白藜芦醇对多种呼吸道病毒作用体外实验研究

目的:观察白藜芦醇对多种呼吸道病毒导致细胞病变的抑制作用,为进一步探讨白藜芦醇的抗病毒机理积累基础。方法:分别接种甲1型流感病毒FM1株、呼吸道合胞病毒long株、腺病毒7型、鼻病毒R14型于MD-CK、A549、HEp-2、MRC-5细胞,采用细胞病变抑制法(CPE),观察白藜芦醇体外对多种呼吸道病毒作用。结果:白藜芦醇在无毒浓度120μg/m l下,对腺病毒7型所致的细胞病变有抑制作用,而对甲1型流感病毒FM1株、呼吸道合胞病毒long株、鼻病毒R14型均未见抑制作用。结论:白藜芦醇具有体外抑制腺病毒7型作用,其对DNA病毒作用机理值得进一步探讨。

阿比多尔与连花清瘟胶囊对中东呼吸综合征冠状病毒的体内外抑制作用比较

目的评价阿比多尔与连花清瘟胶囊抑制中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)复制的体内外药效。方法以MTT方法检测阿比多尔和连花清瘟胶囊在非洲绿猴肾细胞的半数有毒浓度(TC_(50))。建立MERS-CoV感染非洲绿猴肾细胞模型,药物分别处理感染细胞48 h后收获上清,通过空斑试验检测培养上清病毒滴度;建立MERS-CoV感染表达h CD26小鼠模型,将小鼠随机分成3组,分别为病毒对照组、阿比多尔组[90 mg/(kg·d)]和连花清瘟胶囊组[1 300 mg/(kg·d)],每组6只,药物处理后于感染后第3、5天,采用空斑试验检测鼠肺病毒滴度,分析阿比多尔组、连花清瘟胶囊组与病毒对照组的病毒滴度差异。结果阿比多尔和连花清瘟胶囊在非洲绿猴肾细胞的TC_(50)分别为36. 78μg/m L和4 023. 27μg/m L,其体外抑制MERS-CoV复制的最低浓度分别为4μg/m L和900μg/m L,治疗指数分别为2. 19和0. 47;两种药物处理MERS-CoV感染小鼠后病毒滴度与病毒对照组差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论阿比多尔具有体外抑制MERS-CoV复制的作用。

银翘散对感染甲1型流感病毒金刚烷胺耐药株小鼠的抗病毒研究

以经过耐药表型和基因型鉴定的甲1型流感病毒金刚烷胺耐药株感染BALB/c小鼠,观察其生存状态并测定肺指数,以苏木素—伊红染色(HE染色)法观察肺组织病理改变;将鼠肺悬液以空斑试验定量检测感染性病毒滴度。研究结果表明,银翘散可以减轻甲1型流感耐药株感染小鼠引起的全身症状,降低肺指数;减少鼠肺病变范围及肺泡渗出物;降低鼠肺病毒滴度。说明银翘散有体内抑制甲1型流感病毒金刚烷胺耐药株复制的作用。

甲型流感病毒空斑形成技术的改进和应用

目的改进测定甲型流感病毒株和临床样本病毒滴度的空斑形成方法。方法在12孔板按照不同感染复数（MOI）感染MDCK细胞，覆盖改良营养物（含0．8％琼脂糖，0．005％DEAE，0．2％BSA，1．25μg／ml TPCK），孵育一定时间后固定染色，计算空斑形成单位。以空斑形成法和血凝滴度同时测定感染1～6d后培养液病毒滴度。结果甲1型流感病毒PR8株可形成直径1～3mm的圆形或类圆形空斑，滴度达1×10^7空斑形成单位；临床标本病毒滴度为5×10^3～1．2×10^7PFU／ml；PR8株最佳扩增感染复数为0．01，高峰期为感染后第4天。结论该方法经改进可应用于标准病毒株及临床样本的病毒定量检测和确定流感病毒最佳感染复数；低MOI感染复数易于获得高滴度流感病毒。

黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用研究

目的:研究不同来源黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用。方法:制备流感病毒空斑模型,通过预防保护(病毒吸附前给药)和治疗(病毒吸附后给药)2种模式观察黄芩苷对流感病毒不同阶段的抑制作用并结合神经氨酸酶抑制试验寻找其可能的作用位点。结果:2种受试黄芩苷样品A和样品B对MDCK细胞毒性(半数有毒浓度,TC50)分别为0.099 mg/mL和0.8 mg/mL;黄芩苷A在预防保护和治疗模式中均未发现明显的病毒抑制作用(IC50>0.3mg/mL);黄芩苷B在预防保护和治疗模式中的半数有效抑制浓度(IC50)分别为0.08和0.045mg/mL(选择指数SI为10和17.7),并对神经氨酸酶(NA)活性显示一定的抑制作用(IC50=51.7μg/mL)。结论:市售商品化黄芩苷B有确定的体外抑制流感病毒PR8株的作用。

东方红LT1101T汽车可靠性评价

根据汽车可靠性行业标准“QCn2 90 0 8.3- 91”和“QC/ T90 0 - 1997”,对东方红 L T110 1T中型载货汽车可靠性进行了分析评价。研究结果表明 ,上述两个行业标准在汽车可靠性评价中存在着差异 。

应用空斑形成法检测五种不同细胞对肠道病毒71型的敏感性

目的:建立肠道病毒71型(EV71)的空班形成方法,并比较BGM、VeroE6、MRC-5、HEp-2及A549五种细胞对EV71病毒的敏感性.方法:将不同稀释浓度的EV71病毒接种到五种细胞,分别覆盖三种不同的培养物,孵育一定时间后固定染色,比较出斑效果;以新建空斑形成法测定五种细胞感染EV7124-96h后培养液滴度,计算空班形成单位(pfu).结果:在五种细胞中,BGM和VeroE6覆盖琼脂糖凝胶的EV71可形成针尖样空班;覆盖1%甲基纤维素的EV71可形成直径大约1mm圆形或类圆形空班,形成空斑单位最多,病毒滴度分别达2.87×109pfu/L和1.65×109pfu/L;覆盖1.2%艾维素的EV71在BGM细胞中可形成直径大约0.5mm类圆形空斑,在VeroE6细胞中形成针尖样空斑;其他细胞均形成针尖样空斑.结论:空斑形成方法可对肠道病毒进行定量检测,BGM及VeroE6细胞为EV71的敏感细胞.

从乙型流感病毒流行株中筛选获得鼠肺适应株的研究

目的从乙型流感流行株中筛选获得可在鼠肺中稳定复制的毒株。方法利用免疫抑制剂甘露聚糖分别联合5株乙型流感临床分离株和1株标准株感染BALB/c小鼠,筛选出可稳定在鼠肺中连续感染传代的毒株,并纯化后感染小鼠,检测其致病力与致死率,最后对病毒核酸进行测序,分析分子特征。结果从5株临床分离株中筛选到1株乙型流感病毒,可在小鼠中稳定感染并致死,经测序比对发现适应过程中该株病毒血凝素(HA)发生2个突变:N212Y和E361K,神经氨酸酶(NA)发生1个位点突变S339F,其中HA E361K是裂解位点。结论成功从临床乙型流感分离株筛选适应获得一株鼠肺适应株,为进一步开展药物和发病机制研究提供了可能。

离心培养法检测上呼吸道感染患者流感病毒的应用与评价

目的评价离心培养法分离检测流感病毒的敏感性、特异性,探讨其临床应用价值。方法收集2010年1月至2011年2月895份上呼吸道感染患者鼻咽拭子,以传统细胞培养法和离心培养法进行流感病毒培养,并作免疫荧光试验(IF)鉴定。结果广州地区上呼吸道感染患者的流感病毒感染呈两个高峰期,分别为3～5月的春季高峰(以乙型流感病毒为主)和7～9月夏季高峰(甲型流感病毒为主);传统细胞培养分离流感病毒288例,分离率为32%;离心培养分离病毒260例,分离率、敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为29%、89%、99%、98%、95%。结论离心培养法结合IF具有高的敏感性和特异性并能快速报告结果,而且操作简单、节省人力,可实现流感病毒快速分离,适于临床实验室使用。

金属喷涂层机械性能的研究

研究了用金属电喷涂技术强化零件表面机械性能，并用正交试验法对喷涂参数进行优化，寻找最佳的生产工艺规范。

bFGF人源性抗体Fab段基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的用自身免疫病患者外周血淋巴细胞获得的bFGF人源性抗体Fab基因,构建编码人源性bFGF抗体Fab表达载体在大肠杆菌中表达,检测其结合抗原的活性。方法从筛选获得的噬菌体抗体质粒pComb3-Fab中,PCR再扩增出Fd段和κ链基因,克隆到pMD18-T载体中并测序,在NCBI/GenBank的Ig BLAST数据库进行BLAST序列分析。鉴定Fd段和κ链基因后,插入到表达载体pComb3H,切除geneⅢ,构建bFGF抗体Fab可溶性表达载体,并在XL1-Blue菌中表达。用SDS-PAGE、Western blot和ELISA方法鉴定表达产物。结果IgBLAST数据库进行BLAST序列分析结果显示,Fd-6、Fd-25、Fd-26的FWR区与数据库中人源抗体序列FWR区的同源性为95%、97.4%、94.3%,3个CDR区均为特异性序列,证实为人源性抗体Fd段和κ链基因。SDS-PAGE和Western blot检测到目标蛋白带。ELISA结果显示,表达产物Fab具有与重组人bFGF特异性结合活性,与Human TNF-α、Human IL-2均无交叉反应。结论插入到表达载体pComb3H的来源于人源性噬菌体抗体库的Fab基因证明为人源性抗体基因,该基因可在XL1-Blue菌株中可溶性表达,且具有特异结合抗原的活性。

HEp-2-NS1改良细胞分离6种常见呼吸道病毒的敏感性分析

目的评价HEp-2-NS1改良细胞分离培养6种常见呼吸道病毒的效果。方法以HEp-2细胞为对照,HEp-2-NS1改良细胞分别接种6种常见呼吸道病毒,包括甲型流感病毒(IFA),乙型流感病毒(IFB),腺病毒(ADV),呼吸道合胞病毒(RSV),副流感病毒1、3型(PIV1/3),通过血凝试验、细胞病变法分别进行病毒滴度检测和观察细胞病变(CPE);使用533份急性上呼吸道感染诊断的患儿咽拭子,对HEp-2-NS1细胞分离RSV的阳性率和出现CPE时间进行评价分析。结果 1病毒滴度:血凝试验结果显示HEp-2和HEp-2-NS1两种细胞中IFA、IFB滴度均为1∶8,PIV1、PIV3滴度均为1∶4;CPE结果显示,RSV在HEp-2和HEp-2-NS1培养2 d后病毒滴度分别为(2.67±0.16)和(3.67±0.20),差异有统计学意义(P<0.05);ADV在两种细胞中培养3 d后病毒滴度分别为(2.67±0.18)和(3.33±0.49),差异无统计学意义(P>0.05)。2CPE检测:相比HEp-2细胞,感染RSV的HEp-2-NS1细胞培养2 d后即可出现局部范围的细胞融合病变,病变范围占全视野的30%;4 d后可在镜下清楚观察到大范围的细胞融合病变,病变范围占全视野的95%。3临床标本评价:HEp-2-NS1和HEp-2两种细胞对临床患儿咽拭子RSV的初筛分离率分别为7.50%和3.75%,差异有统计学意义(P<0.05);CPE出现时间HEp-2-NS1为(3.77±0.90)d,而HEp-2为(4.66±0.80)d,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HEp-2-NS1细胞是一种新型的RSV鉴定细胞,为临床实验室快速分离培养RSV提供了合适的工具。

病原宏基因组高通量测序医疗机构本地化质量评价联合研究

目的:开展病原宏基因组高通量测序(mNGS)质量评价联合研究,为医疗机构(医院mNGS本地化建设提供参考经验。方法:参加单位使用本地化建设的mNGS流程,按方案要求检测参考品标本并回报结果。对检测性能及技术选型等因素进行统计分析。结果:来自全国17个省、直辖市的42家医院的47个科室参加本次研究,检测流程包括3种测序平台的10种测序仪。参加单位按研究方案完成质量评价参考品的测试,共回报49组有效数据,其中全部性能指标均为满分的占29%,各性能指标的满分占比分别为阳性符合率(准确性)73%、阴性符合率(特异性)92%、重复性47%、检出限71%,以及稳健性37%。实验流程中标本前处理、病原富集及核酸片段化的技术选型,是显著影响满分率的因素。更大的测序数据量与满分率呈正相关,而不同测序方案则无统计学差异。结论:本次联合研究提示,目前mNGS流程的整体稳定性仍有较大优化空间,实验室在开展本地化建设时应充分考虑影响检测系统稳定的各潜在因素,有助于保证日常运行的稳定可控。

白藜芦醇抗柯萨奇病毒作用机理研究

在非洲绿猴肾细胞(Vero E6)上接种柯萨奇B2病毒,采用细胞病变抑制法(Cytopathic effect inhibition Assay)和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,在预防、治疗和直接作用3种试验模式下探讨白藜芦醇体外对柯萨奇病毒的抑制作用。白藜芦醇体外抗病毒药效显示:(1)预防模式对柯萨奇病毒无抑制作用;(2)治疗和直接作用模式对柯萨奇病毒均有一定程度的抑制作用,且治疗模式(抑制率为71.5%)效果优于直接作用(抑制率为41.5%)。说明白藜芦醇对柯萨奇病毒具有体外抑制作用,其可能通过多个途径抑制病毒在宿主细胞内的复制。

新型冠状病毒肺炎疫情下治疗药物监测的临床应用与实验室防控策略

目的探讨当前新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情下治疗药物监测(TDM)的临床应用与实验室防控策略。方法归纳TDM在COVID-19患者治疗中的临床应用,结合新型冠状病毒的特点总结相关实验室防控策略。结果TDM的临床应用有利于安全合理用药,制订更精准的药物治疗方案,有效控制患者病情。TDM实验人员需接触相关的样本,操作过程中存在职业暴露风险,需要做好感染防控。结论TDM工作安全有效地开展,能为COVID-19临床治疗提供有力的帮助,同时降低实验人员的职业暴露风险。

交通事故结案处理专家系统的初步探讨

主要以两汽车间事故结案处理专家系统为例,结合专家系统和关系数据库技术。

厢式货车空气动力学特性及减小空气阻力的风洞实验研究

本文通过国产ＳＧ１４０ＩＤ型厢式货车缩比模型的测压和测力风洞试验，对该车基本型和两种改进方案的空气动力特性进行了系统的研究，分析空气阻力和空气升力的形成及变化，研究减小空气阻力的方案。综合分析试验结果表明，在驾驶室顶部加装导流罩有明显减阻效果，该方案切实可行。

汽车维修质量整体指标评估方法研究

运用以模糊数学为基础的综合评定法，研究对汽车维修质量整体指标进行评估。

汽车轮胎的合理使用

详细分析了轮胎气压、轮胎载荷、汽车行驶速度和前轮定位时轮胎寿命的影响。着重介绍了全国正在推广的子午线轮胎在轮胎气压、轮胎载荷、汽年行驶速度和前轮定位等方面的特点。在有关分析的基础上,提出了合理使用汽车轮胎的正确方法。