错配修复蛋白、Ki67蛋白表达与老年结直肠癌患者根治术后无进展生存期的关系

[目的]探讨错配修复蛋白、Ki67蛋白表达与老年结直肠癌(CRC)患者根治术后无进展生存期(PFS)的相关性.[方法]选取2016年10月至2021年10月在汉中市中心医院行结直肠癌根治术治疗的96例老年CRC患者,并收集患者结直肠癌组织标本和癌旁组织.比较结直肠癌组织、癌旁组织错配修复蛋白与Ki67蛋白表达情况,分析癌组织中错配修复蛋白、Ki67蛋白表达与临床病理特征的相关性,采用Cox回归分析影响老年CRC患者预后的相关因素,分析错配修复蛋白、Ki67蛋白表达与老年CRC患者根治术后PFS的相关性.[结果]结直肠癌组织错配修复蛋白阴性表达率、Ki67蛋白阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05).不同肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移情况、分化程度、浸润深度的老年CRC患者癌组织中错配修复蛋白阴性表达率、Ki67蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).96例老年CRC患者术后随访3年,失访3例,剩余93例患者中21例(22.58%)死亡.Cox回归分析显示,肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、分化程度、错配修复蛋白阴性表达、Ki67蛋白阳性表达均是影响老年CRC患者预后的独立危险因素(P<0.05).错配修复蛋白阳性表达患者与阴性表达患者生存曲线比较,差异有统计学意义(P<0.05).Ki67蛋白阴性表达患者与阳性表达患者生存曲线比较,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]老年CRC患者癌组织错配修复蛋白阴性、Ki67蛋白阳性表达率较高,错配修复蛋白、Ki67蛋白表达与患者临床病理特征及预后均存在相关性.

甲状腺癌根治术后血清甲状腺激素、甲状腺球蛋白水平与复发的相关性分析

目的探讨甲状腺癌根治术后血清甲状腺激素、甲状腺球蛋白(Tg)水平与复发的相关性。方法选择甲状腺癌患者110例,均给予甲状腺癌根治术治疗,检测所有患者手术前后血清甲状腺激素、甲状腺球蛋白水平变化情况,随访患者的复发情况并进行相关性分析。结果所有患者顺利完成手术,开始激素治疗1个月后患者的血清甲状腺激素与Tg值均低于术前1 d(P<0.05);术后随访1年,复发率为16.4%(18/110)。复发患者的临床分期、淋巴结转移、开始激素治疗1个月后血清甲状腺激素、Tg值与非复发患者对比有差异(P<0.05)。在110例患者中,Pearson分析显示患者复发与开始激素治疗1个月后的血清甲状腺激素、Tg值均存在相关性(P<0.05);Logistic回归分析显示开始激素治疗1个月后的甲状腺激素、Tg均为导致患者复发的重要因素(P<0.05)。结论甲状腺癌根治术后血清FT3、FT4、T3、T4、Tg水平低于术前,可伴随有一定的复发几率,术后甲状腺激素、Tg为导致患者复发的重要因素。

UBE2O在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究泛素结合酶E2O(ubiquitin conjugating enzyme E2 O,UBE2O)在胃癌组织中的表达及临床意义,明确UBE2O对胃癌细胞增殖和侵袭的影响,并初步探索潜在分子机制。方法:利用癌症基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析UEB2O mRNA在胃癌及正常组织中的表达差异;通过免疫组化染色明确UBE2O蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达情况;在AGS和SGC-7901细胞中转染UBE2O shRNA,CCK-8和Trasnwell实验检测细胞增殖和侵袭能力;蛋白质免疫印记实验检测AMP活化蛋白激酶α2(AMP-activated protein kinaseα2,AMPKα2)、磷酸化雷帕霉素机制靶点(phosphorylated mechanistic target of rapamycin,p-mTOR)和mTOR表达。结果:TCGA数据提示UBE2O mRNA在胃癌组织中表达显著高于正常组织;免疫组化结果证实胃癌组织中UBE2O阳性表达率显著高于癌旁组织;UBE2O表达与肿瘤大小、浸润深度和TNM分期显著相关;干扰UBE2O显著抑制AGS和SGC-7901细胞增殖和侵袭;沉默UBE2O导致AGS和SGC-7901细胞中AMPKα2蛋白水平增加,而p-mTOR蛋白水平降低。结论:UBE2O在胃癌组织中表达上调并与恶性临床病理特征密切相关,UBE2O可能通过AMPKα2/mTOR信号通路促进胃癌细胞增殖和侵袭。

Tg737基因参与胎肝干细胞正常分化的机制研究

目的探讨Tg737基因对胎肝干细胞(Fetal liver stem cells,FLSCs)正常分化的影响及相关机制。方法三步分离法富集FLSCs;在HGF诱导FLSCs的不同时间点,RT-PCR检测AFP、ALB、Tg737及HNF4α的mRNA表达,Western blot检测Tg737和HNF4α的mRNA和蛋白表达;慢病毒Tg737-shRNA转染FLSCs,观察转染后Tg737的抑制效果;Tg737抑制后,RTPCR检测不同诱导时间AFP和ALB的mRNA表达;Western blot检测Tg737抑制后HNF4α的蛋白表达。结果三步分离法能有效富集FLSCs;在HGF诱导FLSCs的过程中,AFP的mRNA表达呈逐渐降低的趋势,ALB的mRNA表达逐渐升高,Tg737及HNF4α的mRNA和蛋白表达均呈逐渐升高的趋势;shRNA能有效下调Tg737的mRNA和蛋白表达;在HGF诱导过程中,Tg737抑制组AFP和ALB的mRNA水平均无明显变化;Tg737抑制后HNF4α的蛋白表达显著下调。结论 Tg737和HNF4α参与了FLSCs的正常分化,Tg737的表达缺失会抑制FLSCs的正常分化,其抑分化机制可能是通过下调HNF4α来实现的。

空肠减压预防胰十二指肠切除术后胰漏的疗效分析

目的 探讨空肠减压对胰十二指肠切除（PD）术后胰漏发生率的影响.方法 回顾性分析我科2008年5月至2012年11月432例行PD术患者的临床资料,分为三组：胰肠吻合行空肠减压（空肠减压组）265例,行胰管支架内引流（内引流组）123例,行胰管支架外引流（外引流组）44例.结果 术后胰漏发生率：空肠减压组（6.0％）较内引流组（13.8％）低,差异有统计学意义（P＜0.05）;但与外引流组（11.4％）比,差异无统计学意义（P＞ 0.05）.日均消化液引流量：空肠减压组术后5d后（95±33）mL/d较该组术后1～5d的引流量（388±130） mL/d,亦较术后5d外引流组的引流量（405±136） mL/d少,差异有统计学意义（P＜ 0.05）.结论 空肠减压可以减少PD术后早期空肠上段液体潴留,对预防胰漏起到一定作用;在患者胃肠功能恢复后（术后＞5d）消化液丢失空肠减压组较胰液外引流组少,有利于术后恢复;胰十二指肠切除术中空肠减压为一种安全的手术方式.

TAPP与开放式腹膜前间隙腹股沟疝无张力修补术的临床效果比较

目的对比腹腔镜经腹膜前疝修补术(TAPP)与开放式腹膜前间隙腹股沟疝无张力修补术的临床应用价值。方法回顾性分析2013年3月至2015年3月汉中市中心医院普通外科收治的78例腹股沟疝(均为单侧腹股沟疝)患者的临床资料,依据治疗方法不同分为观察组和对照组,各39例。观察组行TAPP治疗,对照组行开放式腹膜前间隙腹股沟疝无张力修补术治疗。对两组患者的临床疗效进行比较分析。结果观察组手术时间短于对照组[(52±12)min比(60±15)min],排气时间晚于对照组[(16.8±1.9)h比(12.4±1.6)h],镇痛药应用比例低于对照组[17.9%(7/39)比38.5%(15/39)],差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者术后并发症、复发及慢性疼痛发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TAPP与开放式腹膜前间隙腹股沟疝修补术是安全有效的,各有优势,临床上应根据患者的病情、医疗单位条件及患者经济情况等综合因素来选择相应的手术方式,均能达到良好的治疗效果。

肠内营养与肠外营养支持对胃肠道肿瘤患者围手术期的影响研究

目的:分析肠内和肠外营养对胃肠道肿瘤患者围术期的影响。方法:选取我院胃肠道肿瘤患者122例为研究对象,依照营养支持方法不同分为EN组和PN组,EN组患者给予肠内营养,PN组患者给予肠外营养,分析营养支持效果。结果:术后患者体重、血红蛋白水平等显著下降(P<0.05),术后第7天开始逐渐恢复,两组患者指标变化无明显差异(P>0.05)。经过营养支持,生化指标明显改善,EN组各指标改善情况显著高于PN组(P<0.05),EN组首次排气时间(2.18±0.75)d、排便时间(3.26±0.85d)显著短于PN组(3.25±0.87d)、(5.26±1.26d,P均<0.05)。常见并发症为恶心呕吐、腹泻、静脉炎以及伤口感染等,EN组患者静脉炎发生率(1.6%)显著低于对照组(6.6%,P<0.05)。结论:肠内营养能够更好地改善胃肠道肿瘤患者营养状况。

肝癌干细胞的研究进展

肝细胞癌（HCC）是常见的恶性肿瘤之一,是世界上第五大常见癌症,死亡率仅次于肺癌和结肠癌.预计未来20年,其发病率死亡率还会成倍上升.目前关于肝癌发生的细胞学机制仍不明确.随着对肿瘤和干细胞的研究逐渐深入,Hamburger和Salmon提出肿瘤干细胞学说[3],该学说认为：肿瘤组织中仅有一小部分（＜1.0％）肿瘤细胞有致瘤性,绝大多数肿瘤细胞没有或仅有有限的增殖能力,这小部分肿瘤细胞因具有一些与干细胞相似的自我更新、增殖、分化等特性,被称为肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCS）.肿瘤的形成和发展为该细胞主导过程.在此后大量实验中证实乳腺癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌及脑肿瘤等均存在肿瘤干细胞.于是推测出肝癌中也存在着肝癌干细胞（liver cancer stem cells,LCSCs）.肝癌干细胞是近年来的研究热点,若能证实其在肝癌发病中起到的作用,则将会对肝癌的诊断和治疗产生重大的意义.本文对近年来的肝癌干细胞研究进展做一综述.

无淋巴结转移胃癌患者的生存状况研究

目的研究无淋巴结转移胃癌患者的生存状况,探寻影响患者生存率和生存时间的因素。方法选择2008年1月至2010年6月在我院接受根治手术切除且术后病理证实为无淋巴结转移的胃癌患者180例。统计患者的生存率和生存时间,应用Log-Rank检验及Cox模型分析影响患者生存率的因素。结果 180例无淋巴结转移胃癌患者根治术后随访时间为60-94个月,半数生存期为67个月,1年生存率78.89%,3年生存率68.33%,5年生存率57.78%。应用单因素分析筛选出影响无淋巴结转移胃癌患者术后生存状况的相关因素：年龄、病期、肿瘤大小、Borrmann分型、分化程度、TNM分期、围手术期输血、血红蛋白、血清白蛋白、术后综合治疗、浸润深度。多因素分析显示,肿瘤大小、浸润深度、分化程度、TNM分期和术后综合治疗的有无是影响结无淋巴结转移胃癌术后生存状态的重要因素。结论肿瘤大小、浸润深度、分化程度、TNM分期和术后综合治疗的有无是影响患者术后生存状况的重要因素。早诊断,早治疗,积极手术治疗,术后进行综合治疗,可提高生存率。

CC趋化因子受体-2在肝细胞肝癌组织中的表达及临床意义

目的研究CC趋化因子受体-2（CC chemokine receptor2，CCR-2）在肝细胞癌组织中的表达及其与肝癌临床病理特征、预后的关系。方法用免疫组织化学法（SP法）检测76例肝癌组织及其癌旁组织中CCR2的表达情况，分析CCR-2表达与肝癌各项临床病理特征以及患者预后的关系。CCR-2染色结果与各项临床指标的关系采用Х^2检验或Fisher确切概率法检验。采用KaplanMeier法绘制生存曲线。生存情况分析采用lo^rank检验。结果14（18．40A）例癌旁组织CCR-2染色结果显示为弱阳性表达，其余均为阴性。在肝癌组织中，CCR2表达明显高于癌旁组织：15（19．7％）例阴性表达，29（38．2％）例弱阳性表达，12（15．8％）例中等阳性表达，20（26．3％）例强阳性表达。肝癌组织中CCR2阳性表达与肿瘤直径（Х^2=12．41，P〈0．01）、门静脉癌栓（Х^2=7．476，P=0．006）、转移（Х^2=7．227，P=0．007）、AJCC分期（Х^2=20．711，P〈0．01）明显相关。CCR2高表达组患者术后五年生存率（6．3％）明显低于低表达组（38．6％），差异具有统计学意义（Х^2=27．133，P％0．01）。经单因素及多因素分析显示，肝癌组织CCR-2高表达是影响肝癌患者总体生存的独立危险因素（P〈0．05）。结论CCR-2在肝癌组织中表达明显升高，可能参与了肝癌的发生发展过程，检测CCR-2表达水平对判断肝癌的预后具有一定的参考价值。

绿色荧光蛋白转基因小鼠胎肝干细胞在体内外定向分化的潜能

目的探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠胎肝干细胞（FLSCs）在体内及体外定向分化的潜能。方法取孕13d绿色荧光蛋白（GFP）转基因C57BL／6J小鼠胚胎肝脏，经机械消化和胶原酶消化获得FLSCs并扩大培养；成熟肝细胞来自于同品系小鼠成体肝脏，通过两步灌注胶原酶消化法提取，流式细胞仪鉴定其干细胞标志物的表达及自我增殖能力，RT—PCR及Westernblot测定AFP表达；分别将FLSCs经肝细胞生长因子（HGF）及TGF-β诱导分化后，Real—timePCR检测Alb、角蛋白CK一7、8、19mRNA以及Westernblot检测Alb、角蛋白CK-7、8、19蛋白在诱导前后的表达变化，鉴定其向肝细胞和胆管细胞双向分化的能力；经尾静脉注射FLSCs到野生型C57BL／6J肝切除小鼠体内，观察其在肝内重构肝组织的能力。计量资料采用t检验，各时相点比较采用重复测量的方差分析，两两比较采用LSD—t检验。结果成功克隆FLSCs细胞。流式细胞仪检测分离的FLSCs表达上皮细胞黏附分子（EpCAM）、CDl33、CD49f干细胞标志物，其阳性表达率分别为78．6％±3．3％、31．7％±2．5％、47．6％±1．8％。AFPmRNA在FLCs和成熟肝细胞中的相对表达量分别为0．640±0．115和0．053±0．012，蛋白相对表达量分别为1．3834±0．265和0．243±0．227，两者比较，差异有统计学意义（t=8．772，5．354，P〈0．05）。超低黏附培养皿培养FLPCs和成熟肝细胞，其形成克隆球数目分别为（234．04±57．0）个和（5．04±2．0）个，两者比较，差异有统计学意义（t=12．711，P〈O．05）。体外HGF诱导FLSCs分化，Alb、CK-8mRNA表达分别在8、10d到达峰值，分别为0．851±0．030和0．771±0．031；两者蛋白水平于第10天达峰值，分别为4．573±0．015和1．562±0．029。体外TGF—B诱导FISCs分化，CK-7、CK-19mRNA在第12天达峰值，分别为15．454±2．152和10．675±1．822；两者蛋白水平于第14天达峰值，分别为3．4234±0．105和1．8924±0．081。在移植有FLSCs的肝切除小鼠体内可检测到表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的成熟肝细胞及胆管细胞。结论分离的绿色荧光蛋白转基因FLSCs能够稳定表达绿色荧光，具有显著的肝干细胞特征和向肝细胞和胆管细胞双向分化的潜能，且在体内研究中具有良好的示踪性。

大鼠门静脉分支残端置管模型构建及细胞移植途径的评价

目的:大鼠肝部分切除模型被广泛的应用于肝脏疾病的研究,随着干细胞治疗肝损伤及护肝药物研究的发展,对大鼠肝损伤模型也提出了很多新的要求。本实验拟在大鼠肝部分切除术的基础上改进以建立大鼠肝断面门静脉分支残端的静脉置管模型,并进行细胞移植实验,对比分析新模型的优劣。方法:60只F344大鼠分为三组。A、B组行行85%肝切除术;C组行85%肝切除术+肝断面门静脉分支残端置管术。术中B组经门静脉注入4×105个表达GFP(green fluorescence protein,GFP)的胎肝干细胞(fetal liver stem/progenitor cells,FLSPCs)。C组经留置导管注射入同等量的FLSPCs,A组注射同等剂量的培养液。72小时取血清,测定肝功能ALT、AST,统计死亡率;取肝脏组织切片观察其修复情况。统计学采用方差分析和LSD-t检验。结果:B、C组F344大鼠72小时肝功指标(ALT、AST)均明显优于A组;B组、C组肝脏组织学的病理损伤的恢复分别较A组快。B、C组间肝功指标无统计学意义。结论:经门静脉分支残端置管途径移植FLSPCs效果等同于经门静脉穿刺途径,且该模型具有可反复、可选时、减少创伤等优点。

不同浓度HGF、EGF优化大鼠胎肝干细胞体外培养的研究

目的：研究不同浓度肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor,HGF）和表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）对大鼠胎肝干细胞体外增殖的影响,探索二者间有无协同作用。方法：取孕14天胎龄F344大鼠胚胎的胎肝,经三步分离法分离纯化后,配置不同浓度HGF、EGF及HGF和EGF联合组培养基,将胎肝干细胞分组培养。光镜下观察细胞增殖状况,MTT法观察不同浓度和不同时间HGF、EGF及HGF和EGF联合对大鼠胎肝干细胞增殖的影响,并进行统计学分析。结果：HGF 10~80 ng/mL各浓度组,EGF 10~80 ng/mL各浓度组增殖效应均大于对照组。当HGF为20 ng/mL,增殖效应明显大于对照组（P〈0.01）,当HGF浓度继续增高时,增殖效应无明显增高。将20 ng/mL HGF组与不同浓度EGF组合后分组培养细胞,发现20 ng/ml HGF和10 ng/mLEGF联合组增殖效应明显升高,继续升高联合组中EGF浓度,增殖效应无明显提高。结论：HGF和EGF具有明显改善大鼠胎肝干细胞体外无血清培养条件的作用,二者对大鼠胎肝干细胞体外培养具有协同促进作用。其中20 ng/mL HGF和10 ng/mL EGF联合培养促进大鼠胎肝干细胞增殖效果最明显。

Notch信号通路调控胎肝干/祖细胞治疗终末期肝病的研究进展

细胞治疗是终末期肝病最有前景的疗法.胎肝干/祖细胞（FLSPCs）因高存活、高增殖、小体积和高安全的优势,成为干细胞治疗肝病的理想细胞之一.本课题组前期应用三步分离法富集FLSPCs,获得了与流式分选近似的分离效率,并在大鼠急性肝衰竭模型中证实FLSPCs能参与肝脏形态和功能的恢复.然而,要探索FLSPCs的治疗潜能,有两个问题急待解决：首先,如何保持FLSPCs自我增殖更新;其次,如何促进FLSPCs准确分化为肝细胞和胆管细胞.Notch信号在诸多干细胞更新和分化中起关键调节作用.我们以前的研究显示了Notch信号在肝再生过程中对细胞的增殖和分化有重要作用,Notch信号可能参与FLSPCs的自我更新和定向分化的调控.开展Notch信号对FLSPCs命运的调控效应和相关分子机制研究,发现相应的干预靶点,可能为FLSPCs的临床应用提供依据.

肝癌干细胞研究进展

肝癌是占全球发病率第5、致死率第3的恶性肿瘤。在我国,每年新发现的肝癌患者人数占全球的一半以上。虽然在早期诊断和治疗措施方面已有很大的进步,但是大部分肝癌患者被发现时已属晚期,而且针对肝癌的以手术为主的综合治疗疗效仍有限。近十多年的研究使肿瘤干细胞的概念深入人心,越来越多的证据表明肿瘤干细胞与肿瘤的生长、耐药、转移和复发等密切相关,使人们对肝癌的发生和发展有了新的认识,为肝癌的治疗提供了新的方向。

胰腺中段切除术治疗良性和低度恶性胰腺颈体部肿瘤:附32例报告

目的:探讨胰腺中段切除术(MP)治疗良性和低度恶性胰腺颈体部肿瘤的疗效。方法:回顾性分析2005年8月—2013年2月收治的32例胰腺颈体部良性和低度恶性肿瘤行MP患者资料(MP组),并与同期因良性和低度恶性胰腺肿瘤行胰十二指肠切除术(PD)的30例(PD组)和行胰体尾切除术(DP)的36例(DP组)患者资料进行比较。结果:MP组、PD组、DP组平均手术时间分别为(180.8±56.4)、(279.6±79.2)、(190.4±62.3)min;平均术中出血量分别为(196.5±185.7)、(482.6±288.5)、(320.7±240.3)mL;胃肠道功能恢复时间分别为(3.6±1.6)、(5.2±2.3)、(4.1±1.9)d;新增糖尿病例数分别为1、5、9例;术后需要补充胰酶例数分别为0、8、5例,以上指标3组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。MP组、PD组、DP组术后胰瘘发生率(18.8%、12.5%、25.0%)以及其他围手术期指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。平均随访38个月,各组均无肿瘤复发。结论:MP治疗良性或低度恶性胰腺颈体部肿瘤是一项合理的技术,能更好地保护胰腺外分泌和内分泌功能。