研究生医学分子生物学课程思政的实践与思考

医学分子生物学是医学相关专业研究生的重要基础理论课程,该文通过线上线下相结合、课堂授课与课后作业相配合的方式,在广东医科大学学术型硕士研究生医学分子生物学教学中进行思政元素的有机融入,经课后调查和作业评分发现取得较好的思政效果。而且,通过对此次课程思政的实践进行思考,认识到研究生的课程思政教育应与传统的思政课程相辅相成,研究生课程思政的融入方式与本科生应有所不同,以及针对“卡脖子”问题开展研究生课程思政教育可提高思政效果,这些可为今后研究生医学分子生物学课程思政的深入开展提供一定的经验。

半边旗抗肿瘤有效成分5F的纯化及其体外增效作用

目的 寻找半边旗中二萜类有效成分之一 5F纯化的新方法 ,研究 5F对常用抗肿瘤药物的体外增效作用。方法 应用结合了AgNO3的普通层析用硅胶来纯化 5F ,应用台盼蓝拒染法测定药物对细胞的抑制率。结果 纯化后所得到的产品中 5F的含量达到 99%以上 ,是迄今为止纯度最高的产品。较低浓度的 5F分别与氟尿嘧啶 (5 Fu)、顺铂 (CD DP)及长春新碱 (VCR)合用可以增强它们对HL 60、K562细胞株的杀伤作用。结论 结合了AgNO3的普通硅胶可有效地分离纯化 5F。 5F可增强上述几种药物对HL 60、K562细胞的杀伤作用 。

一种分离与纯化半边旗有效成分5F的新方法

目的 :寻找一种有效地分离和纯化半边旗抗肿瘤有效成分 5 F的新方法。方法 :提取出半边旗成分 5 F和 4 F的混合物后 ,制备含 Ag NO3的硅胶柱 ,用此柱分离和纯化 5 F。结果 :获得 5 F和 4 F的产品 ,经测定后其纯度令人满意。结论 :含 Ag NO3的硅胶柱可以有效地分离纯化半边旗有效成分 5 F。

苹果酯和苹果酯-B的合成研究

用多种氯化物催化合成苹果酯和苹果酯－Ｂ，发现无水三氯化铝和三氯化铁是合成苹果酯和苹果酯－Ｂ的良好催化剂，氯化物催化活性序为：三氯化铝＞三氯化铁＞氯化铜＞氯化锌。

槲皮素精氨酸复合物的制备研究

目的 制备水溶性槲皮素精氨酸复合物 (QAC) ,拓宽槲皮素的给药途径。方法 取一定量槲皮素 (QUE)和 L-精氨酸在乙醇中回流制备 QAC,通过胶束纸色谱 ,紫外吸收光谱、红外吸收光谱和 X射线衍射图谱对 QAC进行结构鉴定。结果 摩尔比为 1∶ 1的 QU E和 L -精氨酸形成了 QAC,并且 QAC常温下稳定存在。与 QUE比较 ,QAC的水溶性明显增大 ,仍然对抑制细胞生长具有较强的活性。结论 该制备方法简捷实用 ,有助于提高 QUE的生物利用度。

HPLC法测定apoA-1介导的泡沫细胞胆固醇流出的实验研究

目的建立用高效液相色谱(HPLC)法测定载脂蛋白A-1(apoA-1)介导的泡沫细胞内胆固醇流出率的实验方法。方法人单核细胞THP-1用160nmol/L佛波酯(PMA)诱导24h分化为贴壁巨噬细胞(PMA组),再用50μg/mL乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)处理48h,诱导巨噬细胞变成泡沫细胞(ac-LDL组);加入含apoA-1的1640培养基培养24h(apoA-1组)。油红O染色和HPLC法测定细胞内胆固醇水平,鉴定巨噬细胞源性泡沫细胞模型。采用HPLC分析和液体闪烁计数法测定apoA-1介导的泡沫细胞内胆固醇流出率。结果 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经油红O染色后,细胞内可明显观察到大量红色脂滴存在。胆固醇水平测定显示,ac-LDL组内游离胆固醇、总胆固醇和胆固醇酯的水平明显高于PMA组(P<0.01)。ac-LDL处理细胞48h后,ac-LDL组内总胆固醇水平为80.25μg/mg细胞蛋白,胆固醇酯水平为47.65μg/mg细胞蛋白,占总胆固醇的59.38%,与PMA组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。HPLC分析和液体闪烁计数法结果表明,apoA-1介导泡沫细胞内apoA-1组胆固醇流出率分别为5.63%和7.08%(P<0.01)。结论本研究成功建立了酶促反应结合HPLC测定泡沫细胞内胆固醇流出的方法,为后续研究细胞脂质代谢提供了实验基础。

液质联用对半边旗二萜类活性成分分离富集方法的研究

运用高效液相色谱 -质谱联用技术研究了以大孔吸附树脂富集分离 ,并以AgNO3-硅胶柱分离纯化半边旗二萜类活性成分的方法。采用[M -H]-为选择监测离子 ,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积跟踪监测目标成分 ,探讨最佳分离条件 ;以萃取产物的总离子流图 (TIC)和质谱图评价提取产物的纯度。研究表明 ,大孔吸附树脂对5F和4F具有一定的分离富集作用 ;AgNO3-硅胶柱可以分离纯化5F。本实验对复杂基体中化学结构上仅相差1个双键、相对分子质量相差2的5F和4F(无紫外吸收 )进行了分析鉴定 ,获得满意结果。

脑胶质瘤细胞体外促进人骨髓间充质干细胞肿瘤相关基因表达

目的观察与人脑胶质瘤细胞共培养后的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells,h MSCs)中肿瘤相关基因表达的变化,初步评估h MSCs在人脑胶质瘤环境中的生物安全性在致瘤性方面的风险。方法将h MSCs与人脑胶质瘤细胞U251于体外共同培养5d后,通过肿瘤基因芯片、实时定量RT-PCR及Western-blot实验检测h MSCs中肿瘤相关基因表达水平的变化。结果基因芯片结果显示,与单独培养的h MSCs对比,与人脑胶质瘤细胞U251共同培养后的h MSCs中存在SPINT2、TK1、STC1、MMP1、CCND1、SORT1、SEPT6、CDC20、SHB、CDK5、RELA、XRCC4、KIT、CTPS、CAPNS1及ETV6等16个肿瘤相关基因的表达明显上调(3倍以上),而无一基因表达下调;实时定量RT-PCR结果显示癌基因KIT、CAPNS1、TK1、MMP1、CCND1、CDC20、RELA以及STC1在共培养组h MSCs中呈表达上调;Western-blot结果显示癌基因KIT、MMP1、CCND1以及RELA的蛋白水平在共培养组h MSCs中呈表达上调。结论 h MSCs在脑胶质瘤细胞的影响下可出现部分癌基因的高度表达,提示了对于h MSCs应用于对脑胶质瘤进行基因治疗的生物安全性在致瘤性方面的风险需引起关注及深入研究。

芦荟大黄素对人永生化角质形成细胞增殖和凋亡作用研究

目的研究芦荟大黄素（AE）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的生长抑制效应和诱导细胞凋亡能力，探讨其治疗银屑病的可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测芦荟大黄素对HaCaT细胞增殖的抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态学变化，流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡。结果芦荟大黄素质量浓度在20～80μg／mL范围内可抑制HaCaT细胞增殖且呈剂量依赖性；镜下观察到细胞稀疏，生长减慢，细胞形态拉长，细胞被阻滞于S期而凋亡。结论芦荟大黄素能抑制HaCaT细胞的增殖、诱导HaCaT细胞的凋亡。可用于治疗银屑病。

抗癌草药半边旗微量元素含量的分析

用等离子体发射光谱法测定了广州和化州两地区半边旗的25种元素。在检出的20种元素中，含有人体必需的微量元素Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo、Ni、Cr、V，以Zn、Mn、Fe、Cu等元素含量较高，这为研究微量元素对半边旗的生长和抗癌作用的影响提供了启示。

琼脂糖粉的质量对PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳的影响

目的:研究琼脂糖粉的质量对聚合酶链式反应(PCR)产物琼脂糖凝胶电泳的影响。方法:PCR产物琼脂糖凝胶电泳中分别使用不同牌子的琼脂糖粉,同时跑胶图像。结果:质量差的琼脂糖粉电泳结果有明显弥散现象,而更换高质量的琼脂糖粉,未见弥散现象。结论:琼脂糖粉质量在分子生物学PCR产物琼脂糖凝胶电泳实验中扮演重要角色,使用高质量的琼脂糖粉对实验的成功至关重要。

我院生物化学与分子生物学重点学科的建设与成效

阐述了广东医学院生物化学与分子生物学重点学科的建设情况与成效,指出规范学科管理制度,明确学科研究方向,培养高素质的学科人才,加强实验室建设是该学科实施重点学科建设的关键。

辛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的抑制作用

目的研究辛伐他汀(SIM)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的抑制作用。方法MTT法检测SIM对HO-8910PM细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析SIM对细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变。结果SIM抑制HO-8910PM细胞的增殖,细胞被阻滞在G0/G1期;荧光染色法显示经SIM作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体。结论SIM在体外能有效地抑制癌细胞的增殖,其作用可能是通过诱导其凋亡产生的。

徐闻珊瑚礁自然保护区可培养富脂海洋微藻的生物多样性

从徐闻珊瑚礁自然保护区（20°10′–20°27′N,109°50′–109°24′E）潮间带采集海水和泥沙样品,用f/2-medium培养液富集培养其中的海洋微藻,采用基于96孔板的＂稀释分配＂结合＂微吸管剔除＂的方法分离培养海洋微藻,采用微藻形态学观察、18S rDNA序列分析及其系统进化树构建的方法分析鉴定分离培养的藻株,采用尼罗红染色法检测和分析海洋微藻细胞中的脂质。目的就是要分析研究徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带可培养富脂海洋微藻的生物多样性,为富脂海洋微藻的研究开发奠定基础。结果分离、培养、鉴定并储藏了118株海洋微藻（Genbank登录号为KU561102-KU561219）,含48个种,分布于硅藻门（Bacillariophyta）、绿藻门（Chlorophyta）和定鞭金藻门（Haptophyta）3个门的6纲、22目、24个科、28个属。其中,有37株为富脂微藻,含22个种,分布于硅藻门和绿藻门2个门的4纲、11目、12个科、16个属;优势属为双眉藻属（Amphora）,含22株,占分离培养藻株的18.6%;含脂量最高的种群为辐节藻属（Stauroneis）,含Stauroneis anceps,Stauroneis gracilior,和2株Stauroneis kriegeri,共4株海洋微藻。这表明徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带可培养的富脂海洋微藻的物种丰富多样,可能是发掘多不饱和脂肪酸和生物柴油的理想资源。

蒙古长爪沙鼠颌下静脉丛真空采血法探讨

目的探讨蒙古长爪沙鼠(Mongolian gerbil)颌下静脉丛真空采血的技术与方法,提高蒙古长爪沙鼠实验的成功率。方法选取40只蒙古长爪沙鼠,麻醉后将静脉输液针刺入颌下静脉丛血管取血。结果成功获得沙鼠静脉血,每只沙鼠的采血量可达0.3-0.6 m L。结论此方法可多次重复采血,血液标本质量高,创伤小,是一种简便、安全、采血量多的采血方法。

慢病毒法建立稳定表达HPV-16 E6癌蛋白的肺癌细胞株

目的方法结果结论(HPV)-16 E6DNA HPV-16 E6(PLIG)(PLIG-E6)293T NCIH460 G418 4 DNA PCR Western blotting NCIH460 HPV-16 E6 DNA NCI-H460 HPV-16 E6 DNA HPV-16 E6探讨慢病毒法建立人乳头瘤病毒癌蛋白表达肺癌细胞株的可行性。采用重组技术将基因插入到含有增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒质粒载体中,获得重组慢病毒载体,经双酶切和测序鉴定正确后,与慢病毒包装载体一起转染细胞,收集病毒液,测定滴度后,感染肺癌细胞株。经筛选培养周后,提取细胞基因组和蛋白,分别用和方法分析细胞中和蛋白的表达。双酶切及测序结果表明重组慢病毒表达载体构建成功;感染慢病毒液的细胞中可检测出和蛋白表达。用慢病毒法成功构建稳定高表达癌蛋白的肺癌细胞株。

饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸对肺癌细胞增殖与自噬的影响

目的研究饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸对肺癌细胞增殖与自噬的影响。方法用0、30、60、120、240μmol/L硬脂酸(饱和脂肪酸)和DHA(不饱和脂肪酸)分别处理肺癌细胞A549,绘制细胞生长曲线并计算克隆形成率以检测细胞增殖。采用硬脂酸和DHA分别处理A549细胞24h后,采用激光共聚焦显微镜从形态学方面观察细胞自噬情况。采用硬脂酸和DHA分别处理A549细胞12、24、36h后,用Western blotting检测细胞自噬相关蛋白的表达。结果30~240μmol/L硬脂酸和DHA均有抑制A549细胞增殖的作用(P<0.05),硬脂酸、DHA处理A549细胞24h后均检测到细胞出现明显的自噬;Western blotting结果显示,硬脂酸、DHA分别处理A549细胞12、24、36h后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(ser2481)磷酸化水平降低(P<0.05)。结论饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸均有抑制肺癌细胞增殖、诱导肺癌细胞自噬的作用,其机制可能与p-m TOR(ser2481)信号通路有关。

湛江沿海海洋微藻及其多糖、脂类和蛋白藻株多样性研究

从硇洲岛和徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带采集的海水和沉积物样品中分离培养海洋微藻,筛选其中富含多糖、脂类或蛋白质的藻株。采用形态学观察、18S r DNA序列比较及其系统发育分析法,对分离培养的海洋微藻及其富含多糖、脂类或蛋白质的藻株进行分类鉴定和生物多样性分析。分离、培养、鉴定并储藏了189株海洋微藻,归属于65个种,分布于硅藻门(Bacillariophyta)、绿藻门(Chlorophyta)、定鞭藻门(Haptophyta)和红藻门(Rhodophyta)的9纲、25目、30个科、38个属;其中多糖含量较高的46株海洋微藻,分布于25个种,20个属;脂类含量较高的46株海洋微藻,分布于32个种,15个属;蛋白含量较高的46株海洋微藻,分布于28个种,18个属。结果表明硇洲岛和徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带可培养的海洋微藻及其富含多糖、脂类和蛋白质藻株的物种多样性丰富,在新型药物、活性天然产物、功能食品和饲料及其添加剂的发掘等方面具有良好前景。