探索西罗莫司对斑马鱼胚胎模型生长发育的影响

目的通过斑马鱼模型探索西罗莫司对运动、血管、神经系统以及免疫系统生长发育的影响。方法斑马鱼胚胎受精后3 h,使用不同浓度的西罗莫司干预,记录胚胎的生长发育情况,并使用标记血管、神经、免疫细胞的转基因斑马鱼模型,对比药物对血管、神经、免疫系统生长发育的影响。结果浓度为0.5μmol·L^(-1)时,胚胎的孵化率明显降低,幼鱼的体长明显短于对照组(P<0.01),运动也明显减缓,幼鱼神经系统轴突的长度、节间血管的发育以及免疫细胞的生长发育都明显延迟,但浓度低于0.1μmol·L^(-1)时药物的影响差异无统计学意义。结论当西罗莫司超过一定浓度时,会明显减缓斑马鱼胚胎运动、血管、神经系统以及免疫系统的生长发育。因此,在使用西罗莫司治疗儿童疾病时,需要精准地监测血药浓度水平。

复杂性淋巴管畸形临床诊断分析及综合治疗

目的分析复杂性淋巴管畸形的临床特点、鉴别诊断、治疗预后。方法回顾性分析2010年4月至2022年4月于四川大学华西医院脉管疾病团队多学科门诊就诊并进行随访的复杂性淋巴管畸形患者临床资料。所有患者均经过小儿外科、放射科、烧伤整形科、病理科、康复科等学科专家会诊后诊断为复杂性淋巴管畸形,对患者的临床表现、血常规、凝血功能、MRI影像学检查及治疗方法进行分析,并根据随访及疾病转归将患者分为好转、稳定、进展和死亡。结果纳入18例患者,男6例,女12例,初诊年龄1个月至29岁,中位年龄2.5岁。患者随访或治疗0.4~12.0年,平均3.5年,10例患者出现胸腹腔或心包积液;15例患者累及内脏,影像学检查提示内脏的累及呈多灶样改变;9例患者伴有骨质破坏,Gorham-Stout病患者的骨破坏突破骨皮质;全身性淋巴管异常累及骨髓腔内未突破骨皮质;14例患者出现不同程度的凝血功能异常,其中8例严重凝血功能障碍的患者均为卡波西样淋巴管瘤病。18例随访患者中,1例卡波西样淋巴管瘤病患者死亡,6例患者病情进展,8例患者病情稳定,3例患者病情好转。结论复杂性淋巴管畸形的临床特点呈全身性、多样性和复杂性。弥漫性淋巴管畸形伴有骨骼、内脏多器官受累,胸腹腔积液以及凝血功能障碍的临床症状应考虑此类疾病,但由于各亚型临床特点重叠,鉴别困难,疗效和预后较差,精准靶向药物是未来此类疾病的治疗研究方向。

糖酵解关键酶PFKFB3对婴幼儿血管瘤内皮细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的研究糖酵解关键酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(PFKFB3)对婴幼儿血管瘤(IH)内皮细胞(HemEC)生物活性的影响。方法收集4例增殖期及4例消退期IH组织,从增殖期IH组织中提取原代HemEC,以脐静脉内皮细胞(HUVEC)为对照。通过免疫组化与Western印迹法分别检测PFKFB3在IH组织与HemEC中的表达水平。采用CCK8实验检测0~10μmol/L PFKFB3特异性抑制剂PFK15对HemEC细胞增殖的影响。体外培养HemEC,采用5μmol/L PFK15干预细胞,采用Transwell法观察HemEC迁移能力,流式细胞仪检测HemEC凋亡水平。组间比较采用t检验或方差分析。结果免疫组化显示,增殖期IH组织中PFKFB3表达丰度(74.34%±5.26%)高于消退期(41.46%±2.99%,t=9.40,P<0.001)。Western印迹显示,HemEC中PFKFB3相对表达水平(0.73±0.05)高于HUVEC(0.45±0.04,t=8.50,P<0.001)。CCK8实验结果显示,0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L PFK15组HemEC增殖活性均低于对照组(均P<0.01)。Transwell实验显示,PFK15干预组HemEC迁移数(297±15)低于对照组(422±8,t=12.59,P<0.001)。流式细胞仪检测显示,PFK15干预组HemEC凋亡率(6.69%±0.64%)高于对照组(0.34%±0.07%,t=17.07,P<0.001)。结论糖酵解关键酶PFKFB3在IH增殖期组织与HemEC中高表达,PFKFB3抑制剂PFK15可抑制HemEC增殖、迁移并促进其凋亡。

白藜芦醇通过调控HIF-1α/NOX4/ROS通路抑制低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞氧化应激与增殖

本文旨在明确白藜芦醇对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells, PASMCs)氧化应激与增殖的作用及分子机制。体外分离培养原代大鼠PASMCs,采用不同浓度的白藜芦醇(10、20和40μmol/L)或NADPH氧化酶(NADPH oxidases, NOXs)抑制剂VAS2870 (10μmol/L)预处理0.5 h,然后将细胞置于常氧(21%O2, 5%CO2)或低氧(2%O2, 5%CO2)中培养24h。采用CCK-8法和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达水平检测细胞增殖,用DCFH-DA测定细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)的生成,用real-time RT-PCR和Western blot检测NOX1、NOX4和低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1α, HIF-1α)的表达水平,通过小干扰RNAs (small interference RNAs, siRNAs)特异性沉默Hif-1α和Nox4后确定相关信号通路。结果显示,白藜芦醇和VAS2870均能显著抑制低氧诱导的大鼠PASMCs细胞增殖和ROS生成,同时白藜芦醇还能有效阻止低氧诱导的HIF-1α蛋白的聚集和NOX4的表达上调,而对NOX1没有明显的影响。沉默Hif-1α或Nox4后,低氧诱导的大鼠PASMCs细胞增殖和ROS累积均显著降低,且能被白藜芦醇进一步抑制。上述结果提示,白藜芦醇可能通过阻断HIF-1α/NOX4/ROS信号通路抑制低氧诱导的大鼠PASMCs氧化应激和增殖。

白藜芦醇对婴儿血管瘤内皮细胞活性的影响

目的:研究葡萄糖转运体1(Glut-1)抑制剂白藜芦醇(RSV)对婴儿血管瘤内皮细胞(HemEC)活性的影响。方法:收集4例增殖期与4例消退期婴儿血管瘤(IH)组织,采用免疫组化观察Glut-1的表达。从4例增殖期IH组织中提取原代HemEC,采用qPCR与Western印迹检测HemEC与对照脐静脉内皮细胞(HUVEC)中Glut-1 mRNA与蛋白的表达水平。体外培养HemEC,分别采用0(对照组)、50、100、200、400、800μmol/L RSV干预24 h,采用CCK-8法检测各组HemEC增殖能力,计算半抑制浓度(IC50)。分别采用Transwell实验、流式细胞仪观察HemEC迁移能力及凋亡水平。组间比较采用t检验或方差分析,组间多重比较采用LSD-t检验。结果:免疫组化显示,增殖期及消退期IH组织中血管内皮细胞Glut-1均阳性,但增殖期表达丰富,消退期表达明显降低。HemEC中Glut-1 mRNA及蛋白表达水平(1.793±0.041、1.959±0.144)均高于HUVEC(0.820±0.073、0.648±0.046,t=16.35、12.28,均P<0.001)。采用Glut-1抑制剂RSV干预HemEC后,0~800μmol/L组HemEC增殖活性差异有统计学意义(F=1043.00,P<0.001),所有RSV干预组HemEC的增殖活性均低于对照组(P<0.05)。GraphPad Prism 8计算得出RSV IC50浓度为150μmol/L,Transwell实验与流式细胞仪检测显示,150μmol/L RSV干预组HemEC组细胞迁移数(61±5)低于对照组(150±6,t=15.11,P<0.001),凋亡率(13.01%±0.45%)高于对照组(3.93%±0.68%,t=19.34,P<0.001)。结论:糖酵解关键酶Glut-1在IH增殖期组织与HemEC中高表达,RSV干预可以抑制HemEC增殖及迁移能力并促进其凋亡。

婴幼儿血管瘤相关危险因素的多中心病例对照研究

目的了解婴幼儿血管瘤(IH)的人口统计学和临床特征,研究IH的相关危险因素。方法本研究为多中心病例对照研究,纳入2018年10月至2020年12月于四川大学华西医院、四川大学华西第二医院、成都市玉林社区中心医院就诊的IH患儿(病例组)及正常儿童(对照组),对两组的人口学特征,母亲孕前、孕期及围产期相关危险因素进行记录和统计分析。采用二分类Logistic回归进行单因素及多因素分析。结果病例组1479例,男456例、女1023例,月龄3.74±2.82;对照组1086例,男359例、女727例,月龄3.95±2.77,两组性别、年龄、民族、出生体重及出生身高等差异均无统计学意义(P>0.05)。IH病灶常见受累部位依次为头面部(564例,38.1%)、躯干(449例,30.6%)、四肢(356例,24.1%)等。1109例(75.0%)就诊时病灶处于增殖期,1059例(71.6%)为浅表型,1306例(88.3%)呈局灶性。瘤体面积为0.01~168.00(6.24±12.91)cm^(2),其中节段性IH瘤体面积7.50~168.00(32.17±26.94)cm^(2)。单因素分析显示,孕前因素中分娩史、既往流产史,孕期因素中胎儿宫内窘迫、胎儿脐带缠绕、先兆流产史、前置胎盘、羊水过少、妊娠期甲状腺功能减退、妊娠期贫血、孕酮/黄体酮药物使用史、甲状腺素药物使用史、子宫肌瘤病史,围产期因素中胎儿胎位、妊娠周数、胎膜早破及未足月胎膜早破史对于IH的发生均可能产生影响,差异均有统计学意义(P<0.05)。二元Logistic回归多因素校正分析显示,胎儿胎位臀位、早产、胎儿脐带缠绕及孕期服用甲状腺激素史对IH患病的影响差异无统计学意义(P>0.05);分娩史为IH患病最强的独立性危险因素(校正后OR=5.624,95%CI:4.275~7.398,P<0.001),妊娠期甲状腺功能减退及子宫肌瘤史均为IH患病的保护性因素。结论本研究IH患儿平均就诊月龄4个月,病灶最常见部位为头面部,多处于增殖期,表现为浅表型及局灶性,患儿IH的发生发展可能与胎盘疾病、缺氧、母亲孕期激素水平等因素有密切关系。