丁酸梭菌在不同肠道内微生物环境下对雏鸡空肠发育、肠屏障功能和生长性能的影响

本研究旨在探究丁酸梭菌在不同肠道微生物环境下对宿主的影响效果。通过粪菌移植将雏鸡肠道内微生物环境改造为成年鸡肠道内微生物环境,每只雏鸡饲喂0.5 m L菌液。在饲料中添加丁酸梭菌测试其对雏鸡的影响,丁酸梭菌浓度为109CFU/kg。将144只1日龄雏鸡平均分为四组:对照组(CON组)、粪菌移植组(FMT组)、丁酸梭菌组(CB组)和联合处理组(CT组)。CON组饲喂生理盐水和正常雏鸡饲料,FMT组饲喂菌液和正常饲料,CB组饲喂生理盐水和加了丁酸梭菌的饲料,CT组饲喂菌液和添加丁酸梭菌的饲料。结果表明:CB组14日龄雏鸡体重显著高于CON组8.45%(P <0.05),7日龄雏鸡肠道重量极显著低于CON组22.45%(P <0.01),7日龄空肠绒毛高度比隐窝深度(绒腺比)显著高于CON组20.20%(P <0.05),7日龄和14日龄雏鸡空肠claudin-1基因相对表达量显著高于CON组32.10%和50.49%(P <0.05),7日龄雏鸡空肠MUC2基因相对表达量极显著低于CON组56.44%(P <0.01);CT组14日龄雏鸡体重显著高于FMT组7.25%(P <0.05),21日龄雏鸡肠道重量显著高于FMT组10.06%(P <0.05),7日龄雏鸡空肠MUC2基因相对表达量极显著低于FMT组60.82%(P <0.01)。总的来说,添加丁酸梭菌会对生命早期的雏鸡肠道发育造成一定的不良影响,却会促进肠道绒毛的发育,并促进雏鸡肠道连接蛋白claudin-1基因高表达,抑制黏蛋白基因的表达并促进14日龄左右的雏鸡体重增长速率。在成年鸡肠道菌群环境下,丁酸梭菌对生命早期的雏鸡肠道发育没有负面影响,对雏鸡肠道绒毛的发育也没有明显的促进作用,只是促进了雏鸡体重增加,并在雏鸡7日龄左右抑制了肠道黏蛋白的基因表达。

Marc-145细胞培养条件摸索及其初步应用

Marc-145细胞,上皮样细胞,来源于猴肾细胞,从母细胞(Ma-104细胞)克隆而得到,可连续传代培养。此细胞主要用于病毒的培养,特别是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对此细胞尤为敏感,本试验主要研究Marc-145的适宜培养条件,以及PRRSV野毒株在该细胞中的增殖。

猪生长激素抗独特型抗体的制备及生物活性检测

【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信号转导蛋白JAK2。【结论】CG1抗体可与鼠肝脏细胞表面的生长激素受体特异性地结合,并可磷酸化信号转导蛋白JAK2。

猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)CH-IR株单克隆抗体的制备

用纯化的猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,使脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,4次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3D6),经鉴定,该单抗为IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条,杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1∶512和1∶20480。这株单克隆抗体与伪狂犬病毒、猪丹毒、猪细小病毒均不发生交叉反应,显示出良好的特异性。连续培养20代后能稳定分泌抗体,此单克隆抗体的获得为PRRSV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。

生物活性肽的研究进展

生物活性肽属于多功能因子。随着各种生物活性的不断发现,对其生理功能的不断探究,生物活性肽越来越受到人们的关注。作者对不同来源的生物活性肽,依其不同的生理功能进行了综述,以期为生物活性肽的研发提供参考。

生长激素激活受体机理的研究进展

生长激素(growth hormone,GH)是一种含有191个氨基酸的多肽类激素,分子质量为22ku,由垂体前叶分泌进入血液循环,与靶细胞膜表面以二聚体形式存在的生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)相结合。对于受体的激活来说,仅是二聚化还不够,还需在GH的诱导下发生构象变化,进而才能诱发Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)的酪氨酸磷酸化,并通过4条不同的路径将信号传入细胞内,从而发挥代谢、增殖及分化等一系列生理效应。作者就生长激素与受体的结构、作用机理、信号转导通路的进展进行综述。

生长激素受体介导的信号转导机制研究进展

生长激素(growth hormone,GH)对动物的生长发育具有重要的生理作用。GH与生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)结合后才会发挥一系列的生理作用。近年来,人们对GHR结构和功能的研究取得了巨大的进展,并取得了一些重大的突破。现在已清楚了GH-GHR轴激活一些相关的信号转导通路,但并非所有的通路都依赖酪氨酸激酶。作者从以下几个方面总结了GHR作用下的信号转导机制的研究进展:GHR的结构与功能;依赖JAK2的相关信号通路;不依赖JAK2的相关信号通路;GHR信号负调控因子。阐明这些复杂机制,对进一步了解GH对动物不同的生理和病理作用具有重要意义。

虾青素对小鼠肝脏原代细胞氧化应激的影响

【目的】研究虾青素对过氧化氢(H_2O_2)诱导小鼠肝脏原代细胞产生氧化应激的影响。【方法】原位二步灌流法提取ICR小鼠的肝脏原代细胞,用丙二醛(Malondialdehyde,MDA)作为指标、采用H_2O_2处理建立氧化应激模型。采用流式细胞仪测定细胞中活性氧(Reative oxygen species,ROS)含量及凋亡水平变化,生物化学法测定细胞中MDA和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的含量、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性,用荧光定量PCR检测抗氧化酶SOD、GSH-px mRNA的相对表达量,Western-blot检测细胞核中Nrf2蛋白相对表达量。【结果】使用5μg·mL^(–1)虾青素预保护细胞3 h,10μmol·L–1H_2O_2刺激3 h的情况下氧化应激模型效果最好。虾青素降低了H_2O_2诱导后小鼠肝脏原代细胞的细胞凋亡率以及ROS、MDA和GSH含量,提升了SOD、GSH-px的活性以及SOD、GSH-px的mRNA相对表达量,抑制了Nrf2蛋白的核转移。【结论】虾青素对H_2O_2诱导产生氧化应激的肝脏原代细胞具有保护作用。

抗鹿源牛病毒性腹泻-粘膜病病毒特异性单克隆抗体的制备与鉴定

为建立鹿源牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(BVDV)检测方法,本研究制备了抗鹿源BVDV特异性单克隆抗体(MAb)。用纯化的BVDV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得2株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株2A3和4B12。通过间接ELISA检测,MAb效价为:上清液及腹水分别为1∶512、1∶640和1∶12800、1∶16000;MAb的亚类鉴定结果表明,2株杂交瘤细胞分泌的抗体亚类均为IgGl亚类;经ELISA测定,2A3和4B12与BVDVC24V株、HCV、BDV、PRV均不发生交叉反应,但与BVDVCCSYD株发生交叉反应;IFA试验结果显示,4B12和2A3与接种BVDVN71株病毒液的细胞反应产生较强的特异荧光;抗原识别位点分析结果表明,2A3和4B12两株MAb所识别的抗原位点相同。这两株MAb的获得为鹿BVDV的检测方法的建立奠定良好的基础。

生长激素促进细胞增殖机理的研究进展

生长激素(growth hormone,GH)对动物的生长发育具有重要的作用,其直接或间接通过诱导胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)促进干细胞的活化、细胞增殖和分化,并通过细胞膜受体发挥作用启动一系列信号通路。文章就生长激素对细胞增长的作用和功能进行简要概述。

干细胞的研究进展

干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞群体,它能长期地自我更新,在特定的条件下具有分化形成多种终末细胞的能力。近年来对干细胞的研究与应用几乎涉及到所有生命科学和生物医学领域。作者概述了干细胞的生物学特性和可塑性,并综述了干细胞可塑性及应用方面的最新研究进展。

大鼠原代肝脏细胞的分离培养及其膜受体鉴定

本研究采用改良的两步胶原酶灌流法分离培养大鼠肝脏细胞,并对其进行了形态学观察、功能检测及表面受体的鉴定,以探索其短期培养的最佳功能状态。结果表明,平均每只大鼠可获取2.12×108个肝脏细胞,平均活率达94.23%;光镜下观察发现肝脏细胞呈多角形并成片生长;对肝脏细胞的LDH、Alb和尿素进行连续检测,结果发现细胞离体培养第3天功能较好;Mab263-PE单抗鉴定结果显示,肝脏细胞生长激素受体功能健全尚未受损,为细胞信号转导等相关试验奠定了基础。

生物活性肽的生理功能及在动物生产中的应用

英国科学家Bayliss等^[1]从动物胃肠中发现了促胰腺素，这是人类首次发现活性肽类的物质。生物活性肽（Biologic allyactive peptides，BAP）是由25个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的，分子量一般小于6000Da，在构象上比较松散，是对生物机体的生命活动有益或具有特定生理作用的多功能化合物的总称^[2]。其易消化吸收，并对生物体有降血压、降胆固醇、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、提高机体免疫力等作用，在生产中能够改善饲料的适口性、提高动物生产性能，食用安全性较高。

干细胞可塑性的研究现状

近年来随着研究的深入,人们发现干细胞的分化潜能比先前的认识更加广泛,即干细胞具有可塑性。但目前关于干细胞可塑性的机理还存在争议,文章对目前干细胞可塑性机理的几种假说及存在的问题进行了概述。

胰腺干细胞体外诱导分化研究进展

胰腺干细胞是一种多能干细胞,具有无限分裂和永久自我更新的能力,可在特定因素的影响或诱导下,分化成胰腺导管、胰岛、外分泌腺泡等特定胰腺组织类型,甚至肝细胞。由胰腺干细胞诱导分化的胰岛β细胞在治疗Ⅰ型糖尿病和纠正部分Ⅱ型糖尿病中具有重要意义。论文就胰腺干细胞的存在部位、诱导干细胞为胰岛β细胞的生物活性物质、诱导分化为胰腺β细胞的方法及调控胰腺干细胞分化的信号通路等方面做一综述。

信号转导与转录激活因子5的结构与功能研究进展

信号转导与转录激活子5(signal transducer and activator of transcription,STAT5)作为一种重要的信号转导与转录激活子,能被多种细胞因子和多肽类激素激活,引起靶基因的转录。参与调控细胞的增殖、分化及凋亡,并对生物体的生长、造血和免疫应答具有重要意义,其活性的高低与肿瘤的发生和发展关系密切。作者重点阐述了STAT5的结构和生物学功能。

猪生长激素ELISA检测体系的建立

为进行猪生长激素检测体系的探索研究,分别以自制猪生长激素单克隆抗体及兔抗猪生长激素IgG就影响检测ELISA(酶联免疫吸附法)体系因素进行探讨。结果显示,猪生长激素单克隆抗体的最适操作参考值为:最佳单抗包被的浓度为3μg/mL,4℃过夜为最佳包被条件,羊血清采用5%浓度封闭1h,最佳兔抗猪生长激素IgG的工作浓度为2μg/mL。

猪SIgA分泌片的分离纯化及其多克隆抗体的制备

为制备抗分泌片多克隆抗体,采用分子筛凝胶层析、离子交换层析和硫酸铵盐析法从猪初乳中分离纯化分泌片和SIgA。SDS-PAGE鉴定表明,纯化的SIgA呈现分泌片、重链和轻链三条带,大小约为70 ku;凝胶薄层扫描分析SIgA和分泌片纯度分别为90%和89%;琼脂扩散鉴定表明,SIgA和分泌片与抗分泌片单克隆抗体发生了特异反应。以纯化分泌片为抗原,制备抗分泌片多克隆抗体,琼脂扩散检测多抗的效价为1∶32。高纯度分泌片的提取及高效价抗分泌片多抗的制备为粘膜免疫研究奠定了物质基础。

PRRSV重组M蛋白表达及胶体金试纸的制备

为建立PRRSV抗体的检测方法,通过扩增PRRSV ORF6基因,将其克隆至pET-28a(+)中,IPTG诱导重组质粒转化菌表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,表明重组质粒能够表达目的蛋白;经亲和层析纯化表达蛋白,以SPA标记胶体金,用纯化M融合蛋白和羊抗猪抗体为检测线和质控线研制胶体金试纸,检测猪血清样品,比较与IDEXX ELISA试剂盒检测结果的符合率。结果表明,表达蛋白具有良好的反应性,制备的胶体金试纸与IDEXX ELISA试剂盒检测符合率为89%,该方法为PRRSV抗体的检测提供了快速简便的方法。

妊娠母鼠饲喂叶黄素对初生仔鼠体质量及血清和消化道免疫球蛋白的影响

为明确妊娠母鼠添加饲喂叶黄素对初生仔鼠免疫功能的影响,对妊娠母鼠添加饲喂叶黄素后检测母鼠产前14 d内体质量变化、母鼠产前第14天至产后第14天日采食量变化、仔鼠出生后14 d内体质量变化以及出生第7天和第14天仔鼠血清、胃内容物和粪便中免疫球蛋白A(immunoglobulin A,Ig A)和免疫球蛋白G(Ig G)含量变化。结果表明:母鼠体质量、母鼠日采食量、仔鼠出生后6 d的体质量均没有显著变化(P>0.05);实验组仔鼠出生后7~14 d的体质量显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,实验组仔鼠出生第7天和第14天血清中和胃内容物中Ig G含量均显著升高(P<0.05,P<0.01),而粪便中Ig G含量与对照组无显著性差异(P>0.05);实验组仔鼠第7天和第14天胃内容物中Ig A含量极显著高于对照组(P<0.01),而血清和粪便中Ig A含量虽呈升高趋势,但与对照组无显著性差异(P>0.05)。实验结果说明给妊娠母鼠饲喂叶黄素可以增强初生仔鼠的免疫能力。