小鼠骨髓来源肥大细胞的诱导培养及功能鉴定

目的:探讨体外诱导培养小鼠骨髓细胞来源肥大细胞的方法,为体外组胺激发试验提供试材。方法:采用白细胞介素3(IL-3)和干细胞因子(SCF)联合刺激小鼠骨髓细胞4、6周诱导其分化为肥大细胞,光镜下观察细胞形态,甲苯胺蓝染色观察细胞成熟度,蛋白免疫印迹法分析表面FcεRⅠ和CD117表达情况,HistaReader 501组胺仪检测细胞脱颗粒能力。结果:诱导培养4、6周后的细胞为大小均一且具折光性的圆形悬浮细胞;甲苯胺蓝染色显示培养4、6周后的细胞胞核染为蓝色,胞质含有丰富的粗大紫红色颗粒,镜下统计成熟肥大细胞比例达85%以上;蛋白免疫印迹法分析发现培养4、6周后的细胞皆表达FcεRⅠ和CD117,其中培养6周的细胞FcεRⅠ表达水平更高;组胺仪检测培养6周的细胞发现,经浓度为100、500、1 000μmol·L-1的钙离子载体刺激后,与阴性对照组相比,细胞组胺释放量依次为3.86%、17.04%及23.47%(P<0.05),其脱颗粒具有钙离子载体浓度依赖性。结论:获得大量高纯度的小鼠骨髓来源肥大细胞,可促进后期的组胺激发试验及Ⅰ型变态反应机制研究。

2016—2018年阳江市人民医院沙门菌监测及其病原学特征

目的了解阳江市人民医院 2016-2018年沙门菌感染情况,分析沙门菌菌株的血清型分布和耐药性,为临床合理用药提供科学依据。方法对阳江市人民医院2016-2018年腹泻的住院患者和门诊患者送检的6 837份大便标本进行分离、鉴定、血清分型和药敏试验,并统计相关流行病学资料。结果 2016-2018年共分离出766株沙门菌,分离率为11.20%;男女沙门菌分离率分别为11.21%、11.19%,差异无统计学意义(P>0.05);婴儿感染率最高(57.83%),幼儿(1~3岁)占25.84%,其他年龄段(≥3岁)占16.32%,各年龄段比较差异有统计学意义(P<0.05);6~10月份为沙门菌患者发病高峰期;766株沙门菌共44种血清型,以Ⅰ4,5,12:i:-为主,占42.82%;Ⅰ4,5,12:i:-、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、斯坦利沙门菌 4种血清型比较差异有统计学意义(P<0.05);氨苄西林、复方新诺明、氯霉素、米诺环素、头孢吡肟、头孢曲松、头孢他啶等7种抗生素耐药率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在阳江引起感染性腹泻的沙门菌血清型为 I4,5,12:i:-;3年间部分抗生素耐药性变化有统计学差异。临床医生应根据沙门菌药敏结果和患者的具体情况合理规范使用抗生素,避免多重耐药菌株的产生。

阳江市人民医院304例输血不良反应分析

目的通过对临床发生的输血不良反应病例的情况进行分析,为开展预防与控制输血不良反应提供科学依据。方法收集阳江市人民医院于2014年1月—2018年12月间的输血不良反应进行统计和分析,记录发生输血不良反应的相关情况。结果各年度输血不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05);46096例输血患者中发生输血不良反应304例,总输血不良反应发生率为0.66%;输注的7种血液制品中,病毒灭活冰冻血浆的输血反应发生率最高,为0.78%;不良反应以寒战、发热为主,分别占47.70%、46.38%;有输血史或过敏史患者输血不良反应率较无输血史或过敏史患者高。结论输血有利有弊,临床医务人员要严格掌握输血适应证,合理有效输血。使用白细胞过滤器过滤血液制品,可以降低输血不良反应发生率。

害嗜鳞螨过敏原Lep d2的原核表达与纯化

目的构建害嗜鳞螨(Lepidoglyphus destructor)过敏原Lep d 2的原核表达系统,获得Lep d 2的重组纯化蛋白。方法通过双酶切pUC-Lep 2质粒,获取基因Lep d 2,并结合高保真PCR获取去信号肽基因rLep d 2,连接载体pET44a并转入表达菌株Rosetta;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和蛋白免疫印迹法分别进行诱导表达与鉴定;用盐酸胍溶解包涵体并进行透析复性;使用Strep II亲和填料来纯化目的蛋白。结果构建了Rosetta-rLep d 2的原核表达体系;rLep d 2蛋白在菌体内主要表达形式为包涵体,通过透析复性和亲和纯化获得了高纯度的rLep d 2蛋白。结论获得的重组rLep d 2蛋白可为下一步评价其过敏原性提供研究材料。

粉尘螨过敏原蛋白Der f 3的表达纯化及活性鉴定

目的:制备有生物学活性的粉尘螨过敏原蛋白Der f 3。方法:构建带有StrepⅡ标签的原核表达体系Rosetta-p ET44a-Der f 3高效表达目的蛋白,分别用梯度透析法和亲和层析法对其进行复性纯化,通过Western Blot试验验证目的蛋白的有效表达,最后用丝氨酸蛋白酶特异荧光底物及粉尘螨过敏病人血清分别鉴定目的蛋白的酶学活性及免疫学活性。结果:利用原核表达体系成功表达了目的蛋白Der f 3,Western Blot结果显示有目的条带出现。复性纯化后的过敏原蛋白Der f 3能够成功降解丝氨酸蛋白酶特异性荧光底物,ELISA试验结果显示该蛋白血清特异性Ig E在4级以上粉尘螨过敏病人中阳性率为4%。结论:成功获得有酶学活性及免疫学活性的粉尘螨过敏原蛋白Der f 3,为生产高质量的诊断试剂和疫苗奠定了基础。