二甲基亚砜对体外培养眼组织细胞的毒性作用

背景 二甲基亚砜（DMSO）是常用的药物助溶剂,但DMSO体积分数较高时对细胞有毒性,可能影响对受试药物的正确评价,所以确定不同眼组织细胞对DMSO的敏感性十分重要. 目的 探讨DMSO对体外培养的多种眼组织细胞的最小毒性体积分数,为眼部药物的体外筛选提供依据. 方法 采集青紫蓝兔的视网膜色素上皮（RPE）细胞进行培养,并利用免疫组织化学法进行鉴定.分别对人视网膜色素上皮细胞株（ARPE19）、巩膜成纤维细胞（S75-Fron）、Müller细胞（MIO-M1）、人晶状体上皮细胞（HLEC）、人眼葡萄膜黑色素瘤细胞（OCM-1）、人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）进行体外培养.取160μl DMSO溶液和9.84 ml含体积分数2％胎牛血清（FBS）的RPM I1640或DMEM/F12或DMEM培养液配制体积分数分别为1.6％、1.0％、0.8％、0.4％、0.2％和0.1％ DMSO的RPMI1640、DMEM/F12和DMEM培养液,在培养的各种细胞中分别加入不同体积分数的DMSO培养液作用96 h,采用MTS法检测各组细胞的吸光度（A）值. 结果 培养的兔原代RPE细胞对细胞角蛋白（CK）和HMB45呈黄绿色荧光,细胞质和细胞核内S100阳性反应呈红色荧光.随着DMSO体积分数的增加,各细胞活性（A值）逐渐降低,随着DMSO体积分数的增加,ARPE19、S75-Fron、HLEC、OCM-1、HUVEC和原代RPE细胞活性（A值）均明显下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,当DMSO体积分数≥0.8％时,RPE细胞活性均明显低于空白对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,但MIO-M1细胞株活性的差异无统计学意义（F=0.830,P=0.547）.DMSO对ARPE19、HUVEC、HELA、HLEC、MIO-M1、OCM-1、原代RPE细胞和S75-Fron细胞最低有毒体积分数分别为0.8％、0.1％、0.8％、＞1.6％、＞1.6％、0.2％、0.2％和0.2％,HUVEC对DMSO的毒性最敏感,在0.1％ DMSO情况下即显示出毒性（P=0.02）,而MIO-M1细胞在1.6％ DMSO的情况下仍未显示出毒性作用（P=0.39）.HUVEC和原代RPE细胞活性随DMSO体积分数的增加而下降,S75-Fron细胞活性在DMSO体积分数为0.1％时开始下降,之后虽然DMSO体积分数增加,但细胞活性保持平稳,当DMSO体积分数增至1.6％时,S75-Fron细胞活性进一步下降,MIO-M1细胞活性在不同体积分数的DMSO组无明显变化. 结论 DMSO在体外实验中的细胞毒性随体积分数的增大而增强,在达到助溶效果的情况下应选用最小体积分数的DMSO,同时设与样品中DMSO相同体积分数的DMSO对照.

Avastin在翼状胬肉治疗中药动学研究及临床疗效评估

目的探讨阿瓦斯汀(Avastin)在翼状胬肉治疗中的药代动力学变化,并探讨不同浓度Avastin对预防翼状胬肉术后复发的效果。方法选取翼状胬肉患者200例,分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和对照组,各50例,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组于术前3d分别给予浓度为0.15、0.5、1.5 mg/mL的Avastin滴眼液治疗,结果3组优化指数G差异有统计学意义(P<0.05),Ⅱ组优化指数G最高。结论0.5 mg/mL为最低安全有效浓度,将此浓度Avastin滴眼液用于翼状胬肉治疗中效果显著,可明显降低复发率,安全性良好。

眼部应用国产曲安奈德混悬液安全性的实验研究

目的 评价国产曲安奈德及醋酸曲安奈德混悬液眼部应用的安全性.方法 实验研究.通过体外将曲安奈德和醋酸曲安奈德混悬液的上清液稀释成不同比例后,用MTT比色法评价其上清液中的防腐剂和赋形剂对3种人眼细胞株的细胞毒性;选取28只健康豚鼠,根据计算机（SAS软件）生成的随机数字均分为4组,分别在豚鼠右眼的玻璃体腔注射曲安奈德或醋酸曲安奈德的上清液18μl和混悬液6μl.给药前后通过裂隙灯、间接检眼镜、眼压计、眼电生理检查及组织学石蜡切片来评价其玻璃体腔应用的安全性.体外细胞毒性研究采用Dunnett-t检验,眼电生理数据采用配对t检验,眼压数据比较采用重复测量统计方法广义估计方程.结果 未经稀释的曲安奈德和醋酸曲安奈德上清液对人眼后巩膜成纤维细胞的MTT值分别为0.046±0.036和0.044±0.05,与其各自的标准品上清液对照组（0.367±0.106和0.413±0.128）和BSS空白对照组（0.368±0.106和0.441±0.137）相比,差异均有统计学意义（P值均＜0.01）.醋酸曲安奈德的上清液经1∶15或更高倍数的稀释后对人RPE细胞无细胞毒性（P＞0.05）,但1∶15稀释的上清液对人Müller细胞有细胞毒性（MTT值为0.366±0.062,BSS对照组和上清液对照组的MTT值分别为0.417±0.042和0.399±0.045）（P=0.03）;曲安奈德的上清液经1∶15或更高倍数的稀释对RPE及Müller细胞均未显示细胞毒性.豚鼠玻璃体腔注射这两种制剂的混悬液6μl（含药物0.25 mg,相当于人眼玻璃体腔注射0.1 ml含4 mg曲安奈德的混悬液）或上清液18μl（相当于兔眼玻璃体腔注射0.1 ml含4 mg曲安奈德混悬液中含有的防腐剂浓度）均未见眼内毒性.结论 豚鼠玻璃体腔注射6μl曲安奈德和醋酸曲安奈德混悬液均是安全的,该剂量相当于人眼玻璃体腔注射0.1 ml（含4 mg）曲安奈德混悬液.

灰兔眼巩膜厚度测量

目的测量灰兔不同部位巩膜厚度，了解巩膜部位与厚度变化关系，为经巩膜眼内给药实验研究提供诠释依据。方法实验研究。49只（98眼）成年青紫蓝灰兔经麻醉后，安乐液处死，立即摘去眼球．随后放人1-25％戊二醛和l％多聚甲醛固定液固定，制成石蜡切片后行常规苏木精一伊红（HE）染色。经生物显微镜观察拍照后用图像分析软件测量从角巩膜缘部到视神经部的巩膜厚度。对测量结果采用广义估计方程（GEE）及Tukev’sHSDPostHoeTest分析。结果下半部分兔眼巩膜比上半部分巩膜薄，分别是（342．9±91．3）μm和（400．4±67．6）μm（X2=43．57，P〈0．01，GEE）。上半部分巩膜厚度在赤道前后及后极部差异无统计学意义，平均为（366．8±56．3）μm。下半部分巩膜厚度在赤道前和赤道部为（340．9±72．5）μm和（340．8±76．3）μm，往后进一步变薄，赤道部后为（293．9±57．4）μm，后极部为（209．0±51．8）μm。上半部分和下半部分巩膜均在神经处最薄，分别为（273．5±90．5）μm和（187．7±60．1）μm，与其他部位相比，差异有统计学意义（P〈0．05，Tukey＇sHSDPostHoeTest）。结论兔眼巩膜上半部分比下半部分厚，从部位和厚度关系分析，厚度在角巩膜缘与赤道部之间变化较大，在赤道部和后极部之间变化较小。

眼后节疾病经巩膜给药的影响因素与提高经巩膜给药利用率的途径

经巩膜眼后节给药因其靶向传递较好、创伤相对较小等优点在眼后节疾病的治疗中备受关注。然而，在治疗视网膜疾病时，经巩膜给药的临床有效性不及玻璃体腔注药。其原因在于药物经巩膜向眼内传递的过程不仅受到巩膜、脉络膜、视网膜色素上皮（RPE）和眼内色素等解剖屏障的影响，而且还受到RPE转运蛋白、代谢酶系统以及前列腺素等代谢化学屏障的影响。了解药物经巩膜向眼后节递放的各种影响因素的研究和相关生物材料方面的进展，为进一步明确经巩膜给药机制，更有效治疗眼后节疾病提供科学思考素材和启迪。

贝伐珠单抗对H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞功能的影响

目的研究贝伐珠单抗对H_(2)O_(2)诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡及PTEN/AKT信号通路的影响。方法ARPE-19细胞分为空白组(正常DMEM培养液培养)、模型组(200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2))、低剂量实验组(200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)+0.125 mg·mL^(-1)贝伐珠单抗)、高剂量实验组(200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)+1.25 mg·mL^(-1)贝伐珠单抗)、SF1670组(200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)+2μmol·L^(-1)SF1670)、SF1670+高剂量实验组(200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)+2μmol·L^(-1)SF1670+1.25 mg·mL^(-1)贝伐珠单抗)。以CCK-8法检测细胞ARPE-19存活率,以流式细胞术检测ARPE-19细胞凋亡率,以DCFH-DA荧光探针法检测细胞中活性氧(ROS)水平,检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,以蛋白质印迹法检测ARPE-19细胞凋亡相关及PTEN/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果给药24 h,空白组、模型组和低、高剂量实验组ARPE-19细胞存活率分别为(98.79±3.57)%,(52.36±2.14)%,(76.74±3.72)%,(91.23±2.19)%;凋亡率分别为(3.64±0.52)%,(15.47±3.15)%,(9.14±1.77)%,(6.82±0.69)%;给药24 h,模型组、SF1670组、SF1670+高剂量实验组ARPE-19细胞存活率分别为(53.95±4.12)%,(80.14±2.95)%,(96.12±1.92)%;凋亡率分别为(16.31±2.66)%,(10.96±1.94)%,(5.58±2.38)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组ROS荧光强度、SOD活性、MDA含量、Bax和Bcl-2蛋白相对表达量,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论贝伐珠单抗可明显减少H_(2)O_(2)诱导的视网膜色素上皮细胞活力的损伤和细胞凋亡,其作用机制可能与促进PTEN/AKT信号通路相关蛋白转导有关。