例较高,耐性较强。(3)从总体上看,六棱大麦品种比二、四棱品种耐性强,皮大麦比裸大麦耐性强,冬性大麦比春性大麦耐性强。

小麦6B染色体微切割及其不同片段的DNA文库构建

用Nd：YAG激光微束将处于有丝分裂中期的小麦(Triticum aestivum L．)6B染色体微切割为四段，并用微细玻璃针将每个片段分别回收。将分离的染色体片段DNA和Sau3A接头介导的多聚酶链式反应(LA-PCR)分别扩增。Southern杂交证明4个特定区域的DNA确实来自于小麦基因组。用一系列(42对引物)位于6B染色体和其他染色体上的微卫星序列对微切割的染色体片段的PCR产物进行了验证。结果表明，获得的染色体片段的PCR产物来自于小麦6B染色体。将6B染色体4个片段的第二轮PCR产物克隆到pGEMT-vector中，建立了4个染色体特定区域的基因组文库，命名为R1、R2、R3和R4，分别包含2．1×10^5、2．74×10^5、2．45×10^5和2．93×10^5个重组子克隆。每个文库均随机挑选150个克隆进行质粒的小量制备和酶切验证。结果显示：插入片段大小在300～l800bp之间，平均大小为820-870bp，其中43％-48％的克隆为低／单拷贝序列，42％-47％为中／高拷贝序列。本研究为详细分析植物单染色体的不同片段的分子遗传学研究提供了基础。

青蛙不同组织细胞染色体标本制备的比较

介绍了利用青蛙（Ｒａｎａｎｉｇｒｏｍａｃｕｌａｔａ）小肠上皮细胞制备染色体标本的方法步骤。并与常规的骨髓细胞染色体标本制备进行了对照比较，结果表明：利用蒸馏水低渗处理小肠上皮细胞制备染色体标本具有操作简单、代价低廉，分裂相多等优点．

曲阜孔林黑线仓鼠种群调节机理的研究

１９９４年３月至１９９５年１月，对世界最大的人造园林之──曲阜孔林中黑线仓鼠种群密度的调节机理进行了初步研究，共获标本２２１只（幼体组１２只，亚成体组３１只，成体Ⅰ组８４只，成体Ⅱ组８７只，老体组７只）。通过显微和组织化学手段及体视学方法，主要从肾上腺的结构变化特点，揭示了曲阜孔林黑线仓鼠的种群变化规律。结果表明：肾上腺皮质体积密度与种群密度呈正相关（ｙ＝０．７２ｘ－０．００３８，ｒ＝０．９１７１，Ｐ＜０．０１）。进一步分析肾上腺皮质变化对种群数量波动的调节作用和机理，不仅为黑线仓鼠肾上腺结构的形态学研究提供了定量指标，更重要的是为曲阜孔林黑线仓鼠种群数量预测预报的种群生态学提供了较为翔实的资料和依据。

王百合单染色体DNA文库的构建

以王百合为模式植物建立了简单快速分离植物单染色体及扩增和克隆其DNA的方法 ,即显微操作分离单个染色体并放入Eppendorf管中 ,经Sau 3A酶切后在染色体DNA片段两端加上Sau 3A寡核苷酸人工接头 ,然后以寡核苷酸人工接头中的一条链为引物进行两轮PCR扩增 .PCR产物为 30 0～ 2 50 0bp ,多数为10 0 0bp左右 ,经Southern杂交证实PCR产物来自王百合基因组DNA .对单染色体第二轮PCR产物进行克隆 ,构建单染色体DNA文库 ,得到约 10 0 0 0 0个重组子 .对其中 84个重组子进行分析 ,插入片段为 30 0～180 0bp ,平均为 780bp .与以往方法相比 ,此方法避免了在纳升体积内酶解、连接等操作 ,扩增底物只需一条染色体而不是以往的几十条 ,而且克隆片段 (平均 780bp)大于以往的报道 (平均 6 50bp) .