小鼠甲胎蛋白与结核杆菌热休克蛋白70基因融合载体的构建及体外表达

目的 构建小鼠甲胎蛋白 (α Fetoprotein ,AFP)与结核杆菌热休克蛋白 70 (Mycobacteriumtuberculosisheatshockprotein 70 ,Mt.HSP70 )基因融合载体 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 以pcDNA3.1为基本单位构建AFP及与HSP70的融合表达载体 ,融合基因以G S G G S连接子连接 ;用脂质体将系列载体导入COS 7细胞 ,4 8h后以免疫化学方法检测其表达。结果 构建的AFP和HSP70的单独及融合表达载体导入COS 7细胞 4 8h后经RT PCR检测可扩增出相应片段 ,细胞免疫化学染色为阳性。结论 AFP和HSP70的单独及融合表达载体构建成功 ,并能在真核细胞中表达。

甲胎蛋白与热休克蛋白70基因融合载体的构建及表达

目的 :构建分泌性小鼠甲胎蛋白 (α -Fetoprotein ,AFP)与结核杆菌热休克蛋白 70 (mycobacteriumtuberculosisheatshockprotein 70 ,Mt.HSP70 )基因融合载体 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 :以 pSecTag2 B为基本单位构建AFP及与HSP70的融合表达载体 ,融合基因以G -S -G -G -S连接子连接 ;用脂质体将系列载体导入COS - 7细胞 ,4 8h后以免疫化学方法检测其表达 ,抽提总RNA作RT -PCR测其在转录水平的表达。结果 :构建的AFP和HSP70的单独及融合表达载体导入COS - 7细胞 4 8h后经细胞免疫化学染色为阳性 ,RT -PCR可扩增出特异性条带。结论 :AFP和HSP70的单独及融合表达载体构建成功 ,能在真核细胞中表达。

沙门菌鞭毛蛋白的研究进展

沙门菌属于肠杆菌科,其鞭毛主要由蛋白质组成。近年在对其遗传学、免疫学的研究基础上建立了有效的鞭毛表达系统,用多种异种抗原表位在该系统的表达实验中均有力证明了该系统的有效性,这对进一步探索增强疫苗抗原性的方法和新的免疫途径有重要意义。

抗病毒治疗对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭近期及远期疗效的影响

目的回顾性分析抗病毒治疗对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭近期及远期疗效的影响。方法 51例乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭病例,按有无应用抗病毒药物分为抗病毒组和未抗病毒组,查阅住院期间的病例并记录随访5年内的资料,比较两者之间近期及远期疗效的差别。结果近期疗效比较:抗病毒组和未抗病毒组出院时好转率分别为70.00%和36.36%,两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。远期疗效比较:抗病毒组12、36和60个月累积生存率分别为76.40%、72.10%和72.10%;未抗病毒组12、36和60个月累积生存率分别为36.36%、27.30%和27.30%,两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论抗病毒治疗可明显改善乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者的预后,提高生存率,延长存活时间。

树突状细胞体外激活的CTL杀伤效应

目的 :研究树突状细胞 (dendriticcell,DC)激活的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的特异性杀伤效应。方法 :从人外周血中分离出外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcell,PBMC) ,在GM -CSF和IL - 4的作用下培养 7天诱导出DC ,然后PBMC或DC为刺激细胞在体外诱导出HBsAg特异性CTL ;在调节好一定浓度靶细胞 (人肝癌细胞系HepG2及人肺腺癌细胞系A5 4 9)中加入效应细胞 (DC或PBMC) ,4 8h后瑞氏染色计数残存细胞数 ,计算杀伤率。结果 :DC激活的CTL对HepG2 杀伤率为 71.6 % ,而PBMC(APC ,非T细胞 )激活的CTL杀伤率为 4 3.8% ,两者有显著性差异 ,P <0 .0 1。此外 ,DC诱导的肝癌细胞抗原特异性CTL对肺癌细胞的杀伤率仅为 2 3%。结论 :DC诱导的CTL比PBMC高效 ,而且具有较高的特异性。

乙型肝炎病毒感染时的骨髓造血干细胞

目的研究乙型肝炎患者骨髓造血干细胞中HBV的感染、复制及对造血干细胞增殖的影响。方法收集乙型肝炎患者9例,健康者7例骨髓液,磁珠分离仪分离纯化骨髓液CD34+细胞,取部分干细胞进行免疫组化和原位杂交,以感染HBV的干细胞(2.2.15细胞)为阳性对照,并设健康人骨髓干细胞为阴性对照。余两组干细胞分别分为两组,一组在含有干细胞生长因子(SCF)、酪氨酸激酶受体家族Ⅲ的配体(FLT3)、促血小板生成素(TPO)、白介素-3(IL-3)和10%FBS的IMDM培养基中孵育,另一组在无细胞因子的同样培养基中孵育。第0、1、6、12d进行PCR病毒载量检测并做细胞计数。结果患者组骨髓干细胞经免疫组化染色后为变为棕黄色与阳性对照组一致,经原位杂交后细胞染色为蓝紫色与阳性对照组一致,而阴性对照组均未染色。对患者组骨髓干细胞加细胞因子和无细胞因子第1、6、12d细胞计数分别比较,均明显少于正常对照组(t=0.818,P<0.05;t=3.599,P<0.05;t=2.967,P<0.05)。加细胞因子患者组第6、12d细胞内病毒载量明显高于不加细胞因子患者组(t=3.36,P<0.05;t=5.71,P<0.01)。结论 HBV可以感染骨髓造血干细胞并且可随干细胞的增殖不断复制。感染了HBV的干细胞增殖能力减弱。

氨基葡甘聚糖的质粒DNA转染载体作用的研究

目的 :发展一种新的半人工合成的质粒DNA转染载体。方法 :用氨基化方法将纯化的葡甘聚糖阳离子化 ,用凝胶阻滞检测法 (gelretardationassayforcomplexformation)观察氨基葡甘聚糖 DNA复合物的形成 ,以及用氨基葡甘聚糖作报告基因质粒pEGFP Cl的载体 ,转染HEK2 93细胞 ,观察转染效率。结果 :葡甘聚糖氨基化后溶液离子强度增大 2 0倍左右 ,氨基葡甘聚糖可与质粒DNA形成复合物 ,形成的复合物转染HEK2 93细胞后 ,报告基因pEGFP Cl获得阳性表达。氨基葡甘聚糖最大至 1 0 %仍未显示细胞毒性。结论 :氨基葡甘聚糖可发展为DNA载体系统 ,在HEK2

Fractalkine基因真核表达质粒的构建及其在小鼠肝癌细胞中的表达

为克隆小鼠趋化因子Fractalkine(FK)基因, 构建真核表达质粒, 并在小鼠肝癌细胞中表达, 用以进行肿瘤的基因治疗, 用RT PCR法, 从小鼠乳腺癌细胞D2F2扩增FK的cDNA, 插入pCR2. 1 TOPO载体, 测序证实后,将其亚克隆至质粒pIRES中构建FK真核表达载体; 用脂质体将重组质粒转染小鼠肝癌MM45T Li细胞, 经G418筛选获得抗性细胞克隆, 用RT PCR和免疫化学方法鉴定转染细胞中 FK基因的表达. 结果表明: 经限制性内切酶酶切图谱分析和 DNA 序列测定证实目的基因已插入重组质粒, RT PCR 和免疫化学方法证明转基因MM45T .Li细胞克隆中存在小鼠FK基因的表达.

肾综合征出血热汉坦病毒分型及序列特征的研究

目的 分析黑龙江省肾综合征出血热（HFRS）患者携带汉坦病毒的基因型别及序列特征.方法 采集临床诊断为肾综合征出血热病人的全血60例,其中通过金标法检测出血热特异性抗体阳性40例、阴性20例,血凝块提取汉坦病毒RNA,应用RT-Nest-PCR及核苷酸序列测定分型技术对黑龙江地区的汉坦病毒进行分型研究,设计汉坦病毒M片段通用引物（MOF,MOR）及HTNV和SEOV的M片段特异性引物（HTNMF、HTNMR,SEOMF、SEOMR）,应用Nest-PCR进行扩增,回收阳性扩增产物进行基因序列测定,将所测基因序列与国内外HV病毒株序列进行核苷酸同源性分析,构建M基因种系进化树.结果 出血热特异性抗体阳性的病例中扩增出HTN型19份,抗体阴性的病例中扩增出HTN型1份、SEO型l份.总体来看黑龙江省流行的汉坦病毒毒株主要为HTN型和SEO型,以HTN型为主.经核苷酸及氨基酸同源性和种系进化分析表明其黑龙江地区的病毒株同源性较高,其中HTN型与76 ～ 118株同源性较高,SEO型与Z37株的同源性较高.结论 黑龙江省的HV感染病例多为HTN型,与其他GenBank中的各地标准株的核苷酸及推导的氨基酸序列均有一定差异,在系统进化树中分析HTN型与76-118株较为接近.SEO型与国内Z37较为接近.结合临床症状发现其临床症状较为相似的在系统进化发生树中较为接近.

哈尔滨市2168例企事业职工中脂肪肝患病情况调查

目的初步研究企事业职工体检人群中脂肪肝患病情况与相关因素。方法对体检中心随机选出2 168例体检人群(均无病毒性肝炎),对其一般资料脂肪肝的患病率、血糖、血脂、肝功能进行分析。结果 2 168例受检人群中脂肪肝检出为1 147例,占52.91%。其中男性检出率为64.15%,女性检出率为33.71%。男女检出率差异有显著性(P<0.01)。脂肪肝组血糖、血脂、肝功能较正常组明显升高(P<0.01)。结论初步结果显示哈尔滨市企事业职工体检人群中脂肪肝患病率较高,男性明显高于女性;并且脂肪肝的发生与高血糖、高血脂关系密切。丙氨酸氨基转移酶(ALT)的检测可用作脂肪肝的筛查、诊断、治疗及预后的评价指标。

永生化EB病毒转化B细胞对肝癌细胞抗原的提呈作用

目的 建立EB病毒 (Epstein Barrvirus,EBV)转化的永生化B细胞 (命名为LEBV)并研究其对肝癌细胞抗原的提呈作用。方法 从人外周血中分离出外周血单个核细胞 (Peripheralbloodmononuclearcell,PBMC) ,用等体积的EBV上清混合培养 4周以上建立永生化EBV转化B细胞 (LEBV) ,用流式细胞计数仪 (FACS)检测其细胞表面功能相关分子CD86、CD4 0、HLA DR和HLA ABC的表达情况。LEBV与自体淋巴细胞和肝癌细胞抗原共培养 3d,结束培养前 1 2h加入 37kBq/孔3 H 标记的胸腺嘧啶 (3 H TdR) ,收获细胞 ,用液体闪烁计数仪测定cpm。结果 培养 3周以上即培养出EBV转化的永生化B细胞 ,可连续培养 1年以上。经FACS检测 ,细胞表面分子CD86、CD4 0、HLA DR和HLA ABC的表达率分别为 74 %、91 %、83%和 86 .7%。该细胞接触肝癌细胞抗原后刺激自体淋巴细胞增殖的能力增强。

吃涮羊肉感染布氏柠檬酸杆菌1例

1病例资料患者，男，28岁，伊春市气象局干部，因发热伴多汗10d，关节疼痛、腰痛8d，加重4d入院。患者10d前食用未煮熟羊肉后发热，未测体温，伴有寒战、多汗、乏力、恶心、呕吐，呕胃内容物1次，腹泻3次，为稀水样便，无头痛、头晕、无咳嗽咳痰、无咽痛、肌痛，第2d腹泻缓解。8d前该患仍有发热，并出现关节疼痛（以双侧肘膝关节为主）、腰痛、头痛、头晕、眼眶痛、眼红，

感染科住院医师规范化培训中教学模式探索

目的探索体验式教学法在住院医师规范化培养中的最佳模式,为将来体验式教学的全面开展提供理论依据。方法对2018年进入感染科进行规范化培训的住院医师采用角色互换的带教方法将体验式教学理念贯穿于教学实践中。住院医师入科后先进行入科培训,然后由带教老师按照住院医师规范化培训教学大纲要求制定出若干"论题"分配给住培医师,每位住培医师查阅临床资料和相关文献,通过角色互换进行教学查房,实践后对住培医师进行相关的考核。结果住院医师的临床操作能力及医患沟通能力及知识掌握程度有了一个明显的提升。结论体验式教学能够有效激发住院医师的主观能动性的发挥,促进教学活动向着更加有效、深入和富有个性的方向发展。

汉坦病毒糖蛋白及其在细胞融合中作用的研究进展

汉坦病毒（Hantavirus，HV）属于布尼亚病毒科分节段负链RNA病毒，基因组根据大小将其分为L、M、S。分别编码病毒RNA依赖的RNA多聚酶、

Ku蛋白与肿瘤关系的研究进展

Ku蛋白功能广泛,近年来许多学者对其进行了深入研究,发现其不仅在维持染色体的稳定性及细胞周期的调控方面起到重要作用,而且与肿瘤的发生、发展、肿瘤放化疗抵抗密切相关。Ku蛋白在正常细胞中对肿瘤的抑制起到了重要的作用,而当其异常表达时可能会促进肿瘤的发生、发展,其在肿瘤中的表达水平及功能还会影响肿瘤放化疗疗效,另外在肿瘤患者血清中检测到其自身抗体水平升高,使其自身抗体有可能成为新的肿瘤标志物。

乙型肝炎病毒体外感染脐血造血干细胞的研究

目的探讨脐血来源的CD34+造血干细胞对乙型肝炎病毒(HBV)的易感性。方法留取健康产妇的脐血,分离纯化CD34+造血干细胞,加入细胞因子和高载量HBV阳性血清(107IU/m L)共同培养。于培养12天时提取细胞进行免疫组化、免疫荧光、透射电镜观察和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测。结果 HBV感染组CD34+造血干细胞经免疫组化及免疫荧光检测,细胞内可见HBs Ag染色呈阳性表达,与阳性对照组Hep G2.2.15细胞系一致。电镜观察到细胞胞浆内有HBV病毒颗粒。在HBV感染的CD34+造血干细胞中RT-PCR检测到HBV S基因的条带。结论 HBV可以体外感染脐血来源CD34+造血干细胞。这为进一步从干细胞角度研究乙肝慢性化的机制奠定了一定的理论和实验基础。

乙型肝炎病毒在造血干细胞内复制规律的研究

目的探讨HBV感染脐血来源造血干细胞后的复制规律。方法从健康产妇脐带血单个核细胞中分离纯化CD34^+HSCs,与HBV阳性血清(107IU/m L)孵育24 h后,反复洗涤并培养,连续测定细胞内HBVDNA。另以不同滴度HBV阳性血清(A组104IU/m L、B组106IU/m L、C组108IU/m L)与CD34+细胞共培养,测定第0、1、6、12天上清中HBVDNA、细胞内HBVDNA和HBsAg水平,并观察细胞形态及进行细胞计数。结果连续测定细胞内HBVDNA,第12天较第0天明显升高(P<0.01)。不同滴度HBV感染CD34^+HSCs的细胞内HBV DNA,A组基本没有增加,B组(P<0.001)和C组呈现逐渐递增趋势(P<0.05)。上清中HBVDNA定量3组均呈上升趋势,第12天与第0天相比,B组明显增加(P<0.01),C组无显著差异(P>0.05),A组有所增加(P<0.05),但病毒载量呈现低水平复制状态。细胞内HBsAg定量A组略增高,B组和C组呈明显增加趋势。各组间细胞形态和数量未见明显差异。结论脐血来源CD34^+HSCs支持HBV复制,暴露于越高载量的HBV,越容易受到感染,感染后未发现对HSCs生长的抑制作用。

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7外膜蛋白A的表达、鉴定和纯化

目的构建肠出血性大肠埃希菌O157∶H7外膜蛋白A基因重组质粒,研究其在大肠埃希菌中的表达情况。方法用RT-PCR法从肠出血性大肠埃希菌O157∶H7菌株克隆OmpA基因,构建重组质粒pET-30a(+)-OmpA,经双酶切及基因测序鉴定后在E.coli BL21(DE3)原核表达系统中诱导OmpA的表达,通过蛋白质电泳技术检测蛋白的表达,用Western blot法测定和分析免疫反应性。结果获得的目的基因为1041bp,与预期值相符,测序结果与GenBank公布序列的同源性达100%,重组质粒pET-30a(+)-OmpA在原核系统下可表达OmpA,Western blot分析His-Tag单抗能与OmpA(His-Tag)发生免疫反应。结论OmpA重组质粒构建成功,表达产物具有抗原性。