重组酶辅助扩增结合CRISPR/Cas13a检测禽腺病毒4型方法的建立

【目的】建立高效、灵敏、特异的禽腺病毒4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)检测方法。【方法】将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats associated protein 13a,CRISPR-Cas13a)技术相结合,针对FAdV-4 Hexon基因保守区设计RAA引物及CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a荧光检测,以qPCR为对照方法,评价所建立方法的灵敏度、特异性以及与qPCR法的一致性。【结果】本研究所建立的方法反应过程均在37℃恒温条件下完成,反应体系可检测的最低扩增拷贝数为101 copies/μL,灵敏度高,且与FAdV-1、FAdV-7、FAdV-8b、FAdV-9、FAdV-10、鸡传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感H9亚型疫苗和新城疫病毒等禽病原核酸检测无交叉反应。该方法检测30份临床样本与qPCR检测的阳性检出率一致。【结论】建立的RAA-Cas13a方法检测FAdV-4具有简便、灵敏、特异等特点,可用于FAdV-4的快速检测和流行病学监测。

鸡大肠杆菌病的常见类型与防治

鸡大肠杆菌病可发生于各种品种和日龄的鸡,一年四季都有报道,环境卫生条件差,饲养管理水平低的养殖场最易流行。根据临床表现不同,本病有败血症型、肠炎型、眼炎型、脐炎型等类型。预防本病需提高鸡场管理水平,做好场内消毒工作,对大肠杆菌敏感的抗生素是治疗本病的最佳药物,配合使用微生态制剂、鱼肝油、电解多维、黄芪多糖等可缩短疗程。

猪结节虫病的预防与治疗

猪群生长发育过程中,如果环境卫生条件较差,在管理不善或饲养密度过大等应激条件下,容易诱发感染猪结节虫病。猪结节虫病由结节虫寄生在猪结肠壁中而引起,呈地方流行,虫体的发育史不需要中间宿主,主要感染成年猪和育肥后期猪,环境卫生差、管理水平低、场内有大量水坑或湿草的养殖场易发生;预防本病需做好猪场环境卫生管理,禁止饲喂湿的牧草,定期监控粪便带虫情况,必要时进行药物预防。

口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达

为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2L基因,并将此基因序列及其推导的氨基酸序列与其他不同来源的ORFV分离株进行比较。结果显示,AH-GY13株与选取的10株毒株的核苷酸序列同源性在97.4%~99.3%之间,氨基酸同源性在97.9%~99.7%之间;进化树分析显示,此毒株与辽宁省分离株属于同一分支。将该基因定向插入到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-32a（＋）-B2L。转化BL21,经IPTG诱导,B2L基因获得表达,以包涵体的形式存在,通过优化诱导时间和IPTG的浓度,确定了表达B2L基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导4 h。Western-blot分析表明,表达产物具有良好的免疫活性。上述结果为进一步研究ORFV B2L囊膜蛋白的结构与功能奠定了基础。

鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

目的用RT-PCR技术扩增鸭坦布苏病毒(DTMUV)AH-F10株E基因,并克隆至pET32a(+)载体,构建重组表达质粒pET32a-E,表达E蛋白。方法重组表达质粒转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后,获得含6个His标签的融合蛋白,大小约54kDa。表达的蛋白以包涵体形式存在。对目的蛋白进行纯化,用纯化的E蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体血清。结果SDS-PAGE和Western blot试验结果表明E基因在大肠埃希菌中成功表达,并能与抗DTMUV多克隆抗体产生特异性反应,具有良好的反应原性。间接免疫荧光试验表明免疫小鼠后获得的多克隆抗体能与DTMUV反应。结论本研究为DTMUV新型疫苗和诊断试剂盒的进一步研究奠定了基础。

挠曲电圆板的振动模态

梁、板和壳作为基本力学结构在微机电系统和纳机电系统中广泛用作传感器、驱动器、能量俘获器等。深入理解这些电介质结构的力电耦合有助于微纳机电系统中结构的设计、制备和优化。本文中,我们阐述了曲电圆板的力电耦合行为,其中通过引入应变梯度将经典力电耦合理论拓宽到中心对称各向同性,并考虑了电势沿径向非均匀分布的影响.挠曲电圆板的振动模态的解析解表明其与压电圆板的振动模态完全不同,这是由于应变梯度局部破坏晶体的反演对称从而在圆板中引起的力电耦合导致的.力电耦合振动模态对弯曲和扭转模态更加敏感,本文给出了挠曲电圆板的基本认知,其有助于设计新型挠曲电圆板器件,例如挠曲电反射镜等.