日本脑炎病毒感染仔猪扁桃体的细胞嗜性研究

[目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染猪扁桃体的组织和细胞嗜性。[方法]筛选JEV抗原、抗体均为阴性的健康商品仔猪3头,通过颈部皮下及静脉注射接种JEV NJ2008株,每头共2×10^(7) TCID50·mL^(-1),对照仔猪1头注射生理盐水2 mL。饲养观察1周,期间采集鼻拭子、血液和扁桃体等组织样品。通过qPCR、组织切片免疫组化和免疫荧光等方法检测病毒。[结果]3头接毒仔猪体温均正常,试验仔猪7 d中均未观察到明显的临床症状。3头接种JEV NJ2008仔猪从接毒当天开始出现了2 d的病毒血症,并从持续7 d采集的鼻腔拭子中检出JEV。JEV主要感染猪软腭扁桃体,从攻毒仔猪的咽扁桃体、咽鼓管扁桃体、会咽扁桃体的免疫组化检测中未发现JEV阳性细胞。在软腭扁桃体中,JEV感染细胞主要分布于淋巴滤泡的周边和弥散淋巴组织中,JEV抗原阳性细胞多为不规则形态,细胞核较大,着色较淡,具有巨噬细胞或树突状细胞的特征。CD11b、CD163和MHCⅡ细胞表面标志物的检测结果显示,JEV阳性细胞多为巨噬细胞或树突状细胞等抗原提呈细胞。[结论]在JEV感染早期的1周内,仔猪扁桃体呈现持续性感染,其中JEV阳性细胞多为巨噬细胞或树突状细胞等抗原提呈细胞,此结果为研究JEV在扁桃体持续感染中的机制奠定基础。

气肿疽梭菌CctA基因真核表达载体的构建与鉴定

为了构建气肿疽梭菌细胞毒素A（CctA）基因真核表达载体,探讨制备安全有效气肿疽核酸疫苗的可行性,试验根据NCBI上气肿疽CctA基因序列,通过Primer Premier 5.0设计了1对特异性引物用于基因扩增,将PCR扩增的CctA基因克隆至pMD19-T载体构建重组质粒pMD19-T-CctA,对测序正确的基因进行序列分析后亚克隆至pVAX-1真核表达载体,并对构建的pVAX1-CctA真核表达质粒进行PCR和双酶切鉴定。结果表明：成功扩增了CctA基因目的片段,并获得了与预期大小相符的重组质粒pMD19-T-CctA和真核表达质粒pVAX1-CctA。说明试验成功构建了气肿疽CctA基因真核表达载体。