小鼠睾丸体外生精小管模型构建及Rho/ROCK信号通路对其重构的影响

目的构建小鼠睾丸体外生精小管模型,探讨Rho/ROCK信号通路在生精小管重构过程中的作用。方法取新生10日龄小鼠睾丸,分离纯化睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs),培养3 d后利用免疫荧光染色技术检测分离细胞GATA结合蛋白4(GATA Binding protein 4,GATA4)表达情况,鉴定SCs纯度;以RPMI 1640为阴性对照组(cont组),人工合成血清替代物(KnockOut^(TM) Serum replacement,KSR)和FBS为实验组,倒置显微镜下观察原代SCs生精小管形成情况,建立生精小管体外培养模型;分别以RPMI 1640培养基组和KSR组为阴性对照和阳性对照组,以KSR+Y27632(K+Y)、缓激肽(Bradykinin,BK)为实验组,探讨Rho/ROCK信号通路在生精小管形成过程中的作用。结果(1)免疫荧光染色结果显示在分离得到的细胞中GATA4^(+)DAPI^(+)SCs占90%以上;(2)倒置显微镜下观察到与cont组相比,随着培养天数的增加,KSR组有大量管状结构形成,而FBS组只观察到细胞生长,并未有管状结构形成;(3)添加ROCK分子抑制剂Y27632后镜下观察到的管状结构被明显抑制,而当添加Rho/ROCK信号通路激动剂BK后,我们观察到类似于KSR组管状结构的形成。结论Rho/ROCK信号通路参与小鼠睾丸体外生精小管结构的形成。