大鼠肝多聚核糖体及其mRNA的分离和鉴定

利用超速离心法分离大鼠肝多聚核糖体,进一步用Oligo(dT)-Cellulose柱层析法从中直接分离出mRNA。紫外分光光度及蔗糖密度梯度分析均显示此多聚核糖体有较高的纯度。在兔网织红细胞体外翻译系统中,此多聚核糖体表现出较高的生物活性。

治疗型关节炎护膝对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡基因Bcl-2及p53的影响

目的:通过检测OA护膝对日本大耳白兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡基因Bcl2、p53mRNA表达的影响,探讨OA护膝防治兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的分子生物学机制。方法:健康6月龄日本大耳白兔54只,雌雄各半,空腹体重2～2.2kg,采用改良Hulth法复制膝骨性关节炎模型,随机分为6组,即正常组、模型组、对照组(微波组)、实验1组(电组)、实验2组(热组)、实验3组(护膝组)。正常组10只,常规饲养;模型组9只,造模后常规饲养;对照组9只,微波仪治疗30min,每日1次;实验1组9只,电(疏密波)治疗30min,每日1次;实验2组8只,热(热软膜)治疗30min,每日1次;实验3组9只,电热(OA护膝)治疗30min,每日1次,连续治疗16周时处死。采用荧光定量RT-PCR法检测各组膝关节软骨细胞Bcl2、p53mRNA的表达水平。结果:16周时,各组所有抽提的兔关节软骨组织总RNA的OD260/OD280值均在1.80～2.00范围内,表明RNA纯度高。模型组、对照组、实验1组、实验2组、实验3组关节软骨细胞p53的mRNA相对呈高表达,而关节软骨细胞Bcl2的mRNA相对低表达,与正常组差异有统计学意义(P<0.01)。关节软骨细胞Bcl2、p53的mRNA相对表达水平,对照组、实验1组、实验2组、实验3组与模型组差异有统计学意义(P<0.01);对照组、实验1组、实验2组与实验3组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:OA护膝能提高关节软骨细胞Bcl2mRNA表达,减弱软骨细胞p53mRNA表达,从而抑制软骨细胞凋亡,延缓膝关节软骨的退变。

胰岛素样生长因子Ⅰ受体α链靶向阻断对肺腺癌细胞SPC-A-1的影响

目的 :探讨胰岛素样生长因子Ⅰ受体α链靶向阻断对肺腺癌细胞SPC A 1的影响。方法 :应用亲和层析柱和杂交瘤技术分离和提取IGFⅠRα链单克隆抗体 (IGFⅠR αMab)。将实验细胞株SPC A 1细胞分为实验组和空白对照组 ,实验组给予 2 0、4 0、6 0、80、10 0、12 0、14 0、16 0、180、2 0 0ng/ml不同浓度的IGFⅠR αMab干预。分别于第 0、2 4、4 8、72小时取出一块培养板进行检测。观察不同浓度、干预时间对SPC A 1MTT曲线、细胞形态学、超微结构、细胞周期的影响。结果 :IGFⅠR αMab干预后细胞凋亡明显增加 ,与对照组比较 ,凋亡指数 (% )分别为 10 .5 2± 2 .6 6vs5 .73± 1.88(P =0 .0 0 9)。细胞增殖率受到抑制。 0～ 16 0ng/ml浓度范围内 ,随着抗体浓度的降低 ,其抑制率相应下降 ,存在明显的剂量 反映关系。当抗体浓度大于 2 0 0ng/ml时 ,增大浓度其抑制率未见明显提高 (约 80 %～ 85 %范围 )。结论 :本研究提取的IGF1 αR单克隆抗体对IGF1Rα链具有较好亲和力。通过靶向阻断IGF1R中的α链功能对抑制SPC A 1肺腺癌细胞株增殖、促进凋亡在体外是可行的 ;提示针对IGF1

慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA含量和IL-12对其PBMC产生Th1/Th2类细胞因子影响的相关性研究

目的：研究慢性乙型肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ含量对ＩＬ－１２诱导其ＰＢＭＣ产生Ｔｈ１／Ｔｈ２类细胞因子协同效应的影响。方法：分离 ５０例慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞，分别与 ＰＨＡ（１００ ｕｇ／ｍｌ）、ＨＢｃＡｇ（１ｕｇ／ｍｌ）、ＨＢｅＡｇ（ １ ｕｇ／ｍｌ）单独或联合ＩＬ－１２（１０ ｎｇ／ｍｌ）体外培养４８ ｈ，ＥＬＩＳＡ法检测培养上清液细胞因子 ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０。荧光定量ＰＣＲ检测患者血清 ＤＮＡ含量，并分成 ＨＢＶＤＮＡ小于１０３拷贝／ｍｌ、１０３～１０５拷贝／ｍｌ、１０５～１０７拷贝／ｍｌ、大于 １０７拷贝／ｍｌ４组。结果：以 ＨＢＶＤＮＡ小于１０３拷贝／ｍｌ组做对照组，比较发现无论抗原（ＰＨＡ、ＨＢｃＡｇ、ＨＢｅＡｇ）单独诱导还是联合ＩＬ－１２共同诱导，随着血清ＨＢＶＤＮＡ含量的增高，ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ水平逐渐降低，产生ＩＬ－４和ＩＬ－１０水平逐渐升高，并且ＩＬ－１２对ＰＢＭＣ产生ＩＦＮ－γ的增殖效应逐渐减弱，特别是血清ＨＢＶＤＮＡ大于 １０７拷贝／ｍｌ患者几乎无明显增殖效应。结论：高水平血清ＨＢＶＤＮＡ含量对ＩＬ－１２诱导慢性乙型肝炎ＰＢＭＣ产生ＩＦＮ－γ协同效?

IL-12对慢性乙型肝炎患者T_(H1)/T_(H2)分化的影响

目的观察 IL- 12对慢性乙肝患者 TH1 / TH2 类细胞分化的影响。方法分离 5 0例慢性乙型肝炎患者 PBMC,分别与植物血凝素 (PHA ,10 0μg/ m L )、HBc Ag(1μg/ m L )、HBe Ag(1μg/ m L )单独或联合 IL - 12 (10 ng/ m L )体外培养 48h,EL ISA法检测培养上清液中 IL - 2、IFN -γ、IL - 4、IL - 10水平。 2 0例健康人群做对照。结果 IL - 12对健康人群 PBMC产生 TH1 /TH2 类细胞因子无显著影响 ,但对慢性乙型肝炎患者则显著增强 PBMC产生 IFN-γ,且慢性中度患者最为突出。 IL - 12与HBe Ag联合诱导 ,不但显著增强慢性乙型肝炎患者 PBMC产生 IL- 2和 IFN- γ,还抑制 IL- 4和 IL- 10的产生。结论 IL- 12可增强慢性乙型肝炎患者 IFN-γ优势表达 ,可促进 HBe Ag诱导的 TH2 型优势表达向 TH1

免疫斑点法检测NADH-细胞色素b5还原酶活性

在硝酸纤维素膜上点有抗细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）单克隆抗体，以捕捉红细胞裂解液中的ｂ５还原酶，然后用还原型辅酶Ⅰ－二氯酚靛酚－噻唑蓝底物缓冲液进行活性染色。遗传性高铁血红蛋白血症５个不同家系患者（５例）ｂ５还原酶活性检测结果均为阴性，正常对照为强阳性。本法是一种简便。

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中外周血单核细胞产生Th_1/Th_2类细胞因子的动态观察

目的:观察拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中外周血单核细胞(PBMC)产生Th_1/Th_2类细胞因子(IFN-γ/IL-10)的动态变化。方法:用ELISA法分别检测20例慢性乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前、治疗3个月、治疗6个月、治疗9个月时PBMC在PHA(100μg/ml)、HBcAg(1μg/ml)、HBeAg(1μg/ml)诱导下体外培养48h后培养上清液IFN-γ和IL-10的水平。结果:在拉米夫定治疗3个月时,无论是在非特异性抗原PHA还是特异性抗原HBcAg/HBeAg诱导下,同治疗前相比PBMC产生INF-γ和IL-10的水平无显著变化,在治疗6个月时,仅PHA诱导组产生IFN-γ的水平同治疗前相比显著升高,在治疗9个月时,备诱导组同治疗前相比,PBMC产生IFN-γ的水平显著增高,同时IL-10的水平也明显降低。结论:拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中,随着治疗时间的延长,乙型肝炎患者PBMC产生Th_1类细胞因子IFN-γ水平逐渐增强;产生Th_2类细胞因子IL-10水平逐渐减弱,提示拉米夫定治疗慢性乙型肝炎不但具有抑制病毒作用,而且长时间治疗可增强Th_1类细胞优势应答,抑制Th_2类细胞功能。

智利养老基金的运行机制及其收益率分析

智利养老基金制度因为其具有较高的收益率引人瞩目,研究其养老基金制度,并剖析其内在的机理对于完善我国养老基金制度有重要的意义。本文将以智利养老保险投资管理为典型案例,分析私有私营管理模式下智利养老保障制度的改革成果,并通过两期世代交叠模型对DC模式进行经济学分析。并总结了智利高收益率的四个原因:完全的私营化、完善的投资体系、主动承担转轨成本和借助飞速发展的经济。

PCR-RFLP检测NADH-细胞色素b5还原酶缺陷基因杂合子突变

目的：分析导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症的NADH－细胞色素b5还原酶基因突变类型。方法：PCR扩增b5还原酶基因第3和第4外显子；限制性片断长度多态分析扩增产物。结果：发现患者家系成员存在第57密码子来合于突变。结论：RFLP－PCR可望成为遗传性高铁血红蛋白血症的基因诊断方法之一。

慢性乙型肝炎在拉米呋定治疗过程中IL－12诱导的THl／TH2细胞因子反应

目的：探讨慢性乙型肝炎在拉米呋定治疗过程中IL—12对PBMC产生THI／TH2细胞因子的影响。方法：在拉米呋定治疗前和治疗3mo、6mo、9mo后，20例慢性乙型肝炎的PBMC在PHA(100μg·mL^-1)、HBcAg(1μg·mL^-1)、habeas(1μg·mL^-1)单独或联合IL—12(10ng·mL^-1)刺激下体外培养48h，收集上清液，用ELIS检测：IFN-γ和IL-10的水平。结果：在拉米呋定治疗3mo后，无论是抗原单独诱导还是联合IL-12共同诱导，PBMC产生-IFN-γ的水平同治疗前相比无显著变化；在治疗6mo后，抗原单独诱导产生IFN-γ的水平同治疗前相比无显著性差异，但IL-12诱导产生IFN-γ的增殖效应明显加强；在治疗9mo后，无论是抗原单独诱导还是联合IL-12共同诱导，PBMC产生IFN-γ的水平同治疗前相比均显著增高，同时IL-10的水平也显著降低。在治疗同一阶段，抗原联合IL-12诱导组产生IFN-γ水平明显高于抗原单独诱导组。结论：拉米呋定治疗慢性乙型肝炎过程中，随着HBV DNA的抑制，IL-l2对乙型肝炎患者PBMC产生IFN-γ协同效应逐渐增强，对IL-10的产生有抑制作用，提示拉咪呋定联合IL-12可能提高慢性乙型肝炎的疗效。

基层医院医疗废物管理现状

目的对我国基层医院医疗废物管理现状进行分析,并探讨其改进措施。方法对近年来的医疗废物处理资料进行总结和分析,针对存在的问题,提出有效措施加以防范和改进。结果医疗废物管理需要全院员工、陪护人员以及患者的共同努力,让医疗废物管理更加规范化、资源化和无害化。结论只有加大宣传、监督和检查力度,才能实现基层医院医疗废物管理的科学化、规范化、法制化以及资源化。

精子特异性透明质酸酶PH-20研究进展

精子表面PH-20是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的单链膜蛋白,特异性分布于精子表面浆膜和顶体内膜。它是一种多功能蛋白,在受精过程中具有重要作用。鉴于PH-20在精子表面的特异性分布及其在受精中的作用,PH-20作为免疫避孕候选疫苗对象一直受到关注。继续深入研究PH-20的结构与功能,将有助于全面揭示精卵结合的分子过程。

护士长在护理管理中的沟通方法与技巧的应用

护士长作为临床一线的管理者,承担着协调、连接、调遣的重大责任,而有效的沟通可以大大提高护士长的管理成效。文章就如何进行有效沟通以及采用多种方式提高沟通效率进行了阐述。

普外科患者意外脱管的原因分析及对策

探讨普外科患者发生意外脱管的原因,制定相应的对策,以预防和减少意外脱管的发生,保证医疗安全。

聚丙烯纤维对海工混凝土抗氯离子渗透能力的影响

在不同水胶比和不同养护条件下,就聚丙烯纤维对海工混凝土抗氯离子渗透能力的影响进行了试验研究。结果表明,在标准养护条件下,随着聚丙烯纤维掺量的增加对水胶比为0.30、0.40和0.50的混凝土均产生了氯离子迁移电量增加的现象,增加幅度随水胶比增加而明显增大。在标准养护28 d再沸煮8 h的条件下,沸煮后同类混凝土的氯离子迁移电量普遍均低于仅标养28 d的迁移电量,在水胶比较大(0.50)的条件下,混凝土氯离子迁移电量随聚丙烯纤维掺量增加而增加的势头经沸煮后有所减弱。水胶比为0.30、0.40和0.50时,掺聚丙烯纤维海工混凝土早期的抗氯离子渗透能力均远小于28 d龄期的抗氯离子渗透能力,其规律不同于龄期与强度的规律。

肾上腺脑白质营养不良的分子诊断（附2例报告）

目的：探讨肾上腺脑白质营养不良(ALD)的分子诊断方法。方法：在临床诊断的基础上，从2名患者外周血提取白细胞总RNA，进行反转录后，用PCR方法分四段扩增ALD基因编码区。纯化PCR产物，并对其进行序列测定。查出突变位点后，对患者家系成员的基因组DNA进行PCR-限制性酶切分析。结果：患者A的ALD基因第280位密码子发生CGC—CTC改变，使原来编码的精氨酸被亮氨酸取代(R280L突变)；患者B的ALD基因第508位密码子发生了CCC→CTC改变。使正常的脯氨酸被亮氨酸替换(P508L突变)。两个突变通过酶切分析和家系调查得到进一步确证。结论：建立了ALD的分子诊断技术，并在中国人ALD患者发现了两个新的ALD基因突变。

IL—12对干扰素α治疗的慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生细胞因子的影响

目的 探讨干扰素α治疗慢性乙型肝炎过程中ＩＬ－１２对其外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生 ＩＦＮ γ和 ＩＬ—１０的动态影响。方法 用 ＥＬＩＳＡ法分别检测 ２０例慢性乙型肝炎患者在干扰素α２ｂ治疗前、治疗 ３个月、治疗 ６个月时 ＰＢＭＣ在 ＰＨＡ（１００μｇ／ｍｌ）、ＨＢｃＡｇ（１μｇ／ｍｌ）、ＨＢｅＡｇ（１μｇ／ｍｌ）单独或联合 ＩＬ—１２（１０ｎｇ／ｍｌ）体外培养４８ｈ后培养上清液ＩＮＦγ和ＩＬ—１０的水平。结累 １２例干扰素应答患者联合ＩＬ—１２诱导，同一诱导组在治疗 ３个月和 ６个月同治疗前比较，ＩＦＮ γ水平明显增高（Ｐ＜０．０１），同一治疗阶段，单独抗原诱导和联合 ＩＬ—１２诱导相比，联台诱导组 ＩＦＮ γ水平明显增高（Ｐ＜０．０１），治疗 ３个月和 ６个月时，ＩＬ一１２对ＩＬ－１０ 的产生表现出明显的抑制作用（ＨＢｃＡｇ诱导组例外）。８例干扰素无应答患者联合ＩＬ—１２诱导，同一诱导组在治疗３个月和６个月同治疗前相比，ＩＦＮγ水平明显增高（Ｐ＜０．０１），同一治疗阶段，单独抗原诱导和联合ＩＬ－１２诱导相比，联合诱导组ＩＦＮ γ水平明显增高，并随治疗时间的延长，协同效应更为明显。结论 在干扰素治疗过程中，ＩＬ—１２对乙?

IL-12对慢性乙型肝炎患者PBMC产生IFN-γ、IL-10细胞因子的影响

为观察IL 12对不同临床分型慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC )产生Th1/Th2类细胞因子的影响。本实验分离 72例慢性乙型肝炎患者 (轻、中、重度 )PBMC ,分别与植物血凝素 (PHA ) (10 0 μg/ml)、HBcAg (1μg/ml)、HBeAg (1μg/ml)单独或联合IL 12 (10ng/ml)体外培养 4 8h ,ELISA法检测培养上清液中IFN γ、IL 10水平。 2 0例健康人群做对照。结果发现IL 12对PHA、HBcAg/HBeAg诱导健康人群PBMC产生Th1/Th2类细胞因子无协同效应 ,对慢性乙型肝炎患者PBMC产生IFN γ有显著协同增殖效应 ,慢性中度患者最为突出。同HBeAg联合诱导 ,不但显著增强慢性乙型肝炎患者PBMC产生IFN γ ,还抑制IL 10的产生。提示IL 12可增强慢性乙型肝炎患者IFN γ水平增高 ,但不同临床分型患者其增殖效应的强度不同 ;IL

芪莲茅根汤含药血清对大鼠肾小球系膜细胞凋亡相关基因表达谱的影响

目的利用cDNA基因表达谱芯片观察芪茅莲根汤含药血清干预后的大鼠肾小球系膜细胞基因表达水平的变化，通过诱导肾小球系膜细胞凋亡相关基因的表达谱变化，探讨其在凋亡信号转导途径中的机制。方法建立大鼠肾小球系膜细胞培养体系，用Trizol一步法、抽提法分别从正常对照组、含药血清组的大鼠肾小球系膜细胞中抽提mRNA，经逆转录后合成荧光分子（Cy3／Cy5）标记的cDNA探针，与含有11260个cDNA基因的大鼠12K基因表达谱芯片杂交，将图像导入分析软件Imagene进行图像分析，数据导入分析软件Genespring进行标准化处理，计算ratio值（两种荧光Cy3、Cy5的比值）。分析正常对照组、含药血清组之间差异表达的基因，对所获得的基因进行生物信息学分析。结果含药血清组与正常对照组中差异表达上调的基因147条、下调的168条；涉及参与细胞凋亡发生以及能量代谢、蛋白合成、信号转导和激活因子。与细胞凋亡相关的差异表达基因37条，占芯片基因总数的0．3286％，其中表达上调的21条（平均Ratio值为3．975），下调的16条（平均Ratio值为0．402）；生物信息学分析表明，Bcl-2、Bak1、Caspase9、Timp1、Cdk5、Pdgfra、Igfbp5、Irf1等在芪莲茅根汤含药血清诱导大鼠肾脏系膜细胞凋亡的调控中发挥了重要作用。结论芪茅莲根汤含药血清诱导肾小球系膜细胞调亡涉及多个基因，通过细胞内、外信号传导途径共同调节完成，从而调控肾小球系膜细胞的增殖。