基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响。方法大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、依那普利(10 mg/kg)组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余5组建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,各组灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药2周。全自动生化分析仪检测大鼠血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化,试剂盒检测大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达,Western blot法检测大鼠肾组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NLRP3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织可见肾小管扩张,上皮细胞出现部分空泡化,肾间质内大量炎性细胞浸润、纤维细胞生成及胶原纤维沉积,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平、肾组织TGF-β1阳性表达、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷B2各剂量组大鼠肾脏病变逐渐减轻,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平,肾组织TGF-β1阳性表达,TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达均降低(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达均升高(P<0.05);与柴胡皂苷B2高剂量组比较,依那普利组上述指标无明显变化(P>0.05)。结论柴胡皂苷B2能够缓解UUO大鼠肾间质纤维化,改善肾功能和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的表达有关。

丹皮酚对大鼠肾间质纤维化的影响及其分子机制

目的研究丹皮酚(PAE)对大鼠肾间质纤维化的影响及其作用机制。方法将大鼠随机分为假手术(Sham)组、单侧输尿管梗阻(UUO)组、PAE小剂量(PAE-L)组、PAE中剂量(PAE-M)组、PAE大剂量(PAE-H)组及厄贝沙坦(IRB)组。除Sham组外,其余大鼠制备UUO模型。各组大鼠给予相应药物干预2周。检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达情况;观察肾组织病理特征,计算肾组织胶原容积分数(CVF)。结果与UUO组比较,PAE各剂量组大鼠血清Scr、BUN、8-OHdG水平降低,肾组织SOD与GPX活性升高,肾组织α-SMA、Col-Ⅰ、FN阳性表达降低,SIRT1与Nrf2蛋白表达升高,Masson染色显示肾组织CVF降低(均P<0.05),苏木精-伊红(HE)染色显示肾组织炎症细胞浸润、肾小管扩张等病理改变有不同程度改善;PAE改善大鼠肾间质纤维化作用呈剂量依赖性(P<0.05),大剂量PAE改善大鼠肾间质纤维化作用与IRB相当。结论PAE可减轻UUO所致大鼠肾间质纤维化,改善大鼠肾功能和氧化应激,其机制可能与激活SIRT1/Nrf2信号通路有关。

体外循环不阻断升主动脉低温心室颤动左心室引流技术对心肌保护作用的实验研究

目的检测内皮素、NO、丙二醛和超氧化物歧化酶（SOD）血液学指标及心肌组织局部内皮素受体A（ETA）mRNA的表达，评价体外循环不阻断升主动脉低温心室颤动左心室引流技术对心肌的保护作用，探讨更好的心肌保护方式。方法建立体外循环动物模型，实验动物分为对照组（停跳组）及实验组（心室颤动组），体外循环前、体外循环1h、体外循环2h、体外循环结束后1h4个时间点分别抽取静脉血，同时于各时间点分别钻取左心室壁局部心肌组织100mg。测定血浆内皮素、NO、丙二醛和SOD水平。用逆转录聚合酶链反应方法检测心肌ETA mRNA的表达。结果随体外循环时间延长，2组内皮素、丙二醛水平均有升高。于体外循环2h和体外循环结束后1h两个时间点，对照组内皮素、丙二醛水平明显高于实验组[（70．27±7．03）ng／L比（56．53±12．11）ng／L，（106．36±6．61）ng／L比（72．71±12．72）ng／L；（4．71±1．31）μmol／L比（3．32±0．82）μmol／L，（8．27±1．99）μmol／L比（4．38±1．02）μmol／L，均P〈0．01]；2组NO、SOD平均呈下降趋势，但实验组下降和缓，在后两个时间点，对照组NO、SOD水平明显低于实验组[（28．57±9．20）μmol／L比（45．36±16．59）μmol／L，（12．14±7．03）μmol／L比47．50±17．18）μmol／L；（7．23±2．59）μg/L比（17．69±7．96）μg／L，（2．78±0．88）μg／L比（18．52±10．30）μg／L，P〈0．05或P〈0．01]；2组ETA mRNA的表达水平均有升高，对照组升高幅度比实验组要高，体外循环1h、2h和体外循环结束后1h差异明显[（0．35±0．01）比（0．28±0．05），（0．49±0．05）比（0．31±0．04），（0．67±0．05）比（0．38±0．07），P〈0．01]。结论体外循环不阻断升主动脉低温心室颤动左心室引流技术对心肌具有良好保护作用。

HTK、UW保护液对肾移植器官保护作用比较的实验研究

目的 研究Histidine Tryptophan Ketoglutarate（HTK），University of Wisconsin（UW）两种不同保护液对于肾移植中肾脏的保护作用。方法 24只Sprague Dawley（SD）大鼠随机分为3组，对照组（C组）：供体肾脏摘除后，在4℃温度下置于Ringersolution中保存24h后进行肾移植；HTK组（H组）：供体肾脏摘除后。在4℃温度下置于HTKsolution中保存24h后进行肾移植；UW组（U组）：供体肾脏摘除后，在4℃温度下置于UWsolution中保存24h后进行肾移植。各组肾移植缺血再灌后6h，以血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（Creatinine），乳酸脱氢酶（LDH），门冬氨酸氨基转移酶（AST），肾小管损伤指数（tubular damage index，TBI）作为观察指标。结果 ①各项观察指标H组和U组均明显优于C组（P〈0．01）。②血清creatinine，LDH，AST：U组明显低于H组（P〈0．05）；TBI比较U组明显低于H组（P〈0．01）。结论 HTK和UW保护液对于肾移植中肾脏均有良好保护作用；UW保护液更具优势。

肺癌可溶性抗原与树突状细胞构建肿瘤疫苗的杀伤机制体外研究

目的:通过肺癌的可溶性抗原致敏的树突状细胞(DC)激活细胞毒性T细胞(CTL)的杀伤作用各个环节的研究,初步探讨其作用机制及影响条件.方法:从健康人外周血中提取外周血单核细胞(PBMC),加入GM-CSF和IL-4后,在第4日加入不同的促成熟因子,观察DC的表型变化及测定上清中的细胞因子情况.通过DC表面HLA-DR的表达来比较不同抗原致敏DC的优劣.应用不同浓度的肿瘤可溶性抗原(TSA),DC负载TSA的不同时间,不同活化时间的CTL及不同TAK与GLC-82细胞的效靶比来测定其中各种引起TAK最高杀伤活力的情况.结果:DC较好的促成熟因子是MCM,第7日时达到高峰;TSA是较好的致敏DC抗原;最佳效靶比为1∶50.结论:肺癌可溶性抗原是良好的DC致敏物,可在单核细胞条件培养基(MCM)协助下致敏并使DC成熟,表达更多的HLA-DR,高效激活T细胞.

内皮素在评价不阻断升主动脉低温室颤对心肌保护作用中的应用

①目的 探讨体外循环条件下低温室颤技术对心肌的保护作用。②方法 1 4只健康成年犬随机分为两组 ,低温停跳组(n =7)与低温室颤组 (n =7) ,分别检测两组手术前、手术 1、2小时和复跳后 1小时 4个时间点血内皮素 (ET)的水平。③结果 室颤组ET水平明显低于停跳组。④结论 通过内皮素水平的变化 ,说明体外循环条件下低温室颤技术是一种安全、有效的心肌保护方式 。

大鼠肾移植1000例经验总结

目的:对大鼠肾移植进行经验总结以指导实验与临床研究。方法:作者在2004-01/2009-07海德堡大学移植中心期间,采用大鼠肾动、静脉与腹主动脉、腔静脉行端侧吻合。对于急性肾移植模型,输尿管直接植入膀胱内;对于慢性肾移植模型,输尿管采用端端吻合法。术中直接切除对侧肾脏,完成大鼠肾移植1000例,并对其进行总结。结果:只要供体肾脏冲洗良好,吻合时暖缺血时间小于30min,手术时间60min左右,吻合技术娴熟,移植成功率达98%以上。结论:该实验模型安全、方便、可行。肾移植成功的关键是手术技术。

脐血管去内皮细胞后血管顺应性及抗原表达量变化的实验研究

目的 评价酶原法、低温法去除脐血管内皮细胞的优劣，为研究开发符合生理、无排斥、结构和功能类似自体的血管支架提供理论依据。方法 自愿捐赠的健康、足月顺产、无损伤胎儿新鲜脐动、静脉各60根，每根长10cm，抗生素液37C灭菌24h后，分为正常组、酶原组和冷冻组（n=20）。分组时每根血管取0．5cm细菌培养。酶原组加入0．1％Ⅱ型胶原酶后夹闭两端，37C水浴消化5、10、15、20min，去除内皮细胞；冷冻组置入冷存管中，加入DMEM培养液，逐步冷冻，最后置入液氮中，贮藏24h以上，37C水浴30～60s快速复温，无菌生理盐水灌冲血管腔数次，去除残留血管内皮细胞；正常组4CKerb’s保存液恒温存放。将标本分别行HE、弹力纤维及胶原纤维染色及扫描电镜观察；比较各组血管顺应性差异；采用免疫组织化学染色测定人类白细胞抗原ABC（human leukocyte antigen ABC，HLA-ABC）和HLA-DR，分析抗原表达量的变化。结果 各组标本均无细菌生长。组织学观察：冷冻组，内皮细胞完全去除，脐动脉显示内皮下发达的纵行平滑肌层，脐静脉可见内弹力膜；酶原组，胶原酶作用20min，血管内皮细胞完全去除，脐动脉露出内层纵行平滑肌细胞，脐静脉显示内皮下层。血管顺应性：冷冻组脐血管顺应性大于正常组，正常组大于酶原组，但组间差异均无统计学意义（P〉0．05）；脐静脉的顺应性约为脐动脉的2～3倍。HLA-ABC、HLA-DR免疫组织化学染色：冷冻组、酶原组与正常组比较，脐动、静脉抗原性均明显降低（P〈0．01）；冷冻组与酶原组比较，脐动、静脉HLA-ABC、HLA-DR抗原表达量均降低，且差异有统计学意义（P〈0．01）。结论冷冻法及0．1％Ⅱ型胶原酶作用20min均可完整去除脐血管内皮细胞，低温冷冻法优于酶原法。

不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术对犬肺组织保护作用的实验研究

目的:探讨体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术对犬肺组织的影响。方法:14只健康成年杂种犬随机分为2组。常规建立体外循环,实验组:不阻断升主动脉,血流降温加心包腔内冰盐水诱导室颤;对照组:阻断升主动脉,经主动脉根部灌注冷晶体停跳液心脏停跳。用ELISA法、免疫组化法检测IL-8、NF-κB及ICMA-1的表达及光镜下观察犬肺组织形态学变化。结果:实验组血清IL-8浓度水平显著低于对照组(P<0.05)。实验组肺组织病理损伤较对照组轻;在CPB结束时,两组肺组织的NF-κB和ICAM-1的积分吸光度值(A值)显著增高(P<0.05),但对照组肺组织的NF-κB及ICAM-1的A值显著高于实验组(P<0.05)。结论:体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术可减轻肺组织的损伤,对肺功能有一定的保护作用。

N-乙酰半胱氨酸对大鼠心脏移植缺血再灌注损伤时基质金属蛋白酶的影响

目的观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理对心脏移植缺血再灌注损伤(IRI)时基质金属蛋白酶(MMP)的影响,并探讨其可能的机制。方法健康雄性Lewis大鼠60只,随机分为3组。对照组:摘取供体心脏前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射生理盐水0.5 ml;供体预处理组:摘取供心前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg;受体预处理组:受体于移植前30 min经受体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg。供心冷藏于4℃组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液(HTK)18 h后建立大鼠腹腔异体异位心脏移植模型。移植后24 h光镜下观察心肌胶原含量的变化;免疫组织化学法检测心肌组织中MMP2/9蛋白表达;采用实时PCR检测MMP2和基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)mRNA表达。结果 NAC供体/受体预处理组心肌胶原含量明显低于对照组(4.49±0.62/5.88±0.96 vs.10.43±0.93,P<0.01);免疫组织化学法半定量评分显示NAC供体/受体预处理组MMP2/9蛋白含量明显低于对照组(1.60±0.22/2.13±0.23,1.63±0.18/2.78±0.16 vs.3.00±0.15/3.78±0.15,P<0.01),受体预处理组心肌组织中MMP2 mRNA明显低于对照组(1.45±0.72vs.2.77±1.62,P<0.05),而供体预处理组TIMP2 mRNA明显高于对照组(2.59±2.12 vs.0.63±0.50,P<0.05)。结论在大鼠心脏移植中NAC对供心IRI具有保护作用,可能是通过NAC直接抑制活性氧所致的MMP2/9升高,激活TIMP2,减轻了心肌IRI。

前列腺癌的相关危险因素分析

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤，其发病原因和机制尚不明了，一般认为与遗传、环境、性激素、生活方式、职业因素、生物性病原感染等多种因素相关。预计到2050年前列腺癌的发病率将增加2．5倍。明确其致病机制是进行早期诊断和预防的关键。本研究就近年来前列腺癌的研究综述如下。

体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流对犬脑组织保护作用的实验研究

目的:探讨体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术对犬脑组织的影响。方法:14只健康成年杂种犬随机分为实验组和对照组,每组7只。右侧第4肋间进胸,常规建立体外循环。实验组不阻断升主动脉,血流降温到28℃,心包腔内注入4℃生理盐水诱导室颤,同时行充分左心引流;对照组阻断升主动脉,经主动脉根部灌注冷晶体停跳液。检测相应时间点血清IL-8和S100β蛋白浓度;检测CPB前及结束时脑组织S100β蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达。结果:实验组与对照组的血清IL-8、S100β的浓度水平比较差异有统计学意义(P<0.05),各时间点之间也存在差异(P<0.05)。两组在CPB前IL-8、S100β浓度无明显差异,转机后均开始升高,且均在CPB2h达到高峰,并于CPB3h逐渐下降,但仍然高于CPB前水平。脑组织免疫组化显示:两组脑组织的S100β及NSE的积分光密度值比较差异有统计学意义(P<0.05)。在CPB结束时,两组脑组织的S100β和NSE的积分光密度值比CPB前显著增高(P<0.01)。结论:体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术可减轻全身炎症反应,减少脑栓塞发生率,有利于脑保护,具有一定的临床价值。

树突状细胞疫苗对人肺腺癌GLC-82细胞体外杀伤作用的实验观察

目的通过建立负载人肺腺癌细胞株GLC-82可溶性抗原的树突状细胞（DC）疫苗，探讨应用DC疫苗的致敏特异性杀伤性T细胞（CTL）体外杀瘤细胞的可行性和实验条件，为后期临床应用提供实验依据。方法通过用定量摩尔氯化钾提取法获得人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽（TSA），从人外周血单核细胞（PBMC）中用GM-CSF、白细胞介素-4和肿瘤坏死因子-α体外诱导扩增并鉴定获取DC，构建DC疫苗；利用DC疫苗刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖，诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL的可行性及MTT法检测该CTL对GLC-82、肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的体外杀伤效应。结果人PBMC体外经7d诱导出的DC，经形态学、免疫组化证实具有典型的树突状细胞特性；负载GLC-82抗原的DC疫苗能有效诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL，最适浓度为1：10；诱导活化的CTL对靶细胞的杀伤活性明显高于未经肿瘤抗原致敏的组。结论诱导培养人外周血PBMC中的Mo可获取大量DC，诱导出的DC功能较强，适宜临床应用；DC疫苗能强烈刺激初始型同种异体T淋巴细胞增殖产生CD8^＋表达增加的CTL；激活的CTL对肺癌靶细胞发挥高效而特异的细胞娄效应,时非肺组织瘤靶细胞也具有非特异性杀伤效应。