连翘联合抗菌药物对多重耐药大肠杆菌B_3的抗菌试验

目的:测定连翘水煎剂及其与抗菌药物联合对多重耐药大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B_3菌株的抑菌效果。方法:采用牛津杯法测定连翘对B_3菌的抑菌作用,利用微量肉汤稀释法测定连翘、四环素和磺胺间甲氧嘧啶钠对B_3菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);通过棋盘稀释法来测定连翘和上述抗菌药物的联合抑菌效果。结果:连翘能抑制多重耐药大肠杆菌B_3菌株的生长繁殖,呈现抗菌作用;试验药物对B_3菌株的最小抑菌浓度分别为连翘125.0mg/mL、四环素12.8 mg/mL、磺胺间甲氧嘧啶钠50.0 mg/mL;部分抑菌浓度(fractional inhibitory concentration,FIC)指数结果显示连翘与四环素联合呈相加作用,连翘与磺胺间甲氧嘧啶钠联合呈无关作用。本试验为兽医临床解决细菌耐药问题提供了用药新思路,同时为开发中草药制剂提供依据。

仔猪腹壁疝气手术合并去势的简易操作

疝气是腹部内脏从自然孔道或病理性破裂孔脱至皮下或其他腔孔的一种常见病,依据发痛部位的不同,可分为脐疝、腹股沟阴囊疝以及腹壁疝[1-3].仔猪疝气病会导致病仔猪生长发育较慢,饲料报酬降低,若不及时采取有效措施,还可能会导致仔猪死亡,造成养殖户经济损失[4-7].笔者最近遇到一例仔猪疝气病例,现报道如下。

银翘汤对金黄色葡萄球菌的抗菌试验

本次试验通过利用金银花、连翘以及"银翘汤"在不同浓度条件下对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)体外抗菌作用的差异来探讨其配伍规律。以体外抗菌试验结果为考察指标,采用水煎法对金银花、连翘的有效成分进行提取,通过对金黄色葡萄球菌牛津杯抗菌试验比较不同浓度下的金银花、连翘、"银翘汤"的抗菌差异性。统计分析表明,不同浓度的金银花、连翘和"银翘汤"对金黄色葡萄球菌的抗菌效果差异极为显著;0.25g/ml的金银花对金黄色葡萄球菌抗菌效果最好,其次为1g/ml的连翘,"银翘汤"对金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌效果,最佳浓度为0.5g/ml。本次试验结果为之后兽医临床用药奠定了一定的理论基础。

牛支原体脂蛋白LppB的多克隆抗体制备及对天然蛋白识别分析

旨在克隆牛支原体脂蛋白LppB基因,并进行原核表达与纯化,制备其多克隆抗体,研究其对天然蛋白的识别能力。以牛支原体PG45、ZYJ5及GT01株基因组DNA作为模板,PCR扩增LppB基因,测序并比对分析;将合成的pET-30a-LppB质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达产物用Ni-NTA纯化,Western blot方法验证纯化重组蛋白,测定其反应原性;将纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其ELISA效价,Western blot测定多克隆抗体对牛支原体LppB的识别。结果显示:PCR扩增的LppB基因全长约1860 bp,与预期大小相符;LppB主要为可溶性表达,大小约为74 kDa,经Ni柱纯化后获得纯化蛋白,LppB蛋白具有良好的反应原性;制备出小鼠抗LppB多克隆抗体,ELISA效价为1∶25600,能够识别天然LppB蛋白。本研究成功制备出牛支原体重组LppB蛋白及其多克隆抗体,为LppB功能研究奠定基础。

牛支原体0580基因C端截短体的原核表达及生物学功能初步分析

旨在初步分析牛支原体(Mycoplasma bovis)PG45菌株0580基因的生物学功能。前期测试发现牛支原体PG45菌株、08M菌株、07801菌株都有溶解鼠红细胞的现象,根据NCBI中对PG45菌株的基因注释,筛选到1个假定与溶血素相关的基因MBOVPG45_0580。该基因编码的蛋白经预测具有4个跨膜区,全长表达困难,故构建了不含跨膜区的C端截短体原核表达载体Pcold III-0580-C,进行诱导表达以及纯化,并在小鼠中制备0580-C端重组蛋白的多克隆抗体,对0580-C重组蛋白溶红细胞能力、多克隆抗体效价及特异性、是否影响菌株黏附细胞的能力进行了探究。PG45菌株中假定的与溶血素相关的蛋白0580在牛支原体中的相似性高达100%,去除4个跨膜区的重组蛋白0580-C能在大肠杆菌中表达,相对分子质量约为37 ku;鼠红细胞溶血试验发现0580-C重组蛋白没有溶血活性,但黏附及黏附阻断试验发现该蛋白有助于提高牛支原体黏附EBL细胞的效率,0580-C蛋白鼠源多抗能有效阻断牛支原体对EBL细胞的黏附。制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体效价达211,且能识别到3株牛支原体菌株(PG45、08M、07801)天然表达的0580蛋白,表明制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体特异性较好。牛支原体中假定的与溶血素相关蛋白0580可能是一种新的黏附相关分子,为解析牛支原体MBOVPG45_0580基因的生物学功能以及牛支原体致病机制提供了新的见解。

大肠杆菌耐四环素菌株的诱导试验

鸭大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌引起的一种急性败血性传染病,发病急,死亡快,主要侵害2~6周龄的雏鸭,特征性病变为心包炎、肝周炎、气囊炎等[1]。鸭大肠杆菌病常因单一或者混合性感染给养禽业造成严重的经济损失,临床上常用各种抗菌药物进行防治,但对抗菌药物过分的依赖造成了耐药菌株的不断产生与进化,且可通过食物链传递给周围环境以及人类,会导致抗菌药物对人类疾病治疗效果的下降甚至无效。

大肠杆菌与肠道沙门菌混合感染朗德鹅的诊断分析

为确诊某朗德鹅养殖场大批雏鹅出现腹泻、急性死亡的病因,采集患病雏鹅心脏、肝脏、肾脏等病料接种胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)、麦康凯和伊红美蓝等细菌培养基,进行细菌分离培养、革兰染色、16S rRNA测序和系统发育分析,并对分离菌进行小鼠致病性试验和抗菌药物药敏分析。结果显示:鉴定得到1株肠道沙门菌(Salmonella enterica)和2株大肠杆菌(Escherichia coli);3株分离菌对小鼠均具有较强的致病力;药物敏感性试验显示分离株对呋喃唑酮、复方新诺明、多黏菌素B敏感,对诺氟沙星、氨苄西林、环丙沙星等抗菌药物具有多重耐药性。诊断分析结果为朗德鹅养殖场雏鹅大肠杆菌病和沙门菌病诊断、治疗和预防提供了依据。

牛支原体MBOVPG45_0212的原核表达及其免疫原性分析

为探究牛支原体MBOVPG45_0212蛋白的免疫学功能,以牛支原体基因组DNA为模板,PCR扩增MBOVPG45_0212基因并测序分析;经基因密码子优化后构建重组质粒pET-30a-0212,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用Ni-NTA纯化目的蛋白,Western-blot验证纯化的重组蛋白与牛支原体不同血清的反应情况;将纯化蛋白免疫小鼠后制备多克隆抗体,Western-blot测定多克隆抗体是否识别牛支原体天然蛋白。PCR结果显示,MBOVPG45_0212基因全长约1 014 bp;pET-30a-0212重组质粒在大肠杆菌中于16℃经0.02 mmol/L IPTG诱导12 h能成功表达大小约43 ku的目的蛋白;纯化蛋白与牛支原体感染血清、免疫血清均能产生特异性反应,免疫小鼠血清效价达到1∶51 200以上,显示重组MBOVPG45_0212蛋白具有良好的免疫原性和反应活性。获得纯化重组MBOVPG45_0212蛋白,并制备其高效价的多克隆抗体,为其后续生物学功能研究奠定了基础。

青海地区牦牛牛支原体核酸检测分析

为了解青海地区牦牛牛支原体分子流行情况,本试验采用荧光定量PCR(qPCR)方法对2018-2019年采集青海地区的636份牦牛鼻拭子进行牛支原体核酸检测,并对不同地区、年份、年龄、性别、饲养模式的牦牛牛支原体核酸检测结果进行统计分析。结果显示,牛支原体的总检出率为21.86%(139/636),牛支原体在青海不同地区(海北州、海南州、西宁市、海西州)牦牛群存在不同程度的流行(0%~44%);2018年11月检出率为18.02%,2019年6月检出率26.37%;雌性检出率(27.84%)高于雄性检出率(18.41%),差异性显著(P<0.05);0~2岁的检出率最高,为22.26%,其次为3~6岁,检出率为19.50%,6~12岁检出率最低,为18.03%,差异性显著(P<0.05);放牧养殖模式下检出率最高(34.00%),其次是集约化养殖模式(22.81%),放牧+圈养养殖模式下检出率最低(17.47%),差异显著(P<0.05)。青海不同地区牦牛牛支原体存在不同程度的流行,不同年龄、性别、饲养模式存在统计学差异。本研究为明确青海地区牦牛牛支原体流行情况,为制定合理的防制措施提供了参考数据。