羊痘病毒的研究进展

从羊痘的流行特点、羊痘病毒基因组结构特征、热点蛋白研究、羊痘的诊断和检测、疫苗研究五个方面进行了较为详细的综述,以期为羊痘病毒的研究及预防控制羊痘提供参考。

BHK-21悬浮细胞培养条件筛选及口蹄疫病毒悬浮培养工艺研究

为了实现在幼地鼠肾细胞(BHK-21细胞)低血清全悬浮培养工艺下获得更高含量的口蹄疫病毒(FMDV),试验对比了4株不同来源的BHK-21悬浮细胞的培养特性,按体积1%、2%和5%分别接种O型、A型FMDV,接种后4,8,12,16,20,24小时取样进行146S、半数致死量(LD)对比研究,筛选形态良好、培养特性更稳定的BHK-21悬浮细胞株;以摇瓶悬浮培养筛选得到的BHK-21悬浮细胞株,使用O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株,从接种剂量、活细胞密度(VCD)、病毒培养温度、病毒培养pH值、换液体积比例等工艺参数对病毒146S表达的影响进行了研究,并在7.5,50,500 L生物反应器中逐级放大,进行了O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株各3个批次病毒液悬浮培养研究,确定O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株接种BHK-21悬浮细胞的培养工艺。结果表明:筛选得到1株形态良好、培养特性更稳定的BHK-21-CP005悬浮细胞株;O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株在摇瓶低血清悬浮培养的BHK-21-CP005悬浮细胞株中增殖的最适条件为,当细胞培养48 h, VCD达4.5×10~6/mL,按体积2%接种O/HB/HK/99株和AF/72株,培养温度为36.5~37.0℃,pH值为7.30~7.50,按4∶5体积比例换液,接种病毒16~20 h后收获病毒液,病毒146S含量不低于9.0μg/mL,LD不低于1×10/0.2 mL。说明使用BHK-21-CP005株低血清全悬浮培养生产更高含量的FMDV工艺稳定,可以实现规模化生产。

牛口蹄疫AsiaⅠ型灭活疫苗研究——疫苗效力、免疫持续期及安全性等检验

用选出的制苗用种毒AsiaⅠL/96的不同代次BHK 2 1细胞传代毒试制疫苗 3批 ,共 13 .1L ,在室内用健康牛进行了效力试验 ,保护率均达 10 0 % ( 5 /5、5 /5、5 /5 ) ,对照牛全部发病 ( 3/3、3/3、3/3) ;免疫持续期测定 2批次 ,免疫后 6个月的牛血清中和抗体效价为 1∶2 0— 1∶12 0 ,8个月为 1∶8— 1∶6 0 ,经强毒攻击保护率达 6 5 % ;保存期效力试验 2批次 ,在 2— 8℃保存 1a ,对该疫苗的效力无影响 ;最小免疫剂量为每头 3mL ,注射免疫牛 2 32 2头 ,安全性良好 。