犬瘟热病毒血凝蛋白在昆虫细胞中的表达与抗原性分析

为获得具有天然构象及良好抗原性的犬瘟热病毒(CDV)血凝蛋白(H),本研究以HLJ2-07毒株为模板,利用RTPCR方法扩增出H基因,将其克隆到pFastBacTMHTA载体中,利用大肠杆菌DH10BacTM同源重组构建穿梭质粒reBACmidrH,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,进行杆状病毒表达。利用Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。同时,利用在线网站与软件对CDV H蛋白进行B细胞表位分析预测。结果显示,在杆状病毒系统中表达的H蛋白能与His-tag单克隆抗体及CDV阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白成功表达,且具有良好的反应原性;用Swiss-model同源建模软件及B细胞表位预测软件,预测H蛋白可能具有的B细胞表位有5处,分别是175—195、240—250、365—380、480—508及526—555。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,可为诊断试剂开发、单克隆抗体制备及表位筛选等工作奠定基础。

中药抗病毒研究进展

病毒是一类个体细微,结构简单,只含有一种核酸,依赖于宿主细胞以复制方式进行繁殖的非细胞型微生物,也是一种独特的传染因子。对于病毒引起的感染性疾病目前临床尚缺乏特效疗法,为解决这一难题,不少人将目光投向我国传统中草药。相较于西药,中药具有许多得天独厚的优势,诸如药性温和,毒性较低,价格低廉,材料丰富等。本文将针对中药治疗病毒中常见种类:流感病毒、乙型肝炎病毒、柯萨奇病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒展开讨论。

肠道病毒71型VP1蛋白原核表达及在高通量抗体筛选中的应用

目的肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引起重症手足口病的主要病原体,目前缺少有效的抗病毒药物。本研究利用EV71 VP1蛋白作为抗原,筛选免疫小鼠脾脏特异性表达EV71抗体的B细胞。方法将EV71 VP1基因进行密码子优化,构建至pET-21a(+)表达载体,并转化到大肠埃希菌BL21-DE3,优化蛋白表达和复性条件,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达,并检测其抗原性;以纯化蛋白为抗原,通过流式细胞术对灭活病毒免疫小鼠的B淋巴细胞进行分选,用于单克隆抗体的制备。结果EV71 VP1基因在大肠埃希菌中以包涵体形式稳定表达,纯化复性后的蛋白具有良好的免疫原性;利用表达的VP1蛋白从免疫和未免疫的昆明小鼠脾脏筛选出能够特异性表达EV71抗体的B细胞,两者数量差异具有统计学意义。结论成功获得免疫原性良好的EV71 VP1重组蛋白,与流式细胞术结合可用于EV71特异B细胞的检测和分选。

病毒感染诱导血小板减少发病机制的研究进展

血小板减少是病毒感染性疾病的一种常见临床表现,病毒感染人体后,能够通过抑制血小板生成、增加血小板损耗、免疫损伤及促进血小板破坏等途径共同导致血小板减少。病毒感染诱导血小板减少的机制可能有骨髓抑制、巨核细胞生成缺陷,炎症诱导的凝血及血管内破坏增加导致的血小板损耗等。文章就病毒感染性疾病诱导血小板减少机制的相关研究进行综述。

发热伴血小板减少综合征免疫系统损伤的研究进展

发热伴血小板减少综合征通常是机体被蜱虫叮咬后感染发热伴血小板减少综合征病毒而引起的一种急性的新发传染病,在我国多个城市及国外均有报道,研究统计其病死率可达5%~30%,春夏季节多发,主要分布在山区和丘陵地带的农村地区。在病毒感染性疾病中,机体往往表现为免疫系统功能受损,继而引发一系列异常的病理生理改变。文章就发热伴血小板减少综合征患者在免疫细胞和免疫分子及骨髓检测异常改变方面的相关研究进行了综述,以期增加相关工作人员对本病的认识,进而促进对于本病相关机制的深入研究和新的诊断及治疗技术的研发创新。

重症发热伴血小板减少综合征临床特征研究

发热伴血小板减少综合征(SFTS)是主要以发热伴血小板减少为特征的一种急性传染病。临床常表现为多个器官受累,重症患者主要表现为高热、神经系统症状、出血性症状及肺部症状等。实验室检查方面,重症患者血常规、生化酶学、凝血功能、免疫系统和细胞因子出现明显异常,同时SFTS患者骨髓穿刺可见嗜血细胞综合征现象。重症患者病情进展快、预后差,病死率较高,且该疾病缺乏特效治疗药物。因此,早期识别重症患者并给予对症支持治疗,对降低病死率尤为重要。本文就重症发热伴血小板减少综合征的临床特征展开综述,以期为重症SFTS患者早期识别及治疗提供新思路。

犬瘟热病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立快速检测犬瘟热病毒的诊断方法,根据GenBank中犬瘟热病毒核衣壳蛋白(NP)基因的保守序列设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法对犬瘟热病毒最低检出量为80copies/μL,是常规RT-PCR的100倍;与其他犬类病毒不发生交叉反应;组内、组间变异系数均小于5%。对收集的67份临床样品进行检测,阳性检出率为64.2%,而常规RT-PCR的阳性检出率为44.8%。研究结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR具有良好的敏感性、特异性和稳定性,为犬瘟热的早期诊断提供了技术手段。