流感病毒在诱导A549细胞凋亡过程中对SIRT1和P53蛋白的影响

采用流式细胞术观察了流感病毒诱导A549细胞凋亡的情况,同时应用Western blot方法研究了SIRT1和p53等蛋白的表达情况。结果表明:1000 TCID50/mL剂量流感病毒感染A549细胞后,细胞表现出典型的凋亡特征,且凋亡比例随感染时间延长而逐渐增加。在流感病毒诱导细胞凋亡过程中,SIRT1蛋白的表达下降,p-p53的表达上升。线粒体中Bax的表达上调,Bcl-2的表达下降。可见SIRT1蛋白参与了流感病毒诱导的A549细胞凋亡,SIRT1蛋白表达下调可能促进了Bax释放进入线粒体和p53蛋白功能的进一步发挥。

大熊猫犬冠状病毒部分S基因的克隆与全S基因序列分析

从重庆某动物园死亡的大熊猫肝脏中分离到一株病毒,经鉴定为犬冠状病毒(命名为CCVDXMV)。本实验根据CCV K378和CCV Insavc-1株基因序列设计合成了普通PCR引物SF1-SR1和SF2-SR2,以及半套式引物SF3-SR3、SRI3、SFI3、SF4-SR4和SFI4,分段扩增了CCV DXMV株部分S基因,得到了368 bp、792 bp、737 bp、1 178 bp和985 bp 5个基因片段。将纯化的RCR产物分别克隆到pGEM-T载体中,通过筛选和鉴定,获得了5个阳性重组质粒。将重组质粒送生物公司测序,将测得的基因序列与先前测定的该株病毒部分S基因序列,拼接成全S基因序列,并与其它株CCV及TGEV HN2002和FIPV 79-1 146株的S基因序列进行分析比较,绘制进化树。结果表明,该株病毒与CCV K378株的同源性最高,达到99.4%;而与CCV 23/03株的同源性最低,为56.9%;与FIPV和TGEV分别有90.4%和82.1%的同源性。

双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)的真核表达、纯化及鉴定

[目的]获得真核表达的Flag-PKR融合蛋白,以用于流感病毒相关的PKR信号通路调控机制研究。[方法]以RT-PCR方法扩增PKR目的基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0-Flag中。将所构建的重组质粒pcDNA3.0-Flag-PKR转染293T细胞,利用Flag抗体偶联的琼脂糖凝胶(anti-Flag M2-Agarose)纯化Flag-PKR融合蛋白,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及体外活性鉴定。[结果]重组质粒转染293T细胞,Western blot显示表达出的融合蛋白能够被抗Flag的抗体特异性识别,其相对分子量约为69 kDa,与Flag-PKR融合蛋白大小相符;体外磷酸化试验表明,Flag-PKR融合蛋白能够发生自动磷酸化。[结论]在293T细胞中表达、纯化了有活性的Flag-PKR融合蛋白,为PKR信号通路的研究奠定了基础。

抑制共模干扰的矢量控制技术研究

通过分析三相四桥臂逆变器工作原理及工作模式,推导出三相四桥臂逆变器共模电压的计算公式,由此提出一种运用于三相四桥臂逆变器的改进型SVPWM调制技术。针对新的调制技术,运用Matlab/Simulink进行建模仿真。仿真结果表明,采用三相四桥臂逆变器改进型SVPWM控制技术在不改变直流电压利用率和输出电流谐波含量的情况下,能有效地抑制变流器共模干扰。

用于平面单轴对称结构电磁波散射的减元技术

大容量与长计算时间的要求 ,是当前限制矩量法应用的主要障碍。因此 ,如何利用散射体的几何对称特征 ,有效地降低求解散射问题所需的存储空间和减少计算时间 ,具有重要的理论和实际意义。对具有轴对称的散射体 ,通过引入对称镜像分解 ,能够使总的所需矩阵阶数降至直接求解的 1/2 ,运算时间缩减为直接求解的1/4 ;同时还给出了分解实现的数学公式以及分解原理。

新型单/三相变流器的研究

提出了一种新型静止单／三相变流器，即由单相交流电源和单相逆变器构成的“Ｖ”型供电电源。该变流器采用ＭＣＳ－８０９８单片机作为控制器，ＧＴＯ作为功率开关器件。给出了系统的硬件和软件结构设计，并对逆变器输出电压进行了电流追踪型的ＳＰＷＭ调制。理论分析和实验结果表明，这是一种中等性能的变流器。

级联多电平高压变频器脉宽调制方法的分析

介绍了级联多电平高压变频器的拓扑结构 ,阐述了相位移载波调制技术的基本原理 ,并针对七电平变频器进行了仿真分析。

基于高通谐振滤波器的高频脉振电流注入法研究

当高频脉振电流注入法利用电机的凸极效应实现无位置传感器控制时,为了避免注入信号幅值选取的不当,导致提取转子位置信息的高频响应信号解调失败和转矩脉动,提出一种将高通谐振滤波器引入转子位置提取通道的方法。利用高通谐振滤波器在低频段的高度衰减性,在谐振点对解调信号放大增幅的特性,提高了含有转子初始位置信息的信噪比。对转子位置信号的滤波优化,使得电机无位置算法在解调响应信号的难度降低,转子位置和转速的估算可以实现零误差。最后通过仿真对比研究验证了方法的正确性和有效性。

A型流感病毒感染免疫应答中细胞因子的作用

A型流感病毒是引起人和禽类呼吸道疾病的重要病原体。病毒在宿主的上皮细胞和中性粒细胞中复制并刺激机体产生具有各种生物活性的细胞因子。细胞因子作为天然免疫的一部分,具有抗病毒和辅助Th1型免疫应答的作用,同时细胞因子也影响适应性免疫应答和疾病的表现型。流感病毒感染导致趋化性细胞因子、促炎性细胞因子、肿瘤坏死因子α以及抗病毒细胞因子的产生。论文综述了细胞因子在A型流感病毒感染的免疫应答中的可能作用,为更好地阐明病毒感染的发病机理奠定基础。

一种稳定、灵敏且适用于ELISA的四甲基联苯胺底物

目的评价一种适用于酶联免疫吸附试验(ELISA)的即用型自制四甲基联苯胺(TMB)底物的特性。方法比较1-Step Turbo TMB底物、A/B两组分混合物底物和自制底物与不同稀释度酶标抗体的反应性及其对包被抗体的检测敏感性,对1-Step Turbo TMB底物和自制底物进行稳定性比较。结果 3种底物的吸光度(A)值均随着酶标抗体稀释度的增大而显著下降;当酶标抗体稀释度相同时,自制底物的A值显著高于另外2种底物(P<0.05);在直接ELISA条件下,自制底物对包被抗体的检测敏感性可达15.63 ng/mL;自制底物37℃贮存60 d后的A值仍高于1-Step Turbo TMB底物37℃贮存5 d的A值。结论该即用型自制TMB底物在检测敏感性及稳定性上优于1-Step Turbo TMB底物。

两种高频信号注入法与坐标系结合的无位置传感器运行研究

基于空间凸极效应的原理,讨论了采用旋转高频电流信号注入到估计的同步旋转坐标系,以及脉振高频电流信号注入到两相静止坐标系中,在永磁同步电机(PMSM)无位置传感器运行控制中的应用。分别给出了两种新结合的高频注入方法的转子位置估计数学模型,指出了获取转子空间位置的解调方法,并应用这两种新结合的高频电流信号注入方法,建立了PMSM无位置传感器矢量控制系统的仿真模型,并进行了仿真比较。仿真结果表明,采用脉振高频电流信号注入与两相静止坐标系结合的方法,具有易于实现的系统控制结构和更优的转子位置估计性能。

GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用

为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建真核表达载体pLEGFP-Hsp40及pCAGGS-PB1-F2,并分别转染293T细胞使其表达Hsp40及PB1-F2融合蛋白,然后进行GST pull-down试验验证二者的相互作用。成功地构建了两种蛋白的各种表达载体,经表达、纯化获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白,GST pull-down试验正反两方向都证实了PB1-F2与Hsp40的相互作用,初步证实了流感病毒PB1-F2在体外能与Hsp40发生相互作用。

一种包被抗原稳定剂的研制及其特性鉴定

以纯化的狂犬病病毒2μg/mL包被酶标板,将乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖分别以5%(W/V)的终浓度加到1%BSA+4%PEG的PBS中,所制备的溶液作为封闭剂,研究其对于37℃贮存板的稳定性,从中选取最佳的封闭剂组合,并研究其对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物在包被状态下的稳定性。结果显示,以1%BSA+4%PEG+5%蔗糖的PBS溶液的封闭效果最佳,该封闭剂对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物也具有良好的稳定性。

GST-P58^(IPK)融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定

以RT-PCR方法扩增目的基因P58IPK,将其克隆至原核表达质粒pGEX-6p-1。将所构建的pGEX-6p-1-P58IPK重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并诱导表达,利用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE、Western-blot及体外活性鉴定。结果显示,大肠杆菌细胞经诱导表达出相对分子质量约为85 000的蛋白,与GST-P58IPK融合蛋白大小相符;Western-blot显示该融合蛋白能够被抗GST的抗体特异性识别,磷酸化试验表明GST-P58IPK融合蛋白能够抑制PKR的体外磷酸化。结果表明,在大肠杆菌表达系统中表达了有活性的GST-P58IPK融合蛋白,为PKR信号通路的研究奠定了基础。

狂犬病毒作为神经示踪剂的研究进展

狂犬病毒是仅有的完全特异的示踪剂,因为它能逆向通过化学突触进行神经示踪且不改变神经细胞的代谢,可以逐级的,时间依赖的方式感染大量的突触联系的神经网络。根据狂犬病毒的特性解释该病毒作为神经示踪剂的优势,总结狂犬病毒跨神经进行示踪的方法,并对基因修饰的狂犬病毒的新兴技术进行讨论和展望。

流感病毒在诱导A549细胞凋亡过程中对MDM2和p53蛋白的影响

采用Hoechst 33258染色和流式细胞术观察了流感病毒诱导A549细胞凋亡的情况,同时应用Western-blot方法研究了MDM2和p53等蛋白表达的情况。结果表明,100 TCID50/0.1 mL剂量病毒感染A549细胞后,细胞表现出典型的凋亡特征,死亡细胞比例随感染进程逐渐增加。在流感病毒诱导细胞凋亡过程中,MDM2蛋白表达下降,p53和p-p53表达上升,其下游p21蛋白也被激活。可见,p53及其下游p21蛋白参与了流感病毒诱导的A549细胞凋亡,同时通过下调MDM2蛋白表达促进了p53蛋白诱导的细胞凋亡。

三电平逆变器电压空间矢量控制方法分析

详细分析了三电平逆变器主电路原理及工作模式,推导了在不同电压空间矢量三角形分区情况下电压空间矢量作用时间,并介绍了合成电压空间矢量的工作模式及开关的合理选择方式。在Matlab/Simulink环境下通过仿真实现了三电平逆变器电压空间矢量控制,仿真结果验证了理论的正确性。

基于三次谐波注入的级联多电平逆变器

详细分析了调制波变换技术和三次谐波注入多电平逆变器的原理,以及三次谐波注入后逆变器的调制信号与输入直流电压的关系。并且,分析了在级联多电平逆变器开环PWM控制下,一般SPWM与三次谐波注入的不同。提出三次谐波注入法能够在不影响负载电流电压的情况下实现载波调制的优化控制,提高电压利用率。在Matlab/Simulink环境下通过仿真,证实了理论的正确性。

基于数学推导的级联多电平逆变器性能研究

载波相移SPWM技术应用于级联型多电平逆变器,可以达到提高等效开关频率,改善输出性能的效果。而载波相移角度差π/N和2π/N两种移相方式,对不同级联数目的逆变器输出有不同影响。当三相逆变器中功率单元发生故障被切除后,输出电压不再平衡。而利用中性点偏移技术,可使逆变器输出线电压重新达到平衡,从而具备较好的容错能力。通过对载波相移PWM技术和中性点偏移原理的数学推导,得出采用载波相移角π/N方式与中性点偏移技术,逆变器输出性能有较大提高的结论。最后对级联型9电平逆变器A相中某一功率单元故障后状况进行仿真实验,验证了数学推导的正确性。

基于PXI的虚拟仪器测试技术

本文介绍了新一代仪器总线PXI总线仪器的性能和应用领域,讨论了虚拟仪器的基本概念和基于PXI总线的虚拟仪器的系统结构及软硬件基础。