中华眼镜蛇毒致广西巴马小型猪坏死组织渗出液中的蛇毒成分分析

目的:探究中华眼镜蛇毒致广西巴马小型猪坏死组织渗出液中的蛇毒成分及其蛋白表达的动态变化。方法:给予广西巴马小型猪注射中华眼镜蛇毒,构建蛇伤中毒的局部组织坏死模型,在注射毒素后的6 h、12 h、24 h、36 h和48 h取小猪坏死组织的渗出液,采用无标记的蛋白质组学技术鉴定分析渗出液中蛇毒蛋白质组成及动态变化,通过对所鉴定出的蛋白进行KEGG及GO通路富集分析,以深入了解蛇毒蛋白相关的生物学功能。结果:通过蛇伤中毒后广西巴马小型猪的生物学行为、局部肌肉组织的病理结果、注射部位的伤口变化来评判动物模型,广西巴马小型猪中毒后出现呼吸急促、肌肉组织坏死、局部伤口溃烂等症状,均符合临床特征的实际情况,表明成功构建了中华眼镜蛇毒导致局部组织坏死的广西巴马小型猪模型。在广西巴马小型猪的局部组织坏死渗出液中鉴定到40种蛇毒蛋白质,涵盖三指毒素、磷脂酶A2、富含半胱氨酸分泌蛋白、蛇毒金属蛋白酶、核苷酸焦磷酸/磷酸二酯酶等蛇毒蛋白家族,并呈现出动态性数量变化。结论:在中华眼镜蛇毒致广西巴马小型猪过程中,不同时间段的组织渗出液中均鉴定出多种三指毒素、磷脂酶A2等蛇毒蛋白,其可能在局部组织坏死中发挥着重要作用。

中华眼镜蛇咬伤导致局部组织坏死的猪模型构建

目的通过广西巴马小香猪建立中华眼镜蛇咬伤导致局部组织坏死的动物模型。方法选择健康的广西巴马香猪12头,分为蛇毒组和对照组各6头,每头猪按照本课题组前期获得的半数致死量为剂量依据,蛇毒组以浓度5 mg/kg,剂量0.2 ml/kg于实验猪右后侧大腿肌肉注射,对照组注射等量生理盐水。注射蛇毒后观察实验猪的生物学行为和局部伤口变化情况,采用苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Eosin staining,HE)观察注射部位肌肉组织的病理学变化,并进行血液学分析。结果蛇毒组实验猪注射中华眼镜蛇毒3 h后,注射部位伤口开始出现淤青肿胀,随后肿胀部位不断扩大;6~12 h,出现渗出液外渗,且伴有出血;24 h,伤口出现糜烂性溃疡,且缓慢向四周扩散;第3天时,伤口部位皮肤向下凹陷,出现坏死;第6天,出现伤口全部坏死溃烂;第7天,坏死部分全部脱落。对照组实验猪注射部位全程无变化。同时蛇毒组在注射中华眼镜蛇毒后6 h,实验猪腿部肌肉肌丝的排列出现紊乱,没有规则;注射后12 h,肌肉组织中细胞溶解,见浆液性渗出物弥漫浸润组织,局部出现炎性水肿细胞质呈现不规则排布,细胞核成团聚集在组织间浆液中;24 h后,肌肉组织细胞溶解加重,出现坏死,部分细胞核凋亡消失;在36 h,仅剩少许肌肉组织,成形细胞核完全消失;48 h后,肌肉组织全部溶解,形成空泡状,说明注射部位组织全部溃烂坏死。对照组实验猪腿部肌肉肌丝排列整齐,肌肉组织细胞形态完好,清晰可见细胞核全程无较大变化。与对照组各时间点比较,蛇毒组实验猪的WBC、RBC、LDH和CK水平均显著升高,而且AST与ALT在24 h内急剧上升,组间比较差异均具有显著统计学意义(均P<0.05)。结论成功建立中华眼镜蛇毒致局部组织坏死的猪模型,为蛇伤的救治提供良好实验模型。