马铃薯、番茄内源基因PCR检测引物设计及特异性分析

对马铃薯UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因(UGPase,U20345)和番茄多聚半乳糖醛酸酶-2a基因(PG-2a,X04583.1)进行序列相似性分析和多序列比对,确定特异片段,设计特异引物,经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测,引物具有较高的特异性;同时建立利用双重PCR检测马铃薯和番茄混合成分的方法,当马铃薯和番茄DNA混合质量为1.25ng时,仍可对其成分进行可靠的鉴定。新设计的马铃薯和番茄内源基因的引物及建立的双重PCR检测方法具有一定的特异性和灵敏性,适于出入境检验检疫部门对马铃薯和番茄制品进行检测。

多重PCR结合DHPLC方法检测番茄中转基因成分

应用多重PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,检测转基因番茄华番1号中的转基因成分。对番茄中特异的PG内源基因、华番1号中含有的CAMV35S、NOS和NPTII外源基因进行多重PCR扩增,将扩增产物测序验证。利用DH-PLC分离多重PCR产物,建立了多重PCR-DHPLC技术检测转基因番茄的方法;将样品进行稀释,确定了该方法的检测灵敏度。试验结果表明,所建立的多重PCR-DHPLC方法操作简便,快速准确,能够同时检测转基因番茄4个内、外源基因,检测限达0.5ng/μL,可用于番茄中转基因成分的检测。

多重PCR结合变性高效液相色谱技术转基因小麦检测方法的建立

为了满足对小麦转基因成分高通量快速检测的需要,建立了一种新的转基因小麦检测方法。通过对不同稀释倍数的转基因小麦品系B73-6-1中的内源基因Wx012、外源基因ubiquitin、bar、nos、uidA进行单一PCR和多重PCR扩增,应用琼脂糖凝胶和变性高效液相色谱(DHPLC,denaturing high performance liq-uid chromatography)技术分离PCR产物,进行灵敏度分析,并用非转基因小麦京花1号籽粒、大豆籽粒、麦片、转基因小麦B73-6-1加工成的油炸制品为样本,对建立的检测体系进行检测。结果表明,样品经多重PCR扩增和DHPLC分离后,能够得到准确可靠的转基因图谱。与凝胶电泳方法比较,本研究所建立的多重PCR-DHPLC具有更高的检测通量和灵敏度(能够同时检测5个基因,灵敏度达到1 ng.μL-1),能够满足小麦转基因成分的高通量快速检测的要求,同时也为转基因产品检测提供了一种新的技术手段。